Name: Synthese von zusammengesetzten Riesen-Unilamellenvesikeln: Ein biomimetisches Modell von Keimzellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T13:10:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: Erfahren Sie die Synthese zusammengesetzter Riesen-Unilamellenvesikel durch Elektroformation und osmotischen Schock. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Elektroporation und Zelldeformation in biomimetischen Modellen.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Cholesterol (Sigma grade, 99%)</td><td>Avanti Polar Lipids, Inc.</td><td>C8667</td><td>Für sGUV Synthese</td></tr><tr><td>Choloroform</td><td>Merck Life Science Pvt. Ltd.</td><td>DA2P711602</td><td>als Lösungsmittel für die Herstellung von Lipid-Stammlösung verwendet</td></tr><tr><td>DMPC</td><td>Avanti Polar Lipids, Inc.</td><td>850345C</td><td>Für sGUV Synthese</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Hayman</td><td>F204325</td><td>Zur Reinigung von ITO-Objektträgern</td></tr><tr><td>FITC-DEXTRAN (4 Kda-MW)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>466994</td><td>Zur Einkapselung in die inneren Vesikel von cGUV</td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-7021</td><td>Zur Herstellung von Glucose-Lösung, verwendet für osmotischen Schock von sGUV, suspendiert in der Saccharose-Lösung</td></tr><tr><td>Liss Rhod PE</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>810150C-1MG</td><td>Zum Anfärben von Lipidmolekülen</td></tr><tr><td>Nile red</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>72485</td><td>Zum Anfärben von cGUV- und sGUV-Membranen</td></tr><tr><td>Sodium chloride (NaCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1936060521</td><td>Zur Herstellung von Salz-Stammlösung, zur Änderung der Leitfähigkeit der cGUV-Kompartimente</td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9378</td><td>Für Saccharose-Lösung als Hydrationsmedium der Elektroformierungskammer</td></tr><tr><td>Geräte</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cavitly-Objektträger</td><td>Blue star</td><td></td><td>cGUV-Suspension zur mikroskopischen Beobachtung</td></tr><tr><td>cMOS pco.edge 4.2 Kamera</td><td>Excelitas</td><td>61009524</td><td>Für fluoreszierende monochromatische Bilder und DIC-Bildgebung</td></tr><tr><td>Deckglas (22 x 60 mm)</td><td>Blue star</td><td></td><td>Zum Abdecken von Kavitäts-Objektträgern</td></tr><tr><td>Eppendrof Elektrofusionskammer</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>sGUV-Suspension in der Kammer für osmotische und mikroskopische Beobachtung platziert, eine andere einfache Kammer kann ebenfalls verwendet werden</td></tr><tr><td>Funktionsgenerator (Dualkanal)</td><td>Tektronix</td><td>AFG3022C</td><td>Funktionsgenerator zur Bereitstellung eines Wechselstromfeldes für die Elektroformierungskammer</td></tr><tr><td>Inkubator</td><td>lokale Anpassung</td><td></td><td>Elektroformierungskammer bei 40 °C platziert</td></tr><tr><td>ITO-Objektträger</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>576352-10PAK</td><td>ITO-Objektträger, verwendet in der Elektroformierungsmethode</td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Invertmikroskop</td><td>Nikon</td><td>TE2000-U</td><td>Zur Visualisierung von sGUV und cGUV</td></tr><tr><td>Silikonfolie (3 mm Dicke)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GF49463141</td><td>Zum Abstandhalten in der Elektroformierungskammer</td></tr><tr><td>Spritze (2 mL)</td><td>Becton Dickinson India Pvt Ltd.</td><td>300844</td><td>Verwendet zum Injizieren eines Hydrationsmediums und zur Ernte der sGUV aus der Elektroformierungskammer</td></tr><tr><td>Zeiss Konfokalmikroskop-Setup</td><td>Zentraleinrichtung des IIT Bombay</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

synthese von zusammengesetzten riesen-unilamellenvesikeln: ein biomimetisches modell von keimzellen

Synthesis of Compound Giant Unilamellar Vesicles: A Biomimetic Model of Nucleate Cells

Synthese von zusammengesetzten Riesen-Unilamellenvesikeln: Ein biomimetisches Modell von Keimzellen

A simple Giant unilamellar vesicle (sGUV) is a micron-sized spherical vesicle, which is composed of a lipid bilayer that encloses an aqueous solution ...

synthesis-compound-giant-unilamellar-vesicles-biomimetic-model

Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

Mikrofluidik-Strahl gegen eine Tröpfchen Schnittstelle Lipid-Doppelschicht bietet eine zuverlässige Möglichkeit, die Kontrolle über Vesikel mit Membran-Asymmetrie, die Aufnahme von Transmembranproteinen und Kapselung von Material zu erzeugen. Diese Technik kann angewandt werden, um eine Vielzahl von biologischen Systemen, in denen unterteilte Biomolekülen gewünscht studieren.

Lipiddoppelschicht Vesicle Erzeugung anhand Mikrofluidik Jetting

Elektroformation, und Gel-unterstützte Schwellung - Die Wiederherstellung der Transmembranprotein, KvAP, in riesige unilamellare Vesikel (GUVs) ist für zwei Dehydration-Rehydrierung Methoden nachgewiesen. In beiden Verfahren werden kleine unilamellare Vesikel, die das Protein enthält, zusammengeschmolzen, um GUVs die dann durch Fluoreszenzmikroskopie und Patch-Clamp-Elektrophysiologie untersucht werden können zu bilden.

Rekonstitution der ein Transmembranprotein, das spannungsgesteuerten Ionenkanal, KvAP, in Riesen unilamellare Vesikel für Mikroskopie und Patch-Clamp-Studien

Riesenvesikel mit hochgepackten mikrometergroßen Komponenten sind nützliche Zellmodelle. Das Wasser-in-Öl-Emulsionszentrifugationsverfahren ist ein einfaches, leistungsstarkes Werkzeug zur Herstellung von riesigen Vesikeln mit verkapselten Materialien.

Herstellung von Riesenvesikeln Encapsulating Microspheres durch Zentrifugation einer Wasser-in-Öl-Emulsion

Wir präsentieren eine Technik zur kontaktlosen Mikromanipulation von Vesikeln, mit lokalisierten Kalzium Ionen Steigungen. Mikroinjektion einer Kalzium-Ionen-Lösung, in der Nähe einer riesigen Lipid-Bläschen, wird genutzt, um die Lipidmembran, wodurch die Produktion der Membran röhrenförmige Ausstülpungen umzugestalten.

Membran Umbau des riesigen Vesikel in Reaktion auf lokalisierte Kalzium Ionen-Gradienten

Wir zeigen die einzellige Kultur von Bakterien in riesigen Vesikeln (GVs). GVs, die Bakterienzellen enthalten, wurden nach der Tröpfchentransfermethode hergestellt und auf einer unterstützten Membran auf einem Glassubstrat zur direkten Beobachtung des Bakterienwachstums immobilisiert. Dieser Ansatz kann auch an andere Zellen angepasst werden.

Bakterielle Zellkultur auf der Einzelzellebene im Riesenvesikel

Ziel des Protokolls ist es, die mechanischen Eigenschaften von Riesenvesikeln durch Mikropipette-Aspiration zuverlässig zu messen.

Verdunkelung von Riesen-Unilamellar-Hybridvesikeln durch Elektroformation und Messung ihrer mechanischen Eigenschaften durch Micropipette Aspiration

Dieser Artikel stellt eine einfache Methode zur schnellen Herstellung von riesigen unilamellären Vesikeln mit verkapselten zytoskelettalen Proteinen vor. Die Methode erweist sich als nützlich für die Bottom-up-Rekonstitution von Zytoskelettstrukturen in Enstrikt- und Zytoskelett-Membran-Interaktionen.

Schnelle Verkapselung des rekonstituierten Zytoskeletts in riesigen unilamellären Vesikeln

In diesem Manuskript demonstrieren wir die experimentellen Techniken zur Verkapselung des F-Aktin-Zytoskeletts in riesige unilamellare Lipidvesikel (auch Liposomen genannt) und die Methode zur Bildung einer Kortex-bioimitierenden F-Aktin-Schicht am inneren Blättchen der Liposomenmembran.

In vitro Rekonstitution des Aktinzytoskeletts in riesigen unilamellaren Vesikeln

Dieser Leitfaden für Einsteiger stellt ein allgemeines Protokoll für die Herstellung von Riesen-Unilamellären Vesikeln (GUVs) mit der Tröpfchentransfermethode vor, diskutiert die kritischen Schritte und gibt Einblicke, um mögliche Anpassungen zu unterstützen, die für verschiedene Anwendungen, einschließlich synthetischer Biologie und Mikrorobotik, erforderlich sind.

Mit der Tröpfchentransfer-Methode lassen sich riesige unilamellare Vesikel zuverlässig präparieren

In diesem Artikel wird eine einfache Ein-Topf-Rekonstitution von Zytoskelett-Netzwerken innerhalb von phasengetrennten Riesenvesikeln vorgestellt. Die Methode kann verallgemeinert und auf die Verkapselung oder den Einschluss einer Vielzahl von Biomolekülen angewendet werden.

In vitro Rekonstitution von Zytoskelett-Netzwerken in phasengetrennten riesigen unilamellären Vesikeln (GUVs)

Erfahren Sie die Synthese zusammengesetzter Riesen-Unilamellenvesikel durch Elektroformation und osmotischen Schock. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Elektroporation und Zelldeformation in biomimetischen Modellen.

Synthese von zusammengesetzten Riesen-Unilamellenvesikeln: Ein biomimetisches Modell von Keimzellen

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