Name: In vitro Kultur für H5N1-spezifische Enten-T-Zellen und Nachweis von Immunantworten mittels intrazellulärer Zytokin-Färbemethode (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-30T14:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Erfahren Sie die In-vitro-Kultur H5N1-spezifischer Enten-T-Zellen und den Nachweis von Immunantworten mittels intrazellulärer Zytokin-Färbung. Diese Methode ermöglicht die Quantifizierung von IFN-γ und liefert wertvolle Einblicke in die aviäre Immunität gegen virale Infektionen.

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<table><tbody><tr><td>1,5 mL MICRO-Zentrifugenröhrchen</td><td>Biosharp</td><td>Cat#BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Zentrifugenröhrchen</td><td>Labselect</td><td>Cat#CT-002-15A</td><td></td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol (55 mM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat#M6250-100ML</td><td></td></tr><tr><td>48-Well-Gewebekulturplatte (unbehandelt, flacher Boden)</td><td>Biofil</td><td>Cat#TCP000048</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Zentrifugenröhrchen</td><td>Labselect</td><td>Cat#CT-002-50A</td><td></td></tr><tr><td>96-Well-QPCR-Platten ohne Rand Labselect</td><td></td><td>Cat#PP-96-NS-0100</td><td></td></tr><tr><td>BD Cytofix/Cytoperm Kit</td><td>BD Bioscience</td><td>Cat#BD 554714</td><td></td></tr><tr><td>Brefeldin A (BFA)</td><td>BD Bioscience</td><td>Cat#347688</td><td></td></tr><tr><td>Zellkultur CO2 Inkubator</td><td>Thermo</td><td>Fisher Heracell 150i GP</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>CFSE-Markierungskit</td><td>Abcam</td><td>Cat#ab113853</td><td></td></tr><tr><td>ChamQ SYBR qPCR Master Mix</td><td>Vazyme</td><td>Cat#Q341-02</td><td></td></tr><tr><td>Duck peripheral blood lymphocyte isolation kit</td><td>Tbdscience</td><td>Cat#LTS1090D</td><td></td></tr><tr><td>Evo M-MLV RT Premix</td><td>Accurate Biotechnology</td><td>Cat#AG11706</td><td></td></tr><tr><td>FastPure Zell-/Gewebe-Gesamt-RNA-Isolierung Kit V2</td><td>Vazyme</td><td>Cat#RC112-01</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>Gibco</td><td>Cat#10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Durchflusszytometer</td><td>Beckman Coulter</td><td>BA43347</td><td></td></tr><tr><td>Durchflussschlauch</td><td>Beyotime</td><td>Cat#FFC005</td><td></td></tr><tr><td>FlowJo v10.8.1</td><td>Tree Star</td><td>https://www.flowjo.com</td><td></td></tr><tr><td>Ziege Anti-Maus 488, 1:50 Verdünnung</td><td>Abbkine</td><td>Cat#A23210</td><td></td></tr><tr><td>Ziege Anti-Maus IgG2b, FITC, 1:50 Verdünnung</td><td>Southern Biotech</td><td>Cat#1091-31</td><td></td></tr><tr><td>Ziege Anti-Maus IgG3, PE, 1:250 Verdünnung</td><td>Southern Biotech&nbsp;</td><td>Cat#1100-09S</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8.0.2</td><td>GraphPad Software</td><td>https://www.graphpad-prism.cn</td><td></td></tr><tr><td>H5N1 AIV Stamm DK383</td><td>National and Regional Joint Engineering Laboratory for Medicamen of Zoonosis Prevention and Control</td><td>A/Duck/Guangdong/383/2008</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin (200 mM)</td><td>Gibco</td><td>Cat#25030081</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Motic</td><td>AE2000</td><td></td></tr><tr><td>Maus Anti-Ente CD4, 1:50 Verdünnung</td><td>Bio-Rad</td><td>Cat#MCA2478</td><td></td></tr><tr><td>Maus Anti-Ente CD8&alpha;, 1:50 Verdünnung</td><td>GeneTex&nbsp;</td><td>Kat#GTX41834</td><td></td></tr><tr><td>Maus Anti-Ente IFN-& gamma; mAb, 1:10 Verdünnung</td><td>Hergestellt in unserem Labor&nbsp;</td><td></td><td></td>NA</tr><tr><td>NanoDrop One Spektralphotometer</td><td>Thermo Fisher</td><td>AZY1603209</td><td></td></tr><tr><td>NEAA (nicht essentiell</td><td>Gibco</td><td>Cat#11140-050</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>Cat#10010023</td><td></td></tr><tr><td>PCR Thermocycler</td><td>Biometra</td><td>Biometra Tone 96G</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin-Lösung</td><td>Gibco</td><td>Cat#15070063</td><td></td></tr><tr><td>Real-Time PCR-System</td><td>Applied Biosystems</td><td>ABI7500</td><td></td></tr><tr><td>rekombinantes humanes IL-2 (10 &mu; g)</td><td>USCNK</td><td>Cat#RPA111Ga01</td><td></td></tr> Red <tr><td>Blood Cell Lysis Buffer</td><td>Tbdscience</td><td>Cat#NH4CL2009</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco</td><td>Cat#11875-119</td><td></td></tr><tr><td>Natriumpyruvat (100 mM)</td><td>Gibco</td><td>Cat#11360-070</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat#93595</td><td></td></tr><tr><td>Zwei Wochen alte Stockenten (Sheldrake)</td><td>eine Entenfarm in Guangzhou</td><td>NA</td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro kultur für h5n1-spezifische enten-t-zellen und nachweis von immunantworten mittels intrazellulärer zytokin-färbemethode

In Vitro Culture for H5N1-Specific Duck T Cells and Detection of Immune Responses Using Intracellular Cytokine Staining Method

Dieses Protokoll wurde auf der Grundlage einer früheren Studie über den Nachweis antigenspezifischer T-Zell-Effektorantworten bei Enten entwickelt20. Der erste Schritt des Experiments umfasst die In-vitro-Kultur von virusspezifischen T-Zellen, die als Grundlage für nachfolgende Effektor-Response-Studien dienen. Zunächst wurden APCs inkubiert und mit Effektorzellen cokultiviert. Morphologische Beobachtungen zeigten, dass die Zellen nach der Proliferation ein Clusterwachstum zeigten (<stron...

In vitro Kultur für H5N1-spezifische Enten-T-Zellen und Nachweis von Immunantworten mittels intrazellulärer Zytokin-Färbemethode

The in vitro culture of T cells is a critical method for studying immune responses, viral infections, and potential therapeutic strategies. However, no ...

in-vitro-culture-for-h5n1-specific-duck-t-cells-detection-immune

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Wir entwickelten ein in vitro Assay, um die Rolle von immunWege in der Regulation der Zytokin-Sekretion von HIV-spezifischen CD4 + T-Zellen zu untersuchen.

In vitro-Test, um die Auswirkungen von immun Pathways auf die HIV-spezifischen CD4 T-Zell-Effektor-Funktion auswerten

Anders als zellfreie HIV-1-Partikeln infiziert sind CD4 + -T-Zellen wirksam durch plasmacytoid dendritischen Zellen (pDC) abgetastet. Diese Handschrift beschreibt ein Verfahren, bei peripheren mononukleären Blutzellen (PBMCs) oder isolierten pDCs co-kultiviert, das mit HIV-1 infizierte T-Zellen, um angeborene Erfassung durch pDCs bewerten, wie durch Freisetzung von Typ-I-IFN beurteilt.

Beurteilung der Innate Sensing von HIV-1-infizierten CD4<sup&gt; +</sup&gt; T-Zellen durch Plasmazytoide Dendritische Zellen unter Verwendung eines<em&gt; Ex-vivo-</em&gt; Co-Kultursystem.

Die Fähigkeit, T-Zell-Antworten im Detail in vivo Überwachung ist wichtig für die Entwicklung des Verständnisses der Immunantwort. Hier beschreiben wir die Verwendung von fluoreszierenden Zielarrays (FHA) in einem in vivo-T-Zell-Assay,&gt; 250 Parameter beurteilt gleichzeitig mittels Durchflusszytometrie.

Die Verwendung von fluoreszierenden Ziel Arrays zur Beurteilung der T-Zell-Antworten<em&gt; In-vivo-</em

Zwei auf Durchflusszytometrie basierende Methoden – ein in vitro T-Zell-Priming-Assay und intrazelluläre Zytokinfärbung – wurden verwendet, um die Antigenpräsentationskapazität von dendritischen Zellen und antigenspezifische T-Zell-Antworten auf eine West-Nil-Virus-mutierte Infektion bei Mäusen zu messen.

In-vitro-Analyse Myd88-vermittelte zelluläre Immunantwort gegen das West-Nil-Virus-Infektion Mutantenstamm

Es besteht ein allgemeiner Mangel an Wissen darüber, wie Impfstoffe wirken. Hier schlagen wir die kombinierte Verwendung von reverser Genetik und chimären Knochenmarkmäusen vor, um Einblicke in die frühen Immunantworten des Wirts auf Impfstoffe zu erhalten, mit besonderem Fokus auf dendritische Zellen und T-Zell-Immunität.

Die intranasale Verabreichung von rekombinantem Influenza Vaccines in chimären Maus-Modelle zu Mucosale Immunität Studieren

Influenza A-Viren (IAVs) sind wichtige Humanpathogene Atemwege. Die Pathogenität von IAVs verstehen und neuartigen Impfstoff präklinischen Erprobung durchführen, sind Tiermodelle imitiert menschliche Physiologie erforderlich. Hier beschreiben wir Techniken zur Bewertung IAV Pathogenese, humorale Reaktionen und Wirksamkeit des Impfstoffes mit einem Maus-Modell der Infektion.

Influenza-A-Virus-Studien in einem Mausmodell der Infektion

Wir beschreiben eine Methode, um der Aktivierung des Fc-vermittelten Effektor-Funktionen durch Antikörper dieses Ziel der Influenza Virus Hämagglutinin messen. Dieser Test kann auch angepasst werden, um die Fähigkeit der monoklonale Antikörper oder polyklonalen Seren gezielt andere virale Oberfläche Glykoproteine induzieren Fc-vermittelten Immunität zu beurteilen.

Eine Methode zur Bewertung von Fc-vermittelten Effektor-Funktionen durch Influenza Hämagglutinin spezifische Antikörper induziert

Die Entwicklung der Interferon-Gamma ELISpot Assay für Meerschweinchen PBMCs ermöglicht die Charakterisierung der T-Zell-Reaktionen in diesem hochaktuellen Modell für die Untersuchung von Infektionskrankheiten. Wir haben den Test zur Messung der T-Zell-Antworten intradermale Bereitstellung von DNA-Impfstoffen angewandt.

Optimierte Interferon-Gamma ELISpot Assay zur Maßnahme T-Zell-Antworten im Meerschweinchen-Modell nach der Impfung

Dieses Papier beschreibt Protokolle zur Bewertung der Tfh- und GC-B-Antwort im Mausmodell einer Influenza-Virusinfektion.

Bewertung von T Follicular Helper Cells und Germinal Center Response During Influenza A Virus Infection in Mice

Dieses Protokoll beschreibt einen experimentellen Prozess zur Herstellung hochtiter infektiöser viraler pseudotypisierter Partikel (pp) mit Hüllglykoproteinen aus zwei Influenza-A-Stämmen und wie ihre Infektiosität bestimmt werden kann. Dieses Protokoll ist sehr anpassungsfähig, um pps von jeder anderen Art von umhüllten Viren mit verschiedenen Hüll-Glykoproteinen zu entwickeln.

Herstellung von hochtiterinfektiösen Influenza-Pseudotyppartikeln mit Hülllykoproteinen aus hoch pathogenen H5N1- und Avian H7N9-Viren

Hier beschreiben wir ein Protokoll für die Verpackung von Pseudoviren und die Messung der Antikörper-neutralisierenden Aktivität.

Herstellung von pseudotypisierten H5-Aviären Influenzaviren mit Calciumphosphat-Transfektionsmethode und Messung der Antikörperneutralisationsaktivität

Erfahren Sie die In-vitro-Kultur H5N1-spezifischer Enten-T-Zellen und den Nachweis von Immunantworten mittels intrazellulärer Zytokin-Färbung. Diese Methode ermöglicht die Quantifizierung von IFN-γ und liefert wertvolle Einblicke in die aviäre Immunität gegen virale Infektionen.

In vitro Kultur für H5N1-spezifische Enten-T-Zellen und Nachweis von Immunantworten mittels intrazellulärer Zytokin-Färbemethode (Video) | JoVE Journal

In vitro Kultur für H5N1-spezifische Enten-T-Zellen und Nachweis von Immunantworten mittels intrazellulärer Zytokin-Färbemethode

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