Name: MicroRNA-Amplifikation und -Erkennung durch In-situ-Hybridisierung mit gesperrten Nukleinsäuren als neuartige Detektions- und Quantifizierungsmethode (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-07T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: Erfahren Sie die simultane Detektion von microRNAs und Proteinen in FFPE-Gewebe mittels Tandem-Immunfluoreszenz-Hybridisierung. Diese Methode ermöglicht räumliche Analyse und direkte Quantifizierung für Krebsforschung.

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<ol><li>Smolarz, B., Nowak, A. Z., Romanowicz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+cancer-epidemiology%2C+classification%2C+pathogenesis+and+treatment+%28review+of+literature%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Breast cancer-epidemiology, classification, pathogenesis and treatment (review of literature).</a> Cancers. 14 (10), 2569(2022).</li>
<li>Davis-Dusenbery, B. N., Hata, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microrna+in+cancer%3A+The+involvement+of+aberrant+microrna+biogenesis+regulatory+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Cancer%22%5BJournal%5D)">Microrna in cancer: The involvement of aberrant microrna biogenesis regulatory pathways.</a> Genes Cancer. 1 (11), 1100-1114 (2010).</li>
<li>Peng, Y., Croce, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+microRNAs+in+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Targeted+Ther%22%5BJournal%5D)">The role of microRNAs in human cancer.</a> Signal Transduct Targeted Ther. 1 (1), 15004(2016).</li>
<li>Shi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mirnas+and+cancer%3A+Key+link+in+diagnosis+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Mirnas and cancer: Key link in diagnosis and therapy.</a> Genes. 12 (8), 1289(2021).</li>
<li>Juźwik, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+dysregulation+in+neurodegenerative+diseases%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">MicroRNA dysregulation in neurodegenerative diseases: A systematic review.</a> Prog Neurobiol. 182, 101664(2019).</li>
<li>Pauley, K. M., Cha, S., Chan, E. K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microrna+in+autoimmunity+and+autoimmune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Autoimmun%22%5BJournal%5D)">Microrna in autoimmunity and autoimmune diseases.</a> J Autoimmun. 32 (3-4), 189-194 (2009).</li>
<li>Lee, Y. S., Dutta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micrornas+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rev+Pathol+Mech+Dis%22%5BJournal%5D)">Micrornas in cancer.</a> Ann Rev Pathol Mech Dis. 4 (1), 199-227 (2009).</li>
<li>Thomson, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+gene+regulatory+properties+of+argonaute-bound+small+rnas+of+diverse+genomic+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Assessing the gene regulatory properties of argonaute-bound small rnas of diverse genomic origin.</a> Nuc Acids Res. 43 (1), 470-481 (2015).</li>
<li>Kim, Y. K., Han, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nobel-winning+microRNA%2C+the+microRNAestro+of+gene+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cells%22%5BJournal%5D)">Nobel-winning microRNA, the microRNAestro of gene silencing.</a> Mol Cells. 47 (11), 100123(2024).</li>
<li>Lai, X., Eberhardt, M., Schmitz, U., Vera, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systems+biology-based+investigation+of+cooperating+microRNAs+as+monotherapy+or+adjuvant+therapy+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Systems biology-based investigation of cooperating microRNAs as monotherapy or adjuvant therapy in cancer.</a> Nuc Acid Res. 47 (15), 7753-7766 (2019).</li>
<li>Garzon, R., Marcucci, G., Croce, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+micrornas+in+cancer%3A+Rationale%2C+strategies+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Disc%22%5BJournal%5D)">Targeting micrornas in cancer: Rationale, strategies and challenges.</a> Nat Rev Drug Disc. 9 (10), 775-789 (2010).</li>
<li>Jiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA%3A+The+impact+on+cancer+stemness+and+therapeutic+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">MicroRNA: The impact on cancer stemness and therapeutic resistance.</a> Cells. 9 (1), 8(2019).</li>
<li>Lin, B., Jiang, J., Jia, J., Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+exosomal+miRNA+biosensing+for+liquid+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Recent advances in exosomal miRNA biosensing for liquid biopsy.</a> Molecules. 27 (21), 7145(2022).</li>
<li>Farrell, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+identification+of+circulating+miRNAs+in+bovine+serum+and+their+potential+as+novel+biomarkers+of+early+Mycobacterium+avium+subsp.+paratuberculosis+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The identification of circulating miRNAs in bovine serum and their potential as novel biomarkers of early Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis infection.</a> PLoS One. 10 (7), e0134310(2015).</li>
<li>Aparicio-Puerta, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Srnabench+and+srnatoolbox+2022+update%3A+Accurate+mirna+and+sncrna+profiling+for+model+and+non-model+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Srnabench and srnatoolbox 2022 update: Accurate mirna and sncrna profiling for model and non-model organisms.</a> Nuc Acid Res. 50 (W1), W710-W717 (2022).</li>
<li>Friedländer, M. R., Mackowiak, S. D., Li, N., Chen, W., Rajewsky, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mirdeep2+accurately+identifies+known+and+hundreds+of+novel+microRNA+genes+in+seven+animal+clades%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Mirdeep2 accurately identifies known and hundreds of novel microRNA genes in seven animal clades.</a> Nuc Acid Res. 40 (1), 37-52 (2012).</li>
<li>Chou, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mirtarbase+2016%3A+Updates+to+the+experimentally+validated+miRNA-target+interactions+database%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Mirtarbase 2016: Updates to the experimentally validated miRNA-target interactions database.</a> Nuc Acid Res. 44 (D1), D239-D247 (2016).</li>
<li>Porichis, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+detection+of+miRNAs+and+gene-specific+mRNA+at+the+single-cell+level+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">High-throughput detection of miRNAs and gene-specific mRNA at the single-cell level by flow cytometry.</a> Nat Commun. 5 (1), 5641(2014).</li>
<li>Eichert, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+crystal+structure+of+an+%27all+locked%27+nucleic+acid+duplex%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">The crystal structure of an 'all locked' nucleic acid duplex.</a> Nuc Acid Res. 38 (19), 6729-6736 (2010).</li>
<li>Viratham Pulsawatdi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+multiplex+immunofluorescence+and+digital+pathology+workflow+for+the+characterisation+of+the+tumour+immune+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Oncol%22%5BJournal%5D)">A robust multiplex immunofluorescence and digital pathology workflow for the characterisation of the tumour immune microenvironment.</a> Mol Oncol. 14 (10), 2384-2402 (2020).</li>
<li>Janati-Idrissi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Looking+for+a+needle+in+a+haystack%3A+De+novo+phenotypic+target+identification+reveals+hippo+pathway-mediated+mir-202+regulation+of+egg+production%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Looking for a needle in a haystack: De novo phenotypic target identification reveals hippo pathway-mediated mir-202 regulation of egg production.</a> Nuc Acid Res. 52 (2), 738-754 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10x TRIS-gepufferte Kochsalzlösung (TBS) pH 7,6&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>&nbsp; J62662&nbsp; K7</td><td>Für intermittierende Waschen zwischen den Schritten</td></tr><tr><td>1x Opal-Antikörper-Verdünner/Block&nbsp;</td><td>Akoya Biosciences</td><td>ARD1001EA</td><td>Proteinblockierende Lösung</td></tr><tr><td>1x Plus Automatisierungsverstärkungsverdünner</td><td>Akoya Biosciences&nbsp;</td><td>FP1609</td><td>Verwendet zur Verdünnung von Opalfluorophoren</td></tr><tr><td>20x Konzentrat&nbsp; Kochsalz-Natriumcitrat (SSC) Puffer</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6639-1L</td><td>Für miRNA-Waschungen nach der Probe-Hybridisierung</td></tr><tr><td>4',6-Diamidino-2-Phenylindol (DAPI)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific/ Invitrogen</td><td>EN62248 / 62248</td><td>Für die nukleare Färbung</td></tr><tr><td>ACD HybEZ II Hybridisierungssystem</td><td>ACD Biotechne</td><td>321711</td><td>Ofen zur Temperaturregulierung während des miRNAscope-Protokolls verwendet</td></tr><tr><td>Anti-CD8 (D8A8Y), Rabbit mAb</td><td>Zell-Signalisierungstechnologien</td><td>85336S</td><td>Beispiel für einen primären Antikörper, der zur Optimierung dieses Protokolls verwendet wird</td></tr><tr><td>Anti-Digoxigenin (Maus) HRP-Konjugat</td><td>Revvity Health Sciences Inc.</td><td>NEF832001EA</td><td>Sekundäres Reagenz, das für den Nachweis von miRNA verwendet wird</td></tr><tr><td>Anti-EpCAM (E6V8Y), Rabbit mAb</td><td>Zell-Signalisierungstechnologien</td><td>93790</td><td>Beispiel für einen primären Antikörper, der zur Optimierung dieses Protokolls verwendet wird</td></tr><tr><td>Blockierendes Reagenzpulver</td><td>Akoya Biosciences&nbsp;</td><td>FP1012</td><td>miRNA-Blockierungslösung</td></tr><tr><td>Ethylalkohol 100 % (200 Proof)</td><td>Pharmco</td><td>111000200</td><td>Für die Deparaffinisierung</td></tr><tr><td>EZ-AR1-Puffer</td><td>BioGeneX</td><td>HK521-XAK</td><td>Verwendet zur Antigenentnahme von FFPE-Gewebeschnitten im Proteinschritt</td></tr><tr><td>EZ-AR1 Elegance-Puffer</td><td>BioGeneX</td><td>HK546-XAK</td><td>Verwendet für die Antigenentnahme von FFPE-Gewebeschnitten im miRNA-Probeschritt</td></tr><tr><td>EZ-Retriever IR-System</td><td>BioGeneX</td><td>MW015-IR</td><td>Mikrowelle zur Antigenentnahme von FFPE-Gewebeschnitten verwendet</td></tr><tr><td>Wasserstoffperoxidlösung 30%&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>HX0640-5&nbsp;</td><td>Zur Gewebevorbereitung. Hilft, die endogene Peroxidase-Aktivität zu blockieren und stark gefärbte Produkte zu erzeugen</td></tr><tr><td>miR-181c-3p miRNA-Sonde</td><td>Qiagen</td><td>339112</td><td>Beispiel für eine miRNA-Sonde, die zur Optimierung dieses Protokolls verwendet wird</td></tr><tr><td>miRCURY LNA miRNA ISH Puffersatz (FFPE)</td><td>Qiagen</td><td>339450&nbsp;</td><td>Verwendet zur Verdünnung der miRNA-Sonde</td></tr><tr><td>Opal 620</td><td>Akoya Biosciences&nbsp;</td><td>FP1495001KT</td><td>Fluorophor zur Identifizierung des primären Antikörpers</td></tr><tr><td>Opal 690&nbsp;</td><td>Akoya Biosciences&nbsp;</td><td>FP1497001KT</td><td>Fluorophor zur Identifizierung des primären Antikörpers</td></tr><tr><td>Opal Anti-Ms + Rb HRP</td><td>Akoya Biosciences</td><td>ARH1001EA</td><td>Sekundärer Antikörper als Detektionsmittel verwendet</td></tr><tr><td>Pierce 16 % Formaldehyd (w/v), methanolfrei</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>28908</td><td>Um 3,7 % PFA für die Gewebevorbereitung herzustellen</td></tr><tr><td>ProLong-Diamant-Antifade</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P36970</td><td>Montagemedien</td></tr><tr><td>RNAscope Protease Plus</td><td>ACD Biotechne</td><td>322331</td><td>Zur Permeabilisierung von Gewebeschnitten&nbsp; durch teilweise Proteinverdauung & Ziel-miRNA-Moleküle freizulegen</td></tr><tr><td>RNAse-freies Wasser&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>46-000-CM&nbsp;</td><td>Alle Geräte zu reinigen und vorzubereiten und bei Bedarf als Verdünner zu verwenden, nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379-25ML</td><td>Um TBS-T herzustellen</td></tr><tr><td>Tyramidsignalverstärkung plus Cyanin 3</td><td>Akoya Biosciences&nbsp;</td><td>NEL744001KT</td><td>Fluorophor zur Identifikation von miRNA</td></tr><tr><td>U6- und Scramble-miRNA-Sonden</td><td>Qiagen</td><td>339459</td><td>Optionale Steuersonden</td></tr><tr><td>Xylenes histologischer Grad</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>UN1307</td><td>Für die Deparaffinisierung</td></tr></tbody></table>

microrna-amplifikation und -erkennung durch in-situ-hybridisierung mit gesperrten nukleinsäuren als neuartige detektions- und quantifizierungsmethode

MicroRNA Amplification and Recognition through Locked-nucleic-acid In situ Hybridization as a Novel Detection and Quantification Method

MicroRNA-Amplifikation und -Erkennung durch In-situ-Hybridisierung mit gesperrten Nukleinsäuren als neuartige Detektions- und Quantifizierungsmethode

When using traditional probe-based in situ hybridization (ISH) imaging detection methods, microRNAs (miRNAs) are difficult to capture due to their size, ...

microrna-amplification-recognition-through-locked-nucleic-acid-situ

Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

Hier beschreiben wir eine optimierte Multiplex-Reverse-Transkriptase-quantitative PCR (qRT-PCR)-Protokoll in Kombination mit einer mikrofluidischen Plattform als zeit-und kosteneffektiver High-Throughput-Screening-Tool für microRNA (miRNA) Expression, besonders beim Arbeiten mit geringen Mengen der Probe.

High Throughput MicroRNA Profiling: Optimierte Multiplex qRT-PCR in Nanoliter-Maßstab auf dem Fluidigm Dynamische ArrayTM IFCs

Eine neuartige High-Throughput-Verfahren beschrieben, die ermöglicht den Nachweis und die relative Quantifizierung von kleinen RNA-und mRNA-Expression von einzelnen Bakterienzellen Verwendung gesperrt Nukleinsäure-Sonden und...

Locked Nucleic Acid Durchflusszytometrie-Fluoreszenz In situ Hybridisierung (LNA Flow-FISH): Eine Methode für die bakterielle RNA-Detektion

Dieses Video beschreibt eine sequentielle Hybridisierungsstrategie, bei der mRNA-Sonden mit spezifischer Ziel-mRNA hybridisiert werden. Nach der Sondenhybridisierung wird eine Signalamplifikation durchgeführt, um die Auflösung durch Reduzierung des Signal-Rausch-Verhältnisses während des RNA-CISH histologischer Proben zu verbessern.

Sondenhybridisierung und Signalamplifikation in RNA in situ Hybridisierung: Eine Technik zum Nachweis spezifischer RNA-Sequenzen in Gewebeschnitten

Das Ziel dieser Publikation ist es, sichtbar zu machen und zu diskutieren, die operativen Schritte einer Enhanced Northern Blot-Protokoll auf RNA aus Drosophila melanogaster Embryonen entnommen, Zellen und Geweben. Dieses Protokoll ist besonders nützlich für eine effiziente Erkennung von kleinen RNA-Spezies.

Verbesserte Northern Blot Detektion von kleinen RNA-Spezies in Drosophila melanogaster

MicroRNAs (miRNAs) sind eine weit verbreitete Klasse von regulatorischen Molekülen. Hier beschreiben wir eine miRNA-Klonierungsmethode, die auf zwei potenten Ligationsschritten beruht, gefolgt von einer Hochdurchsatz-Sequenzierung. Unsere Methode ermöglicht eine genaue genomweite Quantifizierung von miRNAs.

Hoch effiziente Ligation kleine RNA-Moleküle für MicroRNA Quantifizierung von Hochdurchsatz-Sequenzierung

Zirkulierende microRNAs haben in letzter Zeit als vielversprechend und neue Biomarker für verschiedene Krebsarten und anderen Krankheiten. Das Ziel dieses Artikels ist es, drei verschiedene Sonden-basierten Echtzeit-PCR-Plattformen und Methoden, die zur Verfügung zu quantifizieren und zu bestimmen, die Fülle der zirkulierenden microRNAs sind zu diskutieren.

Sonde-basierte Echtzeit-PCR Ansätze zur quantitativen Messung von microRNAs

Hier präsentieren wir ein Protokoll zum Nachweis der miRNA-Expression in Brustkrebspatientinnenproben mittels miRNA-in-situ-Hybridisierung.

Clinicopathological Analyse von miRNA Expression in Mammakarzinomen von miRNA Verwendung<em&gt; In Situ</em&gt; Die Hybridisierung

Dieser Bericht beschreibt eine schnelle und zuverlässige Methode zur Validierung von mRNA Ziele der zellulären MiRNAs. Die Methode verwendet, die synthetische biotinylierte gesperrt Nukleinsäure LNA-basierte MiRNA imitiert erfassen gezielt mRNA. Anschließend Streptavidin beschichteten magnetische Beads werden eingesetzt, um Pulldown das Ziel mRNA zur Quantifizierung von qPCR-Polymerase-Kettenreaktion.

Biotin-basierte Pulldown Assay, Validate mRNA Ziele der zellulären miRNAs

Um die Zahl der mRNAs in einzelnen Eizellen, einzelnes Molekül RNA Fluoreszenz in-situ reproduzierbar zu zählen war Hybridisierung (RNA-Fisch) für nicht-anhaftende Zellen optimiert. Eizellen wurden gesammelt, mit der Abschrift spezifische Sonden hybridisiert und quantifiziert, mit einem Bild Quantifizierung Software.

Verwendung von einzelnen Molekül Fluoreszenz In Situ Hybridisierung (SM-Fisch), Quantify und Localize mRNAs in murinen Eizellen

Diese Methode demonstriert die Verwendung der nördlichen Hybridisierungstechnik, um miRNAs aus dem gesamten RNA-Extrakt zu detektieren.

RNA Blot Analysis for the Detection and Quantification of Plant MicroRNAs

Die DNAzyme-basierten Nanomaschinen können für den hochselektiven und sensitiven Nachweis von Nukleinsäuren eingesetzt werden. Dieser Artikel beschreibt ein detailliertes Protokoll für das Design von DNAzym-basierten Nanomaschinen mit einem 10-23-Kern unter Verwendung freier Software und deren Anwendung am Beispiel der Detektion eines Epstein-Barr-Virusfragments.

DNAzyme 10-23 - basierte Nanomaschinen zur Nukleinsäureerkennung

Erfahren Sie die simultane Detektion von microRNAs und Proteinen in FFPE-Gewebe mittels Tandem-Immunfluoreszenz-Hybridisierung. Diese Methode ermöglicht räumliche Analyse und direkte Quantifizierung für Krebsforschung.

MicroRNA-Amplifikation und -Erkennung durch In-situ-Hybridisierung mit gesperrten Nukleinsäuren als neuartige Detektions- und Quantifizierungsmethode (Video) | JoVE Journal

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