Name: Präzise Visualisierung der Insulinrezeptoren A und B im Gehirn von Mäusen mit einem RNA In Situ Hybridisierungsassay (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Erfahren Sie, wie eine Duplex-In-situ-Hybridisierung Insulinrezeptor-Isoformen IR-A und IR-B im Plexus chorioideus von Mäusen kartiert. Diese hochauflösende Methode liefert neue Erkenntnisse zur Gehirn-Signalübertragung.

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<ol><li>Häring, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+insulin+receptor%3A+signalling+mechanism+and+contribution+to+the+pathogenesis+of+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">The insulin receptor: signalling mechanism and contribution to the pathogenesis of insulin resistance.</a> Diabetologia. 34 (12), 848-861 (1991).</li>
<li>Benecke, H., Flier, J. S., Moller, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternatively+spliced+variants+of+the+insulin+receptor+protein%3A+expression+in+normal+and+diabetic+human+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Alternatively spliced variants of the insulin receptor protein: expression in normal and diabetic human tissues.</a> J Clin Invest. 89 (6), 2066-2070 (1992).</li>
<li>Vella, V., Malaguarnera, R., Nicolosi, M. L., Morrione, A., Belfiore, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin%2FIGF+signalling+and+discoidin+domain+receptors%3A+an+emerging+functional+connection%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Mol+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Insulin/IGF signalling and discoidin domain receptors: an emerging functional connection.</a> Biochim Biophys Acta Mol Cell Res. 1866 (11), 118522(2019).</li>
<li>Galal, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+receptor+isoforms+and+insulin+growth+factor-like+receptors%3A+implications+in+cell+signaling%2C+carcinogenesis%2C+and+chemoresistance%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Insulin receptor isoforms and insulin growth factor-like receptors: implications in cell signaling, carcinogenesis, and chemoresistance.</a> Int J Mol Sci. 24 (19), 15006(2023).</li>
<li>Starks, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+resistance+is+associated+with+higher+cerebrospinal+fluid+tau+levels+in+asymptomatic+APOE%C9%9B4+carriers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Alzheimers+Dis%22%5BJournal%5D)">Insulin resistance is associated with higher cerebrospinal fluid tau levels in asymptomatic APOEɛ4 carriers.</a> J Alzheimers Dis. 46 (2), 525-533 (2015).</li>
<li>Belfiore, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+receptor+isoforms+in+physiology+and+disease%3A+an+updated+view%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr+Rev%22%5BJournal%5D)">Insulin receptor isoforms in physiology and disease: an updated view.</a> Endocr Rev. 38 (5), 379-431 (2017).</li>
<li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNAscope%3A+a+novel+in+situ+RNA+analysis+platform+for+formalin-fixed%2C+paraffin-embedded+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Diagn%22%5BJournal%5D)">RNAscope: a novel in situ RNA analysis platform for formalin-fixed, paraffin-embedded tissues.</a> J Mol Diagn. 14 (1), 22-29 (2012).</li>
<li>BaseScope assays. , Advanced Cell Diagnostics, Inc. 
 <a target="_blank" href="https://acdbio.com/basescope-duplex-assay">https://acdbio.com/basescope-duplex-assay</a> (2025).</li>
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<li>Schulingkamp, R. J., Pagano, T. C., Hung, D., Raffa, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+receptors+and+insulin+action+in+the+brain%3A+review+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Biobehav+Rev%22%5BJournal%5D)">Insulin receptors and insulin action in the brain: review and clinical implications.</a> Neurosci Biobehav Rev. 24 (8), 855-872 (2000).</li>
<li>Milstein, J. L., Ferris, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+brain+as+an+insulin-sensitive+metabolic+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Metab%22%5BJournal%5D)">The brain as an insulin-sensitive metabolic organ.</a> Mol Metab. 52, 101234(2021).</li>
<li>Moruzzi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+expression+of+insulin+receptor+isoforms+in+obesity%2Ftype+2+diabetes+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific expression of insulin receptor isoforms in obesity/type 2 diabetes mouse models.</a> J Cell Mol Med. 25 (10), 4800-4813 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Ammonium-Wasser</td><td>Elektronenmikroskop-Wissenschaft&nbsp;</td><td>26754-4A</td><td></td></tr><tr><td>BaseScope Dulplex Detektions-Reagenzkit</td><td>ACD Biografie</td><td>323810</td><td></td></tr><tr><td>BaseScope Dulplex Duplex Positivkontrollsonde - Maus (mm)-C1-PPIB-1ZZ/C2-Polr2A-1ZZ</td><td>ACD Biografie</td><td>700121</td><td></td></tr><tr><td>BaseScope Dulplex Duplex-Positivkontrollsonde-C1-DapB-1ZZ/C2-DapB-1ZZ</td><td>ACD Biografie</td><td>700141</td><td></td></tr><tr><td>Gills Hämatoxylin I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GHS132-1L</td><td></td></tr><tr><td>Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG (H+L) Hochgradig kreuzadsorbierter Sekundärantikörper, Alexa Fluor Plus 488</td><td>Invitrogen</td><td>Nr. A32731</td><td></td></tr><tr><td>HybEZ BACKOFEN, Tablett, Rost und Waschblech</td><td>ACD Biografie</td><td>321721, 310012, 321716, 321717</td><td></td></tr><tr><td>ImmEdge Hydrophober Barrierestift</td><td>Vector Labor</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>INSR-Isoform-Sonden A und B: BA-Mm-Insr-tv1-E10E11, BA-Mm-Insr-tv2-E11E12-C2</td><td>ACD Biografie</td><td>717411, 717421-C2</td><td></td></tr><tr><td>Insulinrezeptor-Antikörper</td><td>Signalübertragung der Zellen&nbsp;</td><td>23413</td><td></td></tr><tr><td>RNAscope 10x Ziel-Retrival</td><td>ACD Biografie</td><td>322000</td><td></td></tr><tr><td>RNAscope Wasserstoffperoxid, Protease Plus</td><td>ACD Biografie</td><td>322381</td><td></td></tr><tr><td>Kochsalz-Natriumcitrat (SSC) 20x</td><td>Fisher Scientific</td><td>Nr. BP1325-1</td><td></td></tr><tr><td>SuperFrost Plus Rutschen</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-18</td><td></td></tr><tr><td>VectaMount Permanentes Eindeckmedium</td><td>Vector Labor</td><td>H-5000</td><td></td></tr></tbody></table>

präzise visualisierung der insulinrezeptoren a und b im gehirn von mäusen mit einem rna in situ hybridisierungsassay

Precise Visualization of Insulin Receptors A and B in Murine Brain with an RNA In Situ Hybridization Assay

Der Insulinrezeptor (IR) ist ein Transmembran-Tyrosinkinase-Rezeptor, der aus zwei extrazellulären α-Untereinheiten und zwei Transmembran-β-Untereinheiten besteht, die ein funktionelles Heterotetramer bilden. Die α-Untereinheiten vermitteln die Insulinbindung, während die β-Untereinheiten eine intrinsische Tyrosinkinase-Aktivität besitzen, die die nachgeschaltete Signalübertragung initiiert. Das alternative Spleißen von Exon 11 durch IR-mRNA erzeugt zwei Isoformen des IR, IR-A und IR-B. A...

Präzise Visualisierung der Insulinrezeptoren A und B im Gehirn von Mäusen mit einem RNA In Situ Hybridisierungsassay

Insulin receptors (IRs) are widely expressed across all tissues and all cell types. It exists in two functionally distinct isoforms -- IR-A and IR-B -- ...

precise-visualization-insulin-receptors-b-murine-brain-with-an-rna

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Dieses Protokoll wird erfolgreich eingesetzt, um quantitativ zu detektieren Ebenen und räumliche Muster der mRNA-Expression in mehreren Gewebetypen über Wirbeltierarten. Das Verfahren lässt sich erkennen geringer Menge Transkripte und ermöglicht die Verarbeitung von Hunderten von Dias gleichzeitig. Wir präsentieren dieses Protokoll mit Expression Profiling der aviären embryonalen Gehirn Bildung als Beispiel.

Radioaktiv In-situ- Hybridisierung zum Nachweis Diverse Genexpressionsmuster in Tissue

Dieses Video zeigt den Nachweis der Serotoninrezeptor-RNA-Synthese mit Hilfe von Oligonukleotidsonden in Rattenhirngewebe, das vom Serotonin-Syndrom betroffen ist. Das Protokoll umfasst eine Gewebevorbehandlung, Sondenhybridisierung und enzymatische Detektion, um die RNA-Expression von Serotoninrezeptoren unter einem Mikroskop sichtbar zu machen und zu quantifizieren.

In-situ-Hybridisierung mit Oligonukleotidsonden zur Untersuchung der RNA-Expression in Hirnschnitten von Ratten

Quelle: Baleriola, J., et. al., Nachweis axonal lokalisierter mRNAs in Hirnschnitten mittels hochauflösender In-situ-Hybridisierung.  J. Vis. Exp. (2015)Dieses Video zeigt den Nachweis von mRNA in cholinergen Axonen in fixierten Maus-Hippocampus-Schnitten mittels Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung und Antikörperfärbung. Die Fluoreszenzmikroskopie zeigt die räumliche Lokalisierung von sondenmarkierten mRNAs und Cholinacetyltransferase in cholinergen Neuronen.

Immunfärbung von Neuronen in Hirnschnitten von Mäusen nach Fluoreszenz-In-situ-Hybridisierung

RNA in situ Hybridisierung (ISH) ermöglicht die Visualisierung von RNAs in Zellen und Geweben. Hier zeigen wir, wie die Kombination von RNAscope ISH mit immunhistochemischer oder histologischer Farbstoffe erfolgreich eingesetzt werden kann, um mRNAs, die an Axonen lokalisiert sind, in Schnitten des Gehirns von Mäusen und Menschen zu detektieren.

Nachweis von Axonally lokalisierten mRNAs in Gehirnschnitten mittels hochauflösender<em&gt; In-situ-</em&gt; Hybridization

Die Lokalisierung der Genexpression auf bestimmte Zelltypen kann aufgrund des Mangels an spezifischen Antikörpern eine Herausforderung darstellen. Hier beschreiben wir ein Protokoll zur gleichzeitigen dreifachen Detektion der Genexpression durch Kombination von Doppelfluoreszenz-RNA-in-situ-Hybridisierung mit Immunfärbung.

Die Kombination von Doppel-Fluoreszenz<em&gt; In Situ</em&gt; Die Hybridisierung mit Immunmarkierung für Nachweis der Expression von drei Gene in Mäusehirnschnitten

Eine in Situ Hybridisierung (ISH) Protokoll, die kurze antisense Oligonukleotide verwendet, um alternative Pre-mRNA Spleißen in Maus Gehirn Abschnitte erkennen wird beschrieben.

Quantitative Analyse der alternativen Pre-mRNA Spleißen in Maus Gehirn Abschnitten mit RNA In Situ Hybridisierung Assay

Neuartige, immunstaining-kompatible Gewebeclearing-Techniken wie die ultimative 3D-Bildgebung von lösungsmittelgereinigten Organen ermöglichen die 3D-Visualisierung von Tollwutvirus-Hirninfektionen und ihrer komplexen zellulären Umgebung. Dicke, antikörperbeschriftete Hirngewebescheiben werden optisch transparent gemacht, um die Bildtiefe zu erhöhen und eine 3D-Analyse durch konfokale Laserscanmikroskopie zu ermöglichen.

Hochauflösende 3D-Bildgebung der Tollwut-Virusinfektion im lösungsmittelfreien Hirngewebe

Hier stellen wir ein Protokoll vor, das nahezu infrarote Farbstoffe in Verbindung mit Immunhistochemie und hochauflösendem Scannen verwendet, um Proteine in Hirnregionen zu untersuchen.

Einsatz von Infrarot-Fluoreszenz und hochauflösendem Scannen zur Messung des Protein-Expression im Rodentrains

Dieses Protokoll beschreibt einen schrittweisen Workflow für die immunfluoreszierende Costainierung von IBA1 und TMEM119, zusätzlich zur Analyse der mikrogliaalen Dichte, Verteilung und Morphologie sowie der peripheren myeloischen Zellinfiltration im Gehirngewebe der Maus.

Immunfluoreszenzfärbung mit IBA1 und TMEM119 für Mikroglia-Dichte, Morphologie und periphere Myeloid-Zellinfiltrationsanalyse im Maushirn

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Kombination von Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH) und Fluoreszenz-Immunhistochemie (IHC) sowohl in frisch gefrorenen als auch in fixierten Maus-Hirnschnitten, mit dem Ziel, Multilabel-FISH und Fluoreszenz-IHC-Signal zu erreichen. IHC zielte auf zytoplasmatische und membrangebundene Proteine ab.

Kombination von Multiplex-Fluoreszenz-In-situ-Hybridisierung mit fluoreszierender Immunhistochemie an frischen, gefrorenen oder fixierten Mäusehirnschnitten

Erfahren Sie, wie eine Duplex-In-situ-Hybridisierung Insulinrezeptor-Isoformen IR-A und IR-B im Plexus chorioideus von Mäusen kartiert. Diese hochauflösende Methode liefert neue Erkenntnisse zur Gehirn-Signalübertragung.

Präzise Visualisierung der Insulinrezeptoren A und B im Gehirn von Mäusen mit einem RNA In Situ Hybridisierungsassay

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