Murine bilaterale Nierenlymphadenektomie

Wir untersuchen den Transport von Immunzellen vom Nierenlymphknoten zur Niere und von Nierenantigen zum drainierenden Lymphknoten. Unser chirurgischer Ansatz ermöglicht den einzigartigen Vorteil, dass wir die nierenen Lymphknoten selektiv stören können, während alle anderen Lymphknoten intakt bleiben – in einem gut tolerierten Langzeitüberlebensmodell. Da dieses Modell nun entwickelt wurde, können wir die Beiträge von Nierenlymphknoten und Immunantworten untersuchen und untersuchen, wie die Entfernung dieser Knoten zur immunbedingten Nierenschädigung beiträgt.

Zu Beginn legen Sie das betäubte Tier auf den Operationstisch und tragen Sie Salbe auf. Verwenden Sie Klebeband, um den linken Arm des Tieres in eine höhere Richtung und den Schwanz in eine unterlegene Richtung zu sichern, um eine entspannte, aber verlängerte Haltung zu schaffen. Rasieren Sie das Fell und desinfizieren Sie den Operationsbereich dreimal.

Nachdem Sie die Tiefe der Anästhesie mit einem Zehenkneif überprüft haben, machen Sie einen einen Zentimeter langen schrägen Schnitt durch die Haut direkt unterhalb der Milz, etwa einen Zentimeter unterhalb der letzten Rippe. Mit einer stumpfen Dissektion trennen Sie die Haut von Bauch- und Brustwand und identifizieren Sie die Milz im Bauch. Dann machen Sie einen einen Zentimeter langen Schnitt durch die Bauchwandmuskulatur, knapp unterhalb der Milz, um in die Bauchhöhle einzutreten.

Identifizieren Sie die linke Niere als glattes Organ, das sich entlang der hinteren Bauchwand direkt unter der Milz befindet. Mit zwei schräg gebogenen Zangen wird hinter der linken Niere stumpf zerspart, um das Retroperitoneum zu erreichen, und die linke Niere sanft in anteromedialer Richtung reflektieren. Lokalisieren Sie das Fettgewebepolster um den linken Nierenlymphknoten, der hinter der Niere und oberhalb der Nierengefäße liegt.

Identifizieren und vermeiden Sie die obere Nebenniere, die Aorta hinten und die anteromediale Cisterna. Mit einer fein gespitzten Pinzette spartieren Sie die Lymphknotenkapsel stumpf auf, um sie von benachbarten Gefäßen zu trennen und mit schrägen Pinzetten sanfte Gegenspannung zu erzeugen. Verwenden Sie eine feinspitzige, gerade Pinzette, um den Lymphknoten oberhalb zurückzuziehen.

Dann schneidet man die posteromedialen Befestigungen scharf mit einer feinen Schere durch. Untersuchen Sie die Stelle, um die Hämostase zu bestätigen. Als Nächstes wird die Niere wieder in ihre normale anatomische Position gebracht.

Schließen Sie die Bauchwand und dann die Haut mit einer 6-0 Monofilament-Polypropylennaht in einem Laufstich. Tragen Sie sterilen chirurgischen Kleber auf, um die Wunde zu versiegeln. Optional wird zur besseren Identifizierung der Nierenlymphknoten 10 bis 20 Mikroliter steriles, gefiltertes 5%-Evans-Blue-Farbstoff in PBS in beide Hinterfüße vor der Nierenlymphadenektomie injiziert.

Innerhalb von fünf Minuten nach der Injektion erreicht der Farbstoff die Nierenlymphknoten über den Drainage entlang des iliakalen Lymphtrakts. Positioniere das Tier in die linke laterale Dekubitusposition mit der linken Seite nach unten. Verwenden Sie Klebeband, um den rechten Arm des Tieres in eine obere Richtung und den Schwanz in eine unterlegene Richtung zu befestigen, um eine entspannte, aber verlängerte Haltung zu halten.

Machen Sie nun einen einen Zentimeter großen schrägen Hautschnitt direkt unter der letzten Rippe, der etwas höher als auf der linken Seite liegt. Trennen Sie die Haut durch eine stumpfe Dissektion von Bauch- und Brustwand. Dann machen Sie einen einen Zentimeter langen Schnitt durch die Bauchwandmuskulatur, um Zugang zur Bauchhöhle zu erhalten.

Identifizieren Sie die rechte Niere, ein glattes Organ, das sich entlang der hinteren Bauchwand und direkt unter der Leber befindet. Mit zwei schräg gebogenen Zangen wird hinter der rechten Niere stumpf zerlegt, um Zugang zum retroperitonealen Raum zu erhalten und die rechte Niere in anteromediale Richtung zu reflektieren. Identifizieren Sie das Fettgewebepolster um den rechten Nierenlymphknoten, der hinter der Niere und oberhalb der Nierengefäße liegt.

Identifizieren und vermeiden Sie die Nebenniere, die oberhalb des Lymphknotens liegt. Nun wird mit einer feinspitzigen Pinzette stumpf um die Kapsel des Lymphknotens herum zersektiert, um ihn von den nahegelegenen Gefäßen zu trennen, während man mit schrägen Pinzetten sanft Gegentraktion ausübt. Dann zieht man mit einer feinspitzen, geraden Zange die Lymphknoten nach oben und schneidet die posteropedialen Ansätze mit einer feinen Schere scharf durch.

Inspiziere den Bereich, um eine Hämostase sicherzustellen. Bringen Sie schließlich die rechte Niere in ihre anatomische Position zurück. Schließen Sie die Bauchwand und Haut in zwei Schichten mit einer 6-0-Monofilament-Polypropylennaht in einem laufenden Muster und tragen Sie sterilen chirurgischen Kleber über die Schnittstelle auf.

Die Durchflusszytometrie bestätigte eine erfolgreiche Lymphknotenextraktion in allen fünf Proben der linken und fünf rechten Nierenlymphadenektomie, die jeweils über 50 % CD45-positive lebende Zellen zeigten, verglichen mit weniger als 2 % bei viszeralen Fettkontrollen. Die Quantifizierung von CD45-positiven Zellen zeigte einen sehr signifikanten Unterschied zwischen Proben der linken und rechten Nierenlymphadenektomie im Vergleich zum viszeralen Fettgewebe, ohne signifikante Unterschiede zwischen der linken und rechten Seite.