Name: Kombinierte Rekombinase-Polymerase-Amplifikation CRISPR/Cas12a-Assay zum Nachweis von Fusarium oxysporum f. sp. cubense Tropical Race 4 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-14T13:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: Erfahren Sie den kombinierten RPA-CRISPR/Cas12a-Assay zum Nachweis von Fusarium oxysporum f. sp. cubense Tropical Race 4. Diese Methode ermöglicht eine schnelle, kostengünstige und präzise Detektion des Bananenpathogens.

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<ol><li>Viljoen, A., Ma, L. J., Molina, A. B. Fusarium Wilt (Panama Disease) and Monoculture in Banana Production: Resurgence of a Century-Old Disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aViljoen%2C+A+%22Emerging+Plant+Diseases+and+Global+Food+Security%22">Emerging Plant Diseases and Global Food Security</a>. , The American Phytopathological Society. St. Paul, MN. (2020).</li>
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<li>Matthews, M. C., Mostert, D., Ndayihanzamaso, P., Rose, L. J., Viljoen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+detection+of+economically+important+Fusarium+oxysporum+f.+sp.+cubense+strains+in+Africa+in+plants%2C+soil+and+water%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Quantitative detection of economically important Fusarium oxysporum f. sp. cubense strains in Africa in plants, soil and water.</a> PLoS One. 15 (7), e0236110(2020).</li>
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<li>Gootenberg, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleic+acid+detection+with+CRISPR-Cas13a%2FC2c2%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Nucleic acid detection with CRISPR-Cas13a/C2c2.</a> Science. 356 (6336), 438-442 (2017).</li>
<li>Chen, Y., Mei, Y., Jiang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Universal+and+high-fidelity+DNA+single+nucleotide+polymorphism+detection+based+on+a+CRISPR%2FCas12a+biochip%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Sci%22%5BJournal%5D)">Universal and high-fidelity DNA single nucleotide polymorphism detection based on a CRISPR/Cas12a biochip.</a> Chem Sci. 12 (12), 4455-4462 (2021).</li>
<li>Shin, K., Kwon, S. H., Lee, S. C., Moon, Y. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+and+rapid+detection+of+citrus+scab+using+an+RPA-CRISPR%2FCas12a+system+combined+with+a+lateral+flow+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Plants+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Sensitive and rapid detection of citrus scab using an RPA-CRISPR/Cas12a system combined with a lateral flow assay.</a> Plants (Basel). 10 (10), 2132(2021).</li>
<li>Zhang, Y. M., Zhang, Y., Xie, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+CRISPR%2FCas12a-based+DNA+detection+for+fast+pathogen+diagnosis+and+GMO+test+in+rice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Breed%22%5BJournal%5D)">Evaluation of CRISPR/Cas12a-based DNA detection for fast pathogen diagnosis and GMO test in rice.</a> Mol Breed. 40 (1), 11(2020).</li>
<li>Wang, Q., Qin, M., Coleman, J. J., Shang, W., Hu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+sensitive+detection+of+Verticillium+dahliae+from+complex+samples+using+CRISPR%2FCas12a+technology+combined+with+RPA%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Dis%22%5BJournal%5D)">Rapid and sensitive detection of Verticillium dahliae from complex samples using CRISPR/Cas12a technology combined with RPA.</a> Plant Dis. 107 (6), 1664-1669 (2023).</li>
<li>Sun, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+sensitive+detection+of+two+fungal+pathogens+in+soybeans+using+the+recombinase+polymerase+amplification%2FCRISPR-Cas12a+method+for+potential+on-site+disease+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Manag+Sci%22%5BJournal%5D)">Rapid and sensitive detection of two fungal pathogens in soybeans using the recombinase polymerase amplification/CRISPR-Cas12a method for potential on-site disease diagnosis.</a> Pest Manag Sci. 80 (3), 1168-1181 (2024).</li>
<li>Chen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+frontline%2C+rapid%2C+nucleic+acid-based+Fusarium+circinatum+detection+system+using+CRISPR%2FCas12a+combined+with+recombinase+polymerase+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Dis%22%5BJournal%5D)">A frontline, rapid, nucleic acid-based Fusarium circinatum detection system using CRISPR/Cas12a combined with recombinase polymerase amplification.</a> Plant Dis. 107 (6), 1902-1910 (2023).</li>
<li>Mu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-Cas12a-based+diagnostics+of+wheat+fungal+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Agric+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">CRISPR-Cas12a-based diagnostics of wheat fungal diseases.</a> J Agric Food Chem. 70 (23), 7240-7247 (2022).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+detection+of+Fusarium+temperatum+by+using+CRISPR-Cas12a+empowered+LAMP+assay+coupled+with+AuNPs-based+colorimetric+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22LWT%22%5BJournal%5D)">Visual detection of Fusarium temperatum by using CRISPR-Cas12a empowered LAMP assay coupled with AuNPs-based colorimetric reaction.</a> LWT. 185, 115190(2023).</li>
<li>Liang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+RPA-based+CRISPR%2FCas12a+assay+in+combination+with+a+lateral+flow+strip+for+rapid+detection+of+toxigenic+Fusarium+verticillioides+in+maize%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Control%22%5BJournal%5D)">Development of an RPA-based CRISPR/Cas12a assay in combination with a lateral flow strip for rapid detection of toxigenic Fusarium verticillioides in maize.</a> Food Control. 157, 110172(2024).</li>
<li>Matthews, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+combined+recombinase+polymerase+amplification+CRISPR%2FCas12a+assay+for+detection+of+Fusarium+oxysporum+f.+sp.+cubense+tropical+race+4%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A combined recombinase polymerase amplification CRISPR/Cas12a assay for detection of Fusarium oxysporum f. sp. cubense tropical race 4.</a> Sci Rep. 15 (1), 2436(2025).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22RNA+Clean+%26+Concentrator-5%3A+Instruction+Manual+Version+3.1.3%22">RNA Clean & Concentrator-5: Instruction Manual Version 3.1.3</a>. , Zymo Research Corporation. Irvine, CA. (2023).</li>
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<li>Li, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-Cas12a-assisted+nucleic+acid+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Discov%22%5BJournal%5D)">CRISPR-Cas12a-assisted nucleic acid detection.</a> Cell Discov. 4, 1-4 (2018).</li>
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<li>Wang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cas12aVDet%3A+A+CRISPR%2FCas12a-based+platform+for+rapid+and+visual+nucleic+acid+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Cas12aVDet: A CRISPR/Cas12a-based platform for rapid and visual nucleic acid detection.</a> Anal Chem. 91 (19), 12156-12161 (2019).</li>
<li>Fozouni, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amplification-free+detection+of+SARS-CoV-2+with+CRISPR-Cas13a+and+mobile+phone+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Amplification-free detection of SARS-CoV-2 with CRISPR-Cas13a and mobile phone microscopy.</a> Cell. 184 (2), 323-333 (2021).</li>
<li>Ding, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasensitive+and+visual+detection+of+SARS-CoV-2+using+all-in-one+dual+CRISPR-Cas12a+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Ultrasensitive and visual detection of SARS-CoV-2 using all-in-one dual CRISPR-Cas12a assay.</a> Nat Commun. 11 (1), 4711(2020).</li>
<li>Parida, M., Sannarangaiah, S., Dash, P. K., Rao, P. V., Morita, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loop-mediated+isothermal+amplification+%28LAMP%29%3A+A+new+generation+of+innovative+gene+amplification+technique%3B+perspectives+in+clinical+diagnosis+of+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Med+Virol%22%5BJournal%5D)">Loop-mediated isothermal amplification (LAMP): A new generation of innovative gene amplification technique; perspectives in clinical diagnosis of infectious diseases.</a> Rev Med Virol. 18 (6), 407-421 (2008).</li>
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<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+sensitive+detection+of+toxigenic+Fusarium+asiaticum+integrating+recombinase+polymerase+amplification%2C+CRISPR%2FCas12a%2C+and+lateral+flow+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Rapid and sensitive detection of toxigenic Fusarium asiaticum integrating recombinase polymerase amplification, CRISPR/Cas12a, and lateral flow techniques.</a> Int J Mol Sci. 24 (18), 14134(2023).</li>
<li>Manzo-Sánchez, G., Orozco-Santos, M., Martínez-Bolaños, L., Garrido-Ramírez, E., Canto-Canche, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diseases+of+quarantine+and+economic+importance+in+banana+tree+%28Musa+sp.%29+in+M%C3%A9xico%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Mex+Fitopatol%22%5BJournal%5D)">Diseases of quarantine and economic importance in banana tree (Musa sp.) in México.</a> Rev Mex Fitopatol. 32 (2), 89-107 (2014).</li>
<li>Blomme, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+diseases+of+bananas+and+enset%3A+Current+state+of+knowledge+and+integrated+approaches+toward+sustainable+management%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Plant+Sci%22%5BJournal%5D)">Bacterial diseases of bananas and enset: Current state of knowledge and integrated approaches toward sustainable management.</a> Front Plant Sci. 8, 1290(2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>EnGen Lba Cas12a (Cfp1) Protein</td><td>New England Biolabs</td><td>M0653T</td><td></td></tr><tr><td>EnGen Lba Cas12a Verdünner</td><td>New England Biolabs</td><td>B0653A</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf PCR-Röhren</td><td>Merck</td><td>EP0030124332</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Safe-Lock Mikro-Reagenzgläser</td><td>Merck</td><td>EP0030121708</td><td></td></tr><tr><td>Universelle Extraktionsbeutel</td><td>BIOREBA</td><td>430100</td><td></td></tr><tr><td>GeneRuler 100 bp DNA-Leiter</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>SM0241 / SM0242</td><td></td></tr><tr><td>Genie Zentrifuge Mini-6KO</td><td>OptiGene</td><td>OP-FUGE</td><td></td></tr><tr><td>Dschinn III</td><td>OptiGene</td><td>https://www.optigene.co.uk/instruments/genie-iii/&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Genie-Strip-Halter</td><td>OptiGene</td><td>GBLOCK-01 / GBLOCK-02 / GBLOCK-03</td><td></td></tr><tr><td>Genie-Strips</td><td>OptiGene</td><td>OP-0008-50 / OP-0008-500</td><td></td></tr><tr><td>HiScribe T7 Hochleistungs-RNA-Synthese-Kit</td><td>New England Biolabs</td><td>E2040S</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop ND-1000 UV/Vis-Spektrophotometer</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>https://caeonline.com/buy/spectrometers/nanodrop-nd-1000/293669253</td><td></td></tr><tr><td>NEBuffer 3</td><td>New England Biolabs</td><td>B7003S</td><td></td></tr><tr><td>NEBuffer r2.1</td><td>New England Biolabs</td><td>B6002S</td><td></td></tr><tr><td>Polyvinylpyrrolidon (PVP) Pulver</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9003-39-8</td><td></td></tr><tr><td>RNA-Reinigung und Konzentrator-5-Kit</td><td>Zymo-Forschung</td><td>R1013</td><td></td></tr><tr><td>RNA-Ladefarbe</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>R0641</td><td></td></tr><tr><td>SmartBlue Blue Light Transilluminator</td><td>Accuris-Instrumente</td><td>E4000-E</td><td></td></tr><tr><td>Natriumhydroxid-(NaOH)-Pellets</td><td>Merck, EMPARTA</td><td>K277</td><td></td></tr><tr><td>Tris (Hydroxylmethyl) Aminomethan</td><td>Merck</td><td>77-86-1</td><td></td></tr><tr><td>TwistAmp Liquid Basic Kit</td><td>TwistDx</td><td>TALQBAS01</td><td></td></tr></tbody></table>

kombinierte rekombinase-polymerase-amplifikation crispr/cas12a-assay zum nachweis von fusarium oxysporum f. sp. cubense tropical race 4

Combined Recombinase Polymerase Amplification CRISPR/Cas12a Assay for Detecting Fusarium oxysporum f. sp. cubense Tropical Race 4

Kombinierte Rekombinase-Polymerase-Amplifikation CRISPR/Cas12a-Assay zum Nachweis von Fusarium oxysporum f. sp. cubense Tropical Race 4

Regular and accurate surveillance stands central to the efficient management of plant diseases. It can indicate which course of action is most ...

combined-recombinase-polymerase-amplification-crisprcas12a-assay-for

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Umwelt

Verwendung von DNA-Baugruppe können mehrere CRISPR Vektoren parallel in einem einzigen Reaktions Klonierung konstruiert werden, wodurch die Konstruktion einer großen Anzahl von CRISPR Vektoren eine einfache Aufgabe. Tomato Haarwurzeln sind ein ausgezeichnetes Modellsystem CRISPR Vektoren zu validieren und mutierten Materialien erzeugen.

High-throughput CRISPR Vector Konstruktion und Charakterisierung von DNA-Modifikationen durch Erzeugung von Tomaten Hairy Roots

Wir beschreiben eine robuste Strategie Gen - Ersatz zu genetisch den Pilz Sauereien manipulieren Ustilago maydis. Dieses Protokoll wird erklärt, wie Deletionsmutanten zu erzeugen Infektion Phänotypen zu untersuchen. Es kann erweitert werden , um Gene in jeder gewünschten Weise zu modifizieren, beispielsweise durch eine Sequenz Hinzufügen eines fluoreszierenden Protein - Tag kodiert.

Genetische Manipulation der Pflanze Pathogen<em&gt; Ustilago maydis</em&gt; Zu Pilzbiologie und Pflanzen Mikroben-Interaktionen Studie

Hier präsentieren wir eine Methode, um das Genom von C. Elegans Ingenieur CRISPR-Cas9 Ribonucleoproteins und Homologie abhängigen Reparatur Vorlagen.

Eine schnelle und Facile Pipeline für die Erzeugung von Genomic Punkt Mutanten in C. Elegans verwenden CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins

Ziel dieses Protokolls ist es, eine nahtlose CRISPR/Cas9-Bearbeitung des C. elegans-Genoms unter Verwendung von zusammengesetzten Ribonukleoproteinkomplexen und dem dpy-10-Co-CRISPR-Marker für das Screening zu ermöglichen. Dieses Protokoll kann verwendet werden, um eine Vielzahl von genetischen Modifikationen in C. elegans vorzunehmen, einschließlich Insertionen, Deletionen, Genersatz und Codon-Substitutionen.

CRISPR/Cas9-Editierung des C. elegans rbm-3.2-Gens mit dem dpy-10 Co-CRISPR Screening Marker und Assembled Ribonucleoprotein Complexes.

In dieser Arbeit wurde eine schnelle, empfindliche und tragbare Nachweismethode für Candidatus Liberibacter asiaticus entwickelt, die auf Rekombinase-Polymerase-Amplifikation in Kombination mit CRISPR-Cas12a basiert.

Freilandfähiger Candidatus liberibacter asiaticus-Nachweis mittels Rekombinase-Polymerase-Amplifikation in Kombination mit CRISPR-Cas12a

CRISPR-Cas-Systeme und Anti-CRISPR-Proteine wurden in das Schema der Booleschen Gates in Saccharomyces cerevisiae integriert. Die neuen kleinen Logikschaltkreise zeigten eine gute Leistung und vertieften das Verständnis sowohl von dCas9/dCas12a-basierten Transkriptionsfaktoren als auch von den Eigenschaften von Anti-CRISPR-Proteinen.

Digitale Genschaltkreise auf Basis von CRISPR-Cas-Systemen und Anti-CRISPR-Proteinen

Wir stellen ein Protokoll vor, das die Rekombinase-Polymerase-Amplifikation mit einem CRISPR/Cas12a-System für den Spurennachweis von DNA-Viren kombiniert und eine tragbare Smartphone-Mikroskopie mit einer durch künstliche Intelligenz unterstützten Klassifizierung für den Point-of-Care-Nachweis von DNA-Viren entwickelt.

DNA-Virusnachweissystem basierend auf RPA-CRISPR/Cas12a-SPM und Deep Learning

Hier stellen wir die Schritt-für-Schritt-Vorbereitung von vorgemischten, lyophilisierten rekombinasebasierten isothermen Amplifikationen und Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR)-basierten Reaktionen vor, die für den Nachweis von Nukleinsäure-Biomarkern von Krankheitserregern oder anderen genetischen Markern von Interesse verwendet werden können.

Point-of-Care CRISPR-basierte Diagnostik mit vorgemischten und gefriergetrockneten Reagenzien

Um den schnellen und präzisen Nachweis von Acinetobacter baumannii zu ermöglichen, stellen wir ein Protokoll vor, das die Rekombinase-Polymerase-Amplifikation (RPA) in Verbindung mit der LbaCas12a-Endonuklease zur Identifizierung von A. baumannii-Infektionen verwendet.

Schneller und spezifischer Nachweis von Acinetobacter baumannii-Infektionen mit einem Rekombinase-Polymerase-Amplifikations-/Cas12a-basierten System

Hier beschreiben wir ein einfaches und schnelles Verfahren zum Nachweis von DNA von Bienenpathogenen, wie z.B. Lotmaria passim und Nosema ceranae, unter Verwendung einer amplifikationsbereiten Zelllyse, einer Rekombinase-Polymerase-Amplifikation und CRISPR/Cas12a-Assays.

Vor-Ort-DNA-Nachweis von Trypanosomatiden-Parasiten und Nosema ceranae durch alkalische Lyse gekoppelt mit RPA/CRISPR/Cas12a-System

Erfahren Sie den kombinierten RPA-CRISPR/Cas12a-Assay zum Nachweis von Fusarium oxysporum f. sp. cubense Tropical Race 4. Diese Methode ermöglicht eine schnelle, kostengünstige und präzise Detektion des Bananenpathogens.

Kombinierte Rekombinase-Polymerase-Amplifikation CRISPR/Cas12a-Assay zum Nachweis von Fusarium oxysporum f. sp. cubense Tropical Race 4 (Video) | JoVE Journal

Kombinierte Rekombinase-Polymerase-Amplifikation CRISPR/Cas12a-Assay zum Nachweis von Fusarium oxysporum f. sp. cubense Tropical Race 4

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