Name: Herstellung und Verwendung von anpassbaren Agaroseformen für die gerüstfreie Ovarialfollikelkultur von Mäusen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-24T13:10:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: Erfahren Sie die gerüstfreie Ovarialfollikelkultur mit anpassbaren Agaroseformen für Mäuse. Diese Methode verbessert das Follikelwachstum und die Ovulationsraten im Vergleich zu herkömmlichen Hydrogel-Techniken.

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<table><tbody><tr><td><stark>Materialien und Chemikalien</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; 50-mL Polystyrol-Zentrifugenröhren</td><td>Globe Scientific</td><td>941-11017-CS</td><td></td></tr><tr><td>1,5 mL Mikrozentrifugenröhren</td><td>Fisher Scientific</td><td>MCT-150</td><td>Um die Medien mit einem schnellen Einfrieren einzufrieren und zu speichern</td></tr><tr><td>100 mm Schüssel, unbehandelt</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-100D&nbsp;</td><td>Um Agarose-Mikroformen herzustellen und zu lagern</td></tr><tr><td>100 % Ethanol</td><td>Mercedes Scientific</td><td>1200</td><td>Gewebeverarbeitung</td></tr><tr><td>1000 & Mikro; L&nbsp; Pipettenspitzen, geringe Bindung</td><td>MIDSCI</td><td>PR-1000BK</td><td>Kulturtipps&nbsp;</td></tr><tr><td>200 & Mikro; L&nbsp; Pipettenspitzen, geringe Bindung</td><td>MIDSCI</td><td>PR-200BK</td><td>Kulturtipps&nbsp;</td></tr><tr><td>24-Well-Platte</td><td>Corning</td><td>353047</td><td>Kultur</td></tr><tr><td>35-mm-Schüsseln</td><td>Falke</td><td>351008</td><td>Um Eierstöcke zu isolieren und in enyzmatischen Medien zu inkubieren</td></tr><tr><td>95 % Ethanol</td><td>Mercedes Scientific</td><td>1210</td><td>Gewebeverarbeitung</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Hoefer</td><td>GR140</td><td>Mikroformen</td></tr><tr><td>BioXtra Mineralöl, Lichtöl, Geeignet für die Zellkultur von Mausembryonen</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5310-500ML</td><td>Verwendung als biokompatibles Entformungsmittel</td></tr><tr><td>Rinderserum Albumin&nbsp;</td><td>MP Biomedizin</td><td>103700</td><td>Wachstumsmedien</td></tr><tr><td>Reinigungsstaubwedel, 10 Unzen, Packung mit 6</td><td>Office Depot&nbsp;</td><td>110284</td><td>Druckluft</td></tr><tr><td>Clear V4 Resin 1 L</td><td>Formlabs, Inc</td><td>RS-F2-GPCL-04</td><td>3D-Druckharz</td></tr><tr><td>Corning Wiederverwendbarer Kunststoff Low Form 100 mL Becher, Polypropylen, graduiert</td><td>Corning</td><td>1000P-100</td><td>Becher zum Mischen von Silikonkomponenten&nbsp;</td></tr><tr><td>DNAse I</td><td>Qiagen</td><td>79254</td><td>Enzymatische Medien</td></tr><tr><td>Ecoflex 00-45 fast frei</td><td>Smooth-On, Inc</td><td>B09M8Y9PTV</td><td>Silikonmaterial</td></tr><tr><td>F-12 + GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>31765-035</td><td>Wachstumsmedien</td></tr><tr><td>Fetales Rinder-Fetuin</td><td>Sigma</td><td>F-3385</td><td>Wachstumsmedien</td></tr><tr><td>Fetales Rinderserum (FBS)</td><td>Peak Serum</td><td>PS-FB2</td><td>Dissektionsmedien, enzymatische Medien; Wartungsmedien & Reifemedien</td></tr><tr><td>Fisherbrand&nbsp; Sterilisationsbeutel</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-812-50&nbsp;</td><td>Sterilisationsbeutel</td></tr><tr><td>Follikelstimulierendes Hormon (FSH)</td><td>EMD Serono, Inc.</td><td>Nur Gonal-F Rx & nbsp;</td><td>Growth Media & Reifemedien</td></tr><tr><td>Gibco&nbsp; DPBS, Kalzium, Magnesium</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-040-182&nbsp;</td><td>Dulbeccos phosphatgepufferte Kochsalzlösung</td></tr><tr><td>Humanes Choriongonadotropin (hCG)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C1063-1VL</td><td>Reifemedien</td></tr><tr><td>Insulin-transferrin-selenium (ITS)</td><td>ThermoFisher</td><td>41400045</td><td>Wachstumsmedien</td></tr><tr><td>Invitrogen Molekulare Sonden Rhodamin Phalloidin</td><td>Fisher Scientific</td><td>R415</td><td>Ei-Zytoskelett-Färbung</td></tr><tr><td>IVF-Schalen</td><td>Thermowissenschaftlich</td><td>150260</td><td>Follikel zu isolieren, auszuwählen und vorauszugleichen.</td></tr><tr><td>Leibovit'z 15 (L15)</td><td>Gibco</td><td>11415-064</td><td>Dissektionsmedien & Enzymatische Medien</td></tr><tr><td>Liberase</td><td>Sigma Aldrich</td><td>5401119001</td><td>Enzymatische Medien</td></tr><tr><td>MEM? + GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>32561-037</td><td>Maintenance Media,&nbsp; Growth Media & Reifemedien</td></tr><tr><td>Maus-Epidermalwachstumsfaktor (EGF)</td><td>BD Biosciences</td><td>354010</td><td>Reifemedien</td></tr><tr><td>Nalgene Transparentes Polycarbonat Classic Design Desiccator</td><td>Thermowissenschaftlich</td><td>5311-0250</td><td>Vakuum-Austrockner&nbsp;</td></tr><tr><td>Paraffin</td><td>Fisher Scientific</td><td>83-30</td><td>Gewebeverarbeitung & Einbettung</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Dissektionsmedien, enzymatische Medien & Wartungsmedien</td></tr><tr><td>-Spitzen</td><td>Origio</td><td>MXL3-200</td><td>Kultur</td></tr><tr><td>VECTASHIELD PLUS Antifade-Montagemedium mit DAPI</td><td>Vektorlabore</td><td>H-2000</td><td>Färbung des Eikerns</td></tr><tr><td>Xylen</td><td>Mercedes Scientific</td><td>9840</td><td>Gewebeverarbeitung</td></tr><tr><td>&alpha;-Tubulin (11H10) Rabbit mAb (Alexa Fluor 488 Conjugate)</td><td>Zell-Signaltechnik</td><td>5063S</td><td>Ei-Tubulin-Fleck</td></tr><tr><td><stark>Ausrüstung</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bauplattform 2</td><td>Formlabs, Inc</td><td>BP-F3-02-01&nbsp;</td><td>3D-Druckerkomponente</td></tr><tr><td>Dino-Lite Edge AF4915ZTL, USB 2.0</td><td>Dino-Lite</td><td>AF4915ZTL</td><td>Imager für Zeitraffer-Einrichtung</td></tr><tr><td>Form 3 Harztank V2.1 & NBSP;</td><td>Formlabs, Inc</td><td>RT-F3-02-01</td><td>3D-Druckerkomponente</td></tr><tr><td>Form 3B+ 3D-Drucker</td><td>Formlabs, Inc</td><td>F3B-P-PRINTER</td><td>Formlabs Stereolithographie (SLA) 3D-Drucker</td></tr><tr><td>Form Cure&nbsp;</td><td>Formlabs, Inc</td><td>FH-CU-01</td><td>Härteplattform&nbsp;</td></tr><tr><td>Formwash</td><td>Formlabs, Inc</td><td>FH-WA-01</td><td>Waschplattform</td></tr><tr><td>Sprühflasche mit Pumpen-Verdampfer</td><td>VWR</td><td>0309-3005</td><td>Auftragen von Entformungsmittel</td></tr><tr><td>Lichtfokussierer/Konzentratorkappe für die Edge-Serie (ausgenommen T5- und T8-Modelle)</td><td>Dino-Lite</td><td>N3C-R</td><td>Imager-Komponente für Zeitraffer-Einrichtung</td></tr><tr><td>Mount Holder-Bündel, das das RK-10 Rack und die RK-10-EX Arm Extension kombiniert</td><td>Dino-Lite</td><td>RK-10A</td><td>Imager-Komponente für Zeitraffer-Einrichtung</td></tr><tr><td>Gewebe-Embedder</td><td>Leica</td><td>HistoCore Arcadia</td><td>Mikroformen einzubetten</td></tr><tr><td>Gewebeprozessor</td><td>Leica</td><td>TP1020</td><td>Zur Herstellung von Mikroformen</td></tr><tr><td>211DS Schüttelinkubator (Orbitalshaker)</td><td>Labnet International</td><td>I-5211-DS</td><td>Inkubation von Eierstöcken in enzymatischen Medien zur Freisetzung von Follikeln</td></tr><tr><td>Software&nbsp; </stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Autodesk Fusion</td><td>Autodesk, Inc</td><td></td><td>Computergestützte Designsoftware (CAD). Autodesk bietet kostenlosen Bildungszugang über das Autodesk Education-Programm an.</td></tr><tr><td>DinoCapture 3.0 Version 1.1.1.3&nbsp;</td><td>Dino-Lite</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Nationale Gesundheitsinstitute</td><td></td><td>OCT-Bilder analysieren und Follikel messen</td></tr><tr><td>PreForm</td><td>Formlabs, Inc</td><td></td><td>Kostenlose Druckvorbereitungssoftware, die für die Stereolithographie (SLA)-Drucker von Formlabs entwickelt wurde.&nbsp;</td></tr></tbody></table>

herstellung und verwendung von anpassbaren agaroseformen für die gerüstfreie ovarialfollikelkultur von mäusen

Production and Use of Customizable Agarose Molds for Scaffold-Free Mouse Ovarian Follicle Culture

Herstellung und Verwendung von anpassbaren Agaroseformen für die gerüstfreie Ovarialfollikelkultur von Mäusen

The ovarian follicle is the functional unit of the ovary that produces hormones and gametes needed to sustain female reproductive function and health. The ...

production-use-customizable-agarose-molds-for-scaffold-free-mouse

Research

Forschung

JoVE Journal

Developmental Biology

Entwicklungsbiologie

Eine neue Methode zur Ovarialfollikel Kapselung in einer 3D-Fibrin-Alginat durchdringendes Netzwerk beschrieben. Dieses System kombiniert strukturelle Unterstützung mit proteolytischen Abbau der Entwicklung von unreifen Follikeln Unterstützung, um zu reifen Eizellen zu produzieren. Diese Methode kann zur Kultur Zellaggregate angewendet werden, um Zell-Zell-Kontakte ohne Beschränkungen für die Ausweitung aufrecht zu erhalten.

Eine Methode zur Ovarialfollikel Encapsulation und Kultur in einem Proteolytisch Degradable 3 Dimensional-System

Kultur von normalen Zellen in ihrer dreidimensionalen Kontext stellt eine alternative Methode zur frühen Ereignisse für die zelluläre Transformation und Tumorentstehung erforderlich studieren. Diese Methode wird verwendet, um normale Eierstock-und Eileiter Zellen wachsen zu frühen Ereignisse bei Eierstockkrebs Bildung zu studieren.

Alginat Hydrogele für Three-Dimensional Organ Culture der Eierstöcke und Eileitern

Dieses Protokoll beschreibt die Primärkultur / Co-Kultur von Maus-Eierstockgewebe, mit Eierstöcke von neugeborenen Mäusen und individuelle Eibläschen von präpubertären Mäusen. Die Kulturtechniken unterstützt Entwicklung in einer hoch physiologischer Weise ermöglicht Untersuchung der Wirkung von äußeren Mitteln an den Eierstöcken und der Wechselwirkungen zwischen Follikeln.

Kultur und Co-Kultur von Maus Eierstöcke und Eibläschen

Dieses Protokoll beschreibt eine Plattform für die Herstellung von selbst-zusammengebauten Gewebe Ringe in variablen Größen mit einer angepassten 3D-gedruckten Kunststoff-Formenbau. PDMS-negative sind in der Form 3D-gedruckten geheilt; dann wird Agarose in die ausgehärtete PDMS negative gegossen. Zellen sind in die resultierende Agarose-Brunnen gesät, wo sie ins Gewebe Ringe aggregieren.

Herstellung von benutzerdefinierten Agarose Brunnen für die Aussaat von Zelle und Gewebe Ring Selbstmontage mit 3D-Druck Formen

Hier werden zwei Protokolle für die Verkapselung von Schweineeioozyten unter 3D-Kulturbedingungen vorgestellt. In der ersten werden Cumulus-Oozyten-Komplexe (COCs) in Fibrin-Alginat-Perlen eingekapselt. In der zweiten werden sie mit fluorierten Ethylenpropylenpulverpartikeln (Mikrobioreaktoren) umschlossen. Beide Systeme sorgen für optimale Bedingungen, um ihre 3D-Organisation aufrechtzuerhalten.

Proteolytisch abgebaute Alginat-Hydrogele und hydrophobe Mikrobioreaktoren zur Poren-Oozyten-Verkapselung

Hier werden vier Methoden zur Erzeugung von Hodenorganoiden aus primären neonatalen murinen Hodenzellzellen beschrieben, d.h. extrazelluläre Matrix (ECM) und ECM-freie 2D- und 3D-Kulturumgebungen. Diese Techniken haben mehrere Forschungsanwendungen und sind besonders nützlich für das Studium der Hodenentwicklung und Physiologie in vitro.

Extra Cellular Matrix-Based und Extra Cellular Matrix-Free Generation of Murine Hodenorganoide

Das vorliegende Protokoll beschreibt eine Technik zur kostengünstigen Herstellung von Gewebesphäroiden in großem Maßstab unter Verwendung eines 3D-gedruckten stempelähnlichen Geräts.

Erzeugung von Gewebesphäroiden über ein 3D-gedrucktes stempelähnliches Gerät

Dieses Protokoll beschreibt ein neuartiges dreidimensionales (3-D) Kulturmodell, bei dem ein Tyramin-gebundenes Hyaluronan-Hydrogel verwendet wird, um präantrale Follikel aus dem Eierstock der Maus zu verkapseln und zu kultivieren. Wir beschreiben auch zwei Ansätze zur Kryokonservierung von Eierstockfollikeln durch Vitrifikation.

Anwendung eines neuartigen Hyaluron-Hydrogels für die dreidimensionale Follikelkultur und Methodik für die Kryokonservierung von Ovarialfollikeln in der Maus

In dieser Studie wird eine kostengünstige und effiziente Methodik zur Generierung von 3D-Zellstrukturen unter Verwendung eines stempelbasierten Systems zur Erstellung von Mikrovertiefungen in Agaroseformen vorgestellt. Das System fördert die Bildung einheitlicher Sphäroide/Organoide und verbessert so die Zellinteraktionen. Dieser Ansatz reduziert die experimentelle Variabilität und unterstützt Anwendungen in der Wirkstoffdiagnostik und im Tissue Engineering.

Erzeugung von dreidimensionalen Sphäroiden/Organoiden aus zweidimensionalen Zellkulturen mit Hilfe eines neuartigen Stempelgeräts

Wir beschreiben Methoden zur Isolierung somatischer maus-ovarialer Zellen aus einem stroma-angereicherten Anteil des Eierstocks und zur Erzeugung maus-ovarialer somatischer Organoide mittels eines gerüstfreien Ansatzes.

Untersuchung des Ovarialmikroumfelds: Methoden zur Isolierung, 2D-Kultur und organoiden Kultur somatischer Maus-Ovarialzellen

Erfahren Sie die gerüstfreie Ovarialfollikelkultur mit anpassbaren Agaroseformen für Mäuse. Diese Methode verbessert das Follikelwachstum und die Ovulationsraten im Vergleich zu herkömmlichen Hydrogel-Techniken.

Herstellung und Verwendung von anpassbaren Agaroseformen für die gerüstfreie Ovarialfollikelkultur von Mäusen

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