Name: Verbesserte räumliche Abbildung der Magenmuskelschichten der Maus mit einer modifizierten Swiss Roll-Technik (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 18 s
Description: Erfahren Sie die modifizierte Swiss-Roll-Technik zur räumlichen Abbildung aller Magenregionen der Maus in einem einzigen Kryoschnitt. Diese Methode ermöglicht präzise Immunfärbung und zuverlässige Analyse der Musculus gastricus.

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<li>Jiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+and+tracing+Grem1%28%2B%29+stromal+cells+in+an+Apc+%28Min%2F%2B%29+mouse+utilizing+cryopreserved+intestinal+sections+prepared+via+modified+Swiss-roll+technique%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Mapping and tracing Grem1(+) stromal cells in an Apc (Min/+) mouse utilizing cryopreserved intestinal sections prepared via modified Swiss-roll technique.</a> iScience. 27 (11), 111173(2024).</li>
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<li>Hayashi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperglycemia+increases+interstitial+cells+of+Cajal+via+MAPK1+and+MAPK3+signaling+to+ETV1+and+KIT%2C+leading+to+rapid+gastric+emptying%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Hyperglycemia increases interstitial cells of Cajal via MAPK1 and MAPK3 signaling to ETV1 and KIT, leading to rapid gastric emptying.</a> Gastroenterology. 153 (2), 521-535.e20 (2017).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>#5SF Zange</td><td>FEINE WISSENSCHAFTLICHE WERKZEUGE</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserum Albumin&nbsp;</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>ColdVision MC-LS LED-Lichtquelle</td><td>SCHOTT</td><td>MC-LS</td><td></td></tr><tr><td>Konfokalsoftware&nbsp;</td><td>Nikon</td><td>Nikon NIS-Elements Bildgebungssoftware</td><td></td></tr><tr><td>Kryoseales XYL</td><td>Epredida</td><td>9312-4</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindol, Dilaktat)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>Große Dissektionsschalen</td><td>Living Systems&nbsp; Instrumentierung</td><td>SKU: DD-90</td><td></td></tr><tr><td>Esel-Anti-Ziegen-AF647 pAb</td><td>Lebenstechnologien</td><td>A21447</td><td>Los: 1739289 RRID:AB_2535864</td></tr><tr><td>Esel-Anti-Maus AF555 pAb</td><td>Lebenstechnologien</td><td>A31570</td><td>Los: 1774719 RRID:AB_2536180</td></tr><tr><td>Esel-Anti-Kaninchen AF488 pAb</td><td>Lebenstechnologien</td><td>A21206</td><td>Los: 2668665 RRID:AB_2535792</td></tr><tr><td>E-Cadharin (1:400 Verdünnung)</td><td>BD Bioscience</td><td>610181</td><td>Los: 25510 RRID:AB_397580</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>ELITechGroup</td><td>$SS-071C</td><td></td></tr><tr><td>Epoxidbeschichtete Pinzetten</td><td>FEINE WISSENSCHAFTLICHE WERKZEUGE</td><td>11210-10</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>459828-4L</td><td></td></tr><tr><td>FLEXROHR 1,5 ml</td><td>Eppendorf</td><td>22364111</td><td></td></tr><tr><td>Mullschwämme</td><td>Fisherscientific</td><td>22-362-178</td><td></td></tr><tr><td>Gehärtete feine Schere</td><td>FEINE WISSENSCHAFTLICHE WERKZEUGE</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>Hämatoxylin</td><td>Epredia</td><td>7211</td><td></td></tr><tr><td>KIT (0,2 & Mikro; g/mL; 1:1000 Verdünnung)</td><td>R& D-Systeme</td><td>AF1356</td><td>Los: IEO0217101 RRID: AB_354750</td></tr><tr><td>LINSENREINIGUNGSLÖSUNG 1 OZ SPRÜHFLASCHE</td><td>Nikon</td><td>77013066</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopabdeckungsglas</td><td>Fisher Scientific</td><td>12541016</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop-Objektträger</td><td>CardinalHealth</td><td>M6133A</td><td></td></tr><tr><td>Kleine Pins</td><td>FEINE WISSENSCHAFTLICHE WERKZEUGE</td><td>26002-20</td><td></td></tr><tr><td>MYH11 (1:400 Verdünnung)</td><td>Biomedizinische Technologien</td><td>BT-562</td><td>RRID:AB_10013421</td></tr><tr><td>Nagellack</td><td>SÜNDIGE FARBEN</td><td>7.33855E+11</td><td></td></tr><tr><td>Nadel 30 G x 1/2 Zoll & nbspoon;</td><td>BD Bioscience</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>158127-500G</td><td></td></tr><tr><td>Personna-Klingen mit einer Schneide</td><td>The Razor Blade Co.</td><td>76247-652</td><td></td></tr><tr><td>ReadyProbes Maus-auf-Maus-IgG-Blockierungslösung (30x)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R37621</td><td>Los: 3226230</td></tr><tr><td>SlowFade Diamond Antifade Mountant (Montagemedien)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S36972</td><td></td></tr><tr><td>StainTray 10 Folien-Färbesystem</td><td>Simport Scientific</td><td>M918-2</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop 0,8x-5x</td><td>Nikon</td><td>SMZ645</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose&nbsp;</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>S9378-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Oberflächenverstärker X-100 (Triton X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>28314</td><td></td></tr><tr><td>TMEM16A (ANO1: 1:400 Verdünnung)</td><td>Abcam</td><td>ab53212&nbsp;</td><td>Los: GP3295656-1 RRID: AB_883075</td></tr><tr><td>Transferpipet</td><td>Falcon</td><td>357575</td><td></td></tr><tr><td>TUBB3 (1:400 Verdünnung)</td><td>Zell-Signaltechnik</td><td>4466</td><td>Los: 5 RRID: AB_1904176</td></tr><tr><td>Xylenes&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>X3P-1GAL</td><td>LOS 206238</td></tr></tbody></table>

verbesserte räumliche abbildung der magenmuskelschichten der maus mit einer modifizierten swiss roll-technik

Enhanced Spatial Mapping of Mouse Gastric Muscle Layers Using a Modified Swiss Roll Technique

Mit der neuen Methode umfassten die magengewürfelten Maus alle drei Hauptbereiche des Magens: Fundus, Korpus und Antrum, sowie einen kleinen Teil der Speiseröhre und des Zwölffingerdarms in einem einzigen Abschnitt. Die Einbeziehung des gesamten Magens in einem Abschnitt ermöglicht eine umfassende regionale Analyse (Abbildung 1). Die Hämatoxylin- und Eosin-(H&amp;E)-Färbung ganzer Bilder der Magen-Swiss-Rollen zeigte eine gut erhaltene Magenarchitektur in allen Regionen, was eine klare Visualisierung der Mucosal-, Submucosal- und Muscularis-Schichten ermöglicht (Abbildung 3). Abbildung 4 zeigt eine repräsentative immunfluoreszente Färbung der interstitiellen Zellen von Cajal (ICC; Schrittmacherzellen, die rhythmische langsame Wellen erzeugen, die der phasischen Darmbeweglichkeit zugrunde liegen; identifiziert durch KIT und ANO1), enterischen Neuronen (Neuronen des enterischen Nervensystems, die die gastrointestinale Motilität koordinieren; identifiziert durch TUBB3-Immunfärbung) und Kernen (DAPI). In der Magenschleimhaut wird KIT ebenfalls in Paneth- und Becherzellen exprimiert, wie zuvor berichtet 9,10,11. ANO1 ist auch im Magenepithel hoch exprimiert, insbesondere in den säulenförmigen Epithelzellen des Fundus, was mit seiner Rolle beim Chloridtransport und der Schleimhautsekretion11 übereinstimmt. Zusätzlich wird TUBB3 laut Daten aus dem Human Protein Atlas12,13 in bestimmten Magenendokrinzellen und schleimproduzierenden Zellen exprimiert. Abbildung 5 zeigt eine repräsentative immunfluoreszente Färbung glatter Muskelzellen, die mit MYH11 markiert sind, der Magenschleimhautepithelfellen, die mit E-Cadherin markiert sind, und ICC, die mit KIT markiert sind. MYH11 wird auch in Myofibroblasten in der Magenschleimhaut exprimiert, wie zuvorberichtet 14. Zusammen bestätigen diese Immunfluoreszenzergebnisse, dass unser Protokoll die Gewebearchitektur bewahrt.
<img alt="Abbildung 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig1.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 1"> 
Abbildung 1: Vorbereitung der "Schweizer Rolle" des Mausmagens für die Kryosektion. (A) Der gesamte Magen wird unmittelbar nach der Entnahme in eine schwarze, silikonbeschichtete Dissektionsschale gelegt, die mit kalter phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) gefüllt ist, um die Gewebeintegrität zu erhalten. (B) Der Magen wird entlang der Mitte des Duodenums geöffnet. (C) Der Magen wird vorsichtig gedehnt und in der Schale festgehalten, sodass er flach liegt, ohne übermäßige Spannung auszuüben. Eine rote gestrichelte Linie ist entlang des Gewebes umrandet, um anzuzeigen, wo es geschnitten werden soll, um das Rollen zu erleichtern. (D) Der geöffnete und fixierte Magen wird auf PBS-angefeuchtetes Filterpapier gelegt, um das Zusammenrollen in eine kompakte Form vorzubereiten. Der rote Pfeil zeigt die Richtung des Magenrolls. (E) Gewebestücke werden in eine optimale Schneidetemperatur (O.C.T.) Verbindunge eingebettet und auf Trockeneis eingefroren, um sich auf die Kryosektion vorzubereiten. (F) Die gefrorenen Blöcke werden bei −80 °C gelagert und bei 5 μm Dicke zur nachgelagerten Analyse kryosektioniert. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzusehen.</a>
<img alt="Abbildung 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig2.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 2"> 
Abbildung 2: ND-Akquisitionsaufbau und Sättigungsvisualisierung während der Z-Stack-Bildgebung. (A) Laser- und Detektoreinstellungen, die in der konfokalen Bildgebungssoftware für Mehrkanal-Spektralbildgebung konfiguriert sind. Es werden vier Fluorophore verwendet: 4′,6-Diamidino-2-Phenylindol (DAPI), Alexa Fluor 488 (AF488), Alexa Fluor 555 (AF555) und Alexa Fluor 647 (AF647), jeweils gepaart mit entsprechenden Anregungslasern und Emissionsdetektoren. Der Spektralgraph zeigt Anregungs- und Emissionskurven, was eine Anpassung zur Minimierung von Übersprechen und zur Optimierung der Signalerkennung ermöglicht. (B) Die Belichtungseinstellungen werden für jedes Fluorophor einzeln angepasst, um Pixelsättigung zu vermeiden und Details in Hochintensitätsbereichen zu erhalten. (C) Große Bildaufnahmeeinstellungen (z. B. 6 × 6 Felder) ermöglicht die Visualisierung der gesamten Magen-Schweizer-Rolle; Die Bildfeldgröße sollte entsprechend der Größe und Kompaktheit des gerollten Gewebes angepasst werden. (D) ND-Erfassungsfenster zeigt Z-Stack-Parametereinstellungen an. Der Z-Bereich wird definiert, indem die oberen und unteren Positionen des Magenmuskels ausgewählt werden, wobei acht Schritte so konfiguriert sind, dass die gesamte Gewebetiefe für eine dreidimensionale (3D) Analyse erfasst wird. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzusehen.</a>
<img alt="Abbildung 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig3.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 3"> 
Abbildung 3: Bild einer mit Hämatoxylin und Eosin gefärbten Maus-Magen-Schweizer Rolle. Das Kachelscannen demonstriert die Fähigkeit, die gesamte Magen-Swiss-Rolle einer acht Wochen alten weiblichen C57BL/6J-Maus zu visualisieren. Wichtige anatomische Bereiche sind angezeigt, darunter die Speiseröhre (rote gestrichelte Linie), der untere Speiseröhren-Schließmuskel (violette gestrichelte Linie), der Fundus (schwarze gestrichelte Linie), der Korpus (blaue gestrichelte Linie), das Antrum (grüne gestrichelte Linie) und der Duodenum (orange gestrichelte Linie). Maßstabsleiste: 1000 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig3large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.</a>
<img alt="Abbildung 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig4.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 4"> 
Abbildung 4: Konfokale Bilder einer Schweizer Rolle eines ganzen Mausmagens: ANO1, KIT, TUBB3. Obere Panels: Repräsentative genähte konfokale Bilder eines Magen-Swiss-Rolls einer 8 Wochen alten weiblichen C57BL/6J-Maus, die Immunfärbung für ANO1 (grün), KIT (cyan), TUBB3 (gelb) und Kerne (blau) zeigen. Der gesamte gerollte Magen, einschließlich Fundus, Corpus und Antrum, wird visualisiert. Maßstabsbalken: 1000 μm. Untere Panels: Vergrößerte Ansichten des Bereichs, der durch das weiß gestrichelte Feld in den oberen Panels umrandet wird und zelluläre Details der Zwischenzellen von Cajal (ANO1+ und KIT+; gelbe Pfeile) und enterische Neuronen (TUBB3⁺; rote Pfeile) hervorhebt. Maßstabsbalken: 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig4large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.</a>
<img alt="Abbildung 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig5.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 5"> 
Abbildung 5: Konfokale Bilder einer Schweizer Rolle eines ganzen Mausmagens: MYH11, KIT, E-Cadherin. Obere Panels: Repräsentative genähte konfokale Bilder einer Magen-Schweizer Rolle einer acht Wochen alten weiblichen C57BL/6J-Maus, die Immunfärbung für MYH11 (grün), KIT (cyan), E-Cadherin (gelb) und Kerne (blau) zeigen. Der gesamte gerollte Magen, einschließlich Fundus, Corpus und Antrum, wird visualisiert. Maßstabsbalken: 1000 μm. Untere Paneele: Vergrößerte Ansichten der Region, die durch das weiß gestrichelte Feld in den oberen Paneelen umrandet werden. Weiß gepunktete Linien markieren das schleimhautepithel (E-Cadherin) und die Muskelschicht (MYH11). Weiße Pfeile zeigen KIT+- Zwischenzellen von Cajal (ICC) an. Maßstabsbalken: 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig5large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.</a>

Verbesserte räumliche Abbildung der Magenmuskelschichten der Maus mit einer modifizierten Swiss Roll-Technik

Spatial "omics" technologies provide unprecedented opportunities to study the biology and interactions of individual cells of the gastric neuromuscular ...

enhanced-spatial-mapping-mouse-gastric-muscle-layers-using-modified

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Forschung

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Medicine

Medizin

Die interstitiellen Zellen von Cajal (ICC) sind die Schrittmacher-Zellen des Magen-Darm (GI-Trakt). Sie bilden komplexe Netzwerke zwischen glatten Muskelzellen und postganglionären Neuronen Fasern GI Kontraktilität zu regulieren. Hier präsentieren wir Immunfluoreszenzverfahren Querschnitts-und Ganzkörper-Mount-Visualisierung von Maus-ICC-Netzwerke.

Visualisierung der interstitiellen Zellen von Cajal (ICC) Netzwerk in Mäuse

Die in vivo Messung von Kontraktionen der glatten Muskulatur entlang des Magen-Darm-Trakts von Versuchstieren ist nach wie vor eine leistungsfähige, wenn auch wenig genutzte Technik. Flexible Dehnungsmessstreifen mit zwei Elementen sind nicht im Handel erhältlich und müssen hergestellt werden. Dieses Protokoll beschreibt die Konstruktion von zuverlässigen, kostengünstigen Dehnungsmessstreifen für die akute oder chronische Implantation bei Nagetieren.

Herstellung und Implantation von Miniatur-Zweielement Dehnungsmessstreifen für Mess<em&gt; In Vivo</em&gt; Magen-Darm-Kontraktionen in Nagetiere.

Dieser Artikel demonstriert chirurgische Verfahren des gastroösophagealen Reflux bei Mäusen. Diese Modelle sind nützliche Werkzeuge für die Forschung zu Mechanismen und Behandlung der gastroösophagealen Refluxkrankheit und potenziell des Barrett-Ösophagus und des Speiseröhrenadenokarzinoms.

Chirurgische Modelle aus gastroösophagealen Reflux mit Mäusen

Die Verwendung einer einfachen Vorrichtung zum Schneiden und 'Rollen' von Mäusedärmen, um schnell ganze Reittierpräparate vorzubereiten, wird beschrieben.

Eine einfache Vorrichtung, um schnell vorbereiten Whole Mounts des Mausdarm

Kürzlich verfügbare Videoaufzeichnungs- und STmap-Techniken (spatiotemporal mapping) ermöglichen es, sowohl Fortpflanzungs- als auch Mischmuster der Darmmotilität zu visualisieren und zu quantifizieren. Das Ziel dieses Protokolls ist es, die Generierung und Analyse von STmaps mit Hilfe des GastroIntestinal Motility Monitoring (GIMM) Systems zu erklären.

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Dieser Artikel beschreibt eine Videobildgebungstechnik und hochauflösende raumzeitliche Kartierung, um Veränderungen in der neuronalen Regulation der Dickdarmmotilität bei erwachsenen Mäusen zu identifizieren. Subtile Auswirkungen auf die gastrointestinale Funktion (GI) können mit diesem Ansatz in isolierten Gewebepräparaten nachgewiesen werden, um unser Verständnis von GI-Erkrankungen zu verbessern.

Video Imaging und Raum-Zeit-Karten zur Analyse Gastrointestinale Motilität bei Mäusen

Die genaue Identifizierung und Lokalisierung von Epithelzellen entlang der Darmschleimhaut sind wesentlich unterschiedlichen Zelllinien zu definieren. Die richtige Darstellung von Darmgewebe ist von entscheidender Bedeutung für die Identifizierung von Proteinexpressionsmuster mit maximaler Auflösung. Diese Studie hat zum Ziel, die optimalen Verfahren und Bedingungen für die Verarbeitung der Maus Darmgewebe zu beschreiben.

Verbesserte Schweizer Walztechnik für Darmgewebepräparation zur immunhistochemischen und Immunofluoreszenz-Analysen

Das folgende beschreibt die Leistung der vertikalen Sleeve-Gastrektomie bei Mäusen. Dies ist eine Art von Gewichtsverlust Chirurgie, die etwa 70 % des Magens entfernt wird.

Ein Mausmodell der vertikalen Sleeve-Gastrektomie

Der Darm ist wichtig für die Verdauung und Resorption. Jede Region - Duodenum, Jejunum, Ileum, Dickdarm - erfüllt aufgrund einzigartiger zellulärer Strukturen unterschiedliche Funktionen. Das Studium der Darmphysiologie erfordert eine sorgfältige Gewebeanalyse. Dieses Protokoll beschreibt die Gewebefixierung und -verarbeitung mit der Swiss-Roll-Technik, um eine genaue Immunfärbung durch die richtige Gewebekonservierung und -ausrichtung zu gewährleisten.

Optimiertes Protokoll für intestinale Swiss Rolls und Immunfluoreszenzfärbung von in Paraffin eingebettetem Gewebe

In dieser Studie wird eine 3D-Bildgebungsmethode vorgestellt, bei der das gesamte Darmgewebe und die Multiphotonenmikroskopie zur Quantifizierung des sezernierten Schleims verwendet werden, was eine präzise volumetrische Analyse und Visualisierung der Schleimdynamik als Reaktion auf Reize wie Carbamoylcholinchlorid ermöglicht.

Dreidimensionale Quantifizierung von Darmschleim mittels Whole-Mount Tissue Imaging

Erfahren Sie die modifizierte Swiss-Roll-Technik zur räumlichen Abbildung aller Magenregionen der Maus in einem einzigen Kryoschnitt. Diese Methode ermöglicht präzise Immunfärbung und zuverlässige Analyse der Musculus gastricus.

Verbesserte räumliche Abbildung der Magenmuskelschichten der Maus mit einer modifizierten Swiss Roll-Technik

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