Verbesserte räumliche Abbildung der Magenmuskelschichten der Maus mit einer modifizierten Swiss Roll-Technik

Unsere Forschung konzentriert sich darauf, die Vorbereitung und Analyse des milden Magens für die Bildgebung zu verbessern. Wir haben die ursprünglich für den Mausdarm entwickelte Swiss Roll-Technik angepasst, sodass alle wichtigen Magenregionen, einschließlich Fundus, Korpus und Antrum, in einem einzigen Kryoschnitt zusammengebettet werden können. Dies ermöglicht es uns, die Magenstruktur und die zelluläre Zusammensetzung nebeneinander zu visualisieren und dabei eine genaue räumliche Ausrichtung und hohe Bildqualität zu erhalten.

Der Magen ist ein komplexes Organ mit empfindlichem Gewebe. Kleine Fehler können Zellen schädigen oder die Anordnung verzerren, was die hochauflösende Bildgebung und Immunfärbung inkonsistent macht. Unsere Schweizer Rolltechnik löst dies, indem alle Regionen, einschließlich Duodenum und Speiseröhre, in einem einzigen Kryoblock intakt bleiben, wodurch Experimente zuverlässiger und reproduzierbarer werden.

Zu Beginn schneiden Sie mit einer Schere entlang des ventralen Mesenteriums des Duodenum und Magens bis zum Stift am Korpus. Mit einer Transferpipette gefüllt mit PBS spülen Sie eventuelle Restnahrung aus dem Magenlumen aus. Dehnen Sie vorsichtig den offenen Bauch, um eine flache Ausrichtung zu erreichen.

Stecke das Gewebe nach der kurzen Fixierung wieder flach fest. Mit einer Schere schneiden Sie den Bauch entlang der gestrichelten Umrandung, um eine gleichmäßige Form zum Rollen zu erhalten. Legen Sie das gestutzte Magengewebe auf PBS-befeuchtetes Filterpapier.

Rollen Sie das Gewebe zu einer Schweizer Roll-Konfiguration und sichern Sie es, indem Sie einen Zahnstocher durch die Mitte führen. Nach dem Rollen wird eine 30-Gauge-Nadel eingesetzt, um die Form zu sichern. Bieg dann die Nadel in einem 90-Grad-Winkel, um den gerollten Bauch zu stabilisieren.

Fixiere das aufgerollte Gewebe in 4 % Paraformaldehyd bei vier Grad Celsius für sechs Stunden. Dann entferne die Stabilisierungsnadel vorsichtig. Das Gewebe in eine optimale Schneidetemperatur mit Verwendung von Einweg-Basisformen einbetten.

Dann friere ich den Schimmel auf Trockeneis ein. Sobald die Form vollständig eingefroren ist, lagern Sie die Form bei minus 80 Grad Celsius. Die neue Methode ermöglichte die Einbeziehung des Fundus, des Korpus, des Antrums, eines Teils der Speiseröhre und des Duodenums in einen einzelnen Maus-Magen-Schweizer-Rollabschnitt.

Die Färbung von Hämatoxylin und Eosin der Magen-Schweizer Rolle zeigte eine gut erhaltene Architektur im Fundus, Korpus, Antrum, Speiseröhre und Zwölffingerdarm mit deutlich sichtbaren Schleimhaut-, Submukosal- und Muscularis-Schichten. Die immunfluoreszente Färbung zeigte die Expression von KIT und ANO1 in den interstitiellen Zellen von Cajal sowie die Expression von Beta-Tubulin 3 in enterischen Neuronen, was die zelluläre Erhaltung in der gastrischen Schweizer Rolle bestätigte. Die KIT-Expression wurde auch in Paneth- und Becherzellen in der Magenschleimhaut nachgewiesen, während ANO1 hoch in fundischen Säulenepithelzellen exprimiert wurde.

Eine Expression von Beta-Tubulin-3 wurde in magrischen, endokrinen und schleimsekretierenden Zellen sowie in enterischen Neuronen beobachtet. Die Myosin-Heavy-Chain-11-Färbung bestätigte das Vorhandensein glatter Muskelzellen und Myofibroblasten in der Magenschleimhaut, während die E-Cadherin-Färbung Epithelzellen und erneut die KIT-Färbung die interstitiellen Zellen von Cajal markierten. Die Schweizer Straßentechnik kann die Forschung zu regionsspezifischen Veränderungen im Magengewebe vorantreiben.

Im Gegensatz zu traditionellen Ansätzen, die Regionen separat einbetten, verarbeitet die Swiss Roll-Technik alle Magenregionen unter identischen Bedingungen und spart so Zeit und Reagenzien. Dies macht es zu einer praktischen und skalierbaren Plattform für eine umfassende Analyse von Magengewebe sowohl bei Gesundheit als auch bei Krankheit.