Name: Multiplexierter Immunfluoreszenz-Assay zur räumlichen Bewertung von Altersmarkern in vivo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-07-24T12:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: Erfahren Sie, wie multiplexierte Immunfluoreszenz zur räumlichen Analyse seneszenter Zellen in menschlichen Geweben eingesetzt wird. Diese Methode ermöglicht die gleichzeitige Detektion mehrerer Biomarker in einem einzelnen Gewebeschnitt.

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<ol><li>Gorgoulis, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+senescence%3A+Defining+a+Path+Forward%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cellular senescence: Defining a Path Forward.</a> Cell. 179 (4), 813-827 (2019).</li>
<li>Hernandez-Segura, A., Nehme, J., Demaria, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cellular+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cellular senescence.</a> Trends Cell Biol. 28 (6), 436-453 (2018).</li>
<li>De Souza, N., Zhao, S., Bodenmiller, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+protein+imaging+in+tumour+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Multiplex protein imaging in tumour biology.</a> Nat Rev Cancer. 24 (3), 171-191 (2024).</li>
<li>Teo, Y. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch+signaling+mediates+secondary+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Notch signaling mediates secondary senescence.</a> Cell Rep. 27 (3), 997-1007 (2019).</li>
<li>Ogrodnik, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+minimal+information+on+cellular+senescence+experimentation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Guidelines for minimal information on cellular senescence experimentation in vivo.</a> Cell. 187 (16), 4150-4175 (2024).</li>
<li>Sharpless, N. E., Sherr, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forging+a+signature+of+in+vivo+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Forging a signature of in vivo senescence.</a> Nat Rev Cancer. 15 (7), 397-408 (2015).</li>
<li>Schürch, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordinated+cellular+neighborhoods+orchestrate+antitumoral+immunity+at+the+colorectal+cancer+invasive+front%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Coordinated cellular neighborhoods orchestrate antitumoral immunity at the colorectal cancer invasive front.</a> Cell. 182 (5), 1341-1359.e19 (2020).</li>
<li>Lin, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+multiplexed+immunofluorescence+imaging+of+human+tissues+and+tumors+using+t-CyCIF+and+conventional+optical+microscopes%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Highly multiplexed immunofluorescence imaging of human tissues and tumors using t-CyCIF and conventional optical microscopes.</a> eLife. 7, e31657(2018).</li>
<li>Tomimatsu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+immunofluorescence+cancelling+for+highly+multiplexed+imaging+to+capture+specific+cell+states%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Precise immunofluorescence cancelling for highly multiplexed imaging to capture specific cell states.</a> Nat Commun. 15, 3657(2024).</li>
<li>Kiessling, P., Kuppe, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+multi-omics%3A+novel+tools+to+study+the+complexity+of+cardiovascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Med%22%5BJournal%5D)">Spatial multi-omics: novel tools to study the complexity of cardiovascular diseases.</a> Genome Med. 16 (1), 14(2024).</li>
<li>Chaib, S., Tchkonia, T., Kirkland, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+senescence+and+senolytics%3A+the+path+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Cellular senescence and senolytics: the path to the clinic.</a> Nat Med. 28, 1556(2022).</li>
<li>Freund, A., Laberge, R. M., Demaria, M., Campisi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lamin+B1+loss+is+a+senescence-associated+biomarker%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Lamin B1 loss is a senescence-associated biomarker.</a> Mol Biol Cell. 23 (11), 2066-2075 (2012).</li>
<li>Eng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+framework+for+multiplex+imaging+optimization+and+reproducible+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">A framework for multiplex imaging optimization and reproducible analysis.</a> Commun Biol. 5 (1), 1-11 (2022).</li>
<li>Wallis, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence-associated+morphological+profiles+%28SAMPs%29%3A+an+image-based+phenotypic+profiling+method+for+evaluating+inter-+and+intra-model+heterogeneity+of+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+%28Albany+NY%29%22%5BJournal%5D)">Senescence-associated morphological profiles (SAMPs): an image-based phenotypic profiling method for evaluating inter- and intra-model heterogeneity of senescence.</a> Aging (Albany NY). 14, 1-27 (2022).</li>
<li>González-Gualda, E., Baker, A. G., Fruk, L., Muñoz-Espín, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+assessing+cellular+senescence+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">A guide to assessing cellular senescence in vitro and in vivo.</a> FEBS J. 288 (1), 56-80 (2021).</li>
<li>O’Sullivan, E. A., Wallis, R., Mossa, F., Bishop, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+paradox+of+senescent-marker+positive+cancer+cells%3A+challenges+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Aging%22%5BJournal%5D)">The paradox of senescent-marker positive cancer cells: challenges and opportunities.</a> NPJ Aging. 10 (1), 1-11 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>30% Wasserstoffperoxid (H2O2)</td><td>Merck</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>Antigenfreilegungslösung 1 (H3300) (ARS1)</td><td>Vector Labs.</td><td>H-3300</td><td>Zubereitung mit 12,5 ml Antigenfreilegungslösung + 237,5 ml ddH2O</td></tr><tr><td>Antigenfreilegungslösung 2 (ARS2)</td><td>Sigma</td><td>T6066 / E5134</td><td>10x Stammlösung zubereiten (12,9 g Trizma Base, 3,7 g EDTA, 5 mL Tween 20, 995 mL ddH2O).&nbsp;</td></tr><tr><td>Bovines Serumalbumin (BSA)</td><td>Merck</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>Große Entwachsungslösung</td><td>Leica</td><td>AR9222</td><td></td></tr><tr><td>Große Epitopfreilegung 1 (ER1)</td><td>Leica</td><td>AR9961</td><td></td></tr><tr><td>Große Epitopfreilegung (ER2)</td><td>Leica</td><td>AR9640</td><td></td></tr><tr><td>Große Waschlösung</td><td>Leica</td><td>AR9590</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Merck</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>Doppelt destilliertes Wasser (ddH20)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Merck</td><td>472301</td><td></td></tr><tr><td>Eselseren</td><td>Merck</td><td>D9663</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Merck</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Merck</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Merck</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Phosphat-gepufferte Saline (PBS)</td><td>Merck</td><td>BP399</td><td></td></tr><tr><td>Propylgallat</td><td>Merck</td><td>P3130</td><td></td></tr><tr><td>Natriumbicarbonat</td><td>Merck</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Triton X 100</td><td>Merck</td><td>H5141</td><td></td></tr><tr><td>Trizma Base</td><td>Merck</td><td>T6066</td><td></td></tr><tr><td>Tween20</td><td>Merck</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>Weitere Verbrauchsmaterialien oder Geräte</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Decloaking-Kammer</td><td>BioCare</td><td>DC2012</td><td></td></tr><tr><td>Dampfstreifen</td><td>BioCare</td><td>613QC</td><td></td></tr><tr><td>Bond RXm Auto Slide Stainer</td><td>Leica</td><td>HIS2330</td><td>Bezeichnet als automatisierter Objektträger-Färbeständer&nbsp;</td></tr><tr><td>Cell DIVE</td><td>Leica</td><td>29429159</td><td>Bezeichnet als Multiplex-Fluoreszenz-Imaging-System&nbsp;</td></tr><tr><td>Click Well Objektträgerhalter</td><td>Leica</td><td>29463259</td><td>Bezeichnet als Objektträgerhalter ohne Abdeckglas&nbsp;</td></tr><tr><td>Antikörperliste</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD31 (Pecam-1)</td><td>Cell Signalling</td><td>61255</td><td>Klon: 89C2 Fluorophor: AF555 Verdünnung: 1 zu 50</td></tr><tr><td>CD8a</td><td>BioLegend</td><td>372906</td><td>Klon: C8/144B Fluorophor: Alexa 647 Verdünnung: 1 zu 100</td></tr><tr><td>CDKN2A/p16</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-56330 AF647</td><td>Klon: jc8 Fluorophor: Alexa 647 Verdünnung: 1 zu 200</td></tr><tr><td>FOXP3</td><td>BioLegend</td><td>320114</td><td>Klon: 206D Fluorophor: Alexa 647 Verdünnung: 1 zu 50</td></tr><tr><td>Keratin 15</td><td>Abcam</td><td>ab194065</td><td>Klon: EPR1614Y Fluorophor: AF_488 Verdünnung: 1 zu 200</td></tr><tr><td>Ki67</td><td>Abcam</td><td>ab215226</td><td>Klon: EPR3610 Fluorophor: AF555 Verdünnung: 1 zu 50</td></tr><tr><td>Lamin B1</td><td>Abcam</td><td>ab194106</td><td>Klon: EPR8985(B) Fluorophor: AF_488 Verdünnung: 1 zu 100</td></tr><tr><td>PanCK_AE1/AE3</td><td>Thermofisher</td><td>53-9003-82</td><td>Klon: AE1/AE3 Fluorophor: AF_488 Verdünnung: 1 zu 100</td></tr><tr><td>SMA</td><td>R&amp;D Systems</td><td>IC1420S</td><td>Klon: 1A4 Fluorophor: Alexa 750 Verdünnung: 1 zu 100</td></tr><tr><td>Vimentin</td><td>Cell Signalling</td><td>69227</td><td>Klon: D21H3 Fluorophor: Alexa 750 Verdünnung: 1 zu 100</td></tr></tbody></table>

multiplexierter immunfluoreszenz-assay zur räumlichen bewertung von altersmarkern in vivo

Multiplexed Immunofluorescence Assay for Spatial Assessment of Senescence Markers in vivo

Multiplexierter Immunfluoreszenz-Assay zur räumlichen Bewertung von Altersmarkern in vivo

Multiplexed immunofluorescence (IF) staining represents a step-change in sophistication over traditional IF imaging allowing sequential detection of ...

multiplexed-immunofluorescence-assay-for-spatial-assessment

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Zelluläre Seneszenz ist der Schlüsselfaktor bei der Entwicklung chronischer altersbedingter Pathologien. Die Identifizierung von Therapeutika, die auf seneszente Zellen abzielen, verspricht, eine gesunde Alterung zu verlängern. Hier präsentieren wir einen neuartigen Test zur Identifizierung von Senotherapeutika auf der Grundlage der Messung der seneszenzassoziierten Galactosidase-Aktivität in Einzelzellen.

SA--Galactosidase-basierter Screening-Test zur Identifizierung von Senotherapeutischen Arzneimitteln

Wir beschreiben eine schnelle Färbemethode zur multispektralen Bildgebung an gefrorenen Geweben.

Eine schnelle Methode zur multispektralen Fluoreszenz-Bildgebung von tiefgefrorenen Gewebeabschnitten

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Kombination von Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH) und Fluoreszenz-Immunhistochemie (IHC) sowohl in frisch gefrorenen als auch in fixierten Maus-Hirnschnitten, mit dem Ziel, Multilabel-FISH und Fluoreszenz-IHC-Signal zu erreichen. IHC zielte auf zytoplasmatische und membrangebundene Proteine ab.

Kombination von Multiplex-Fluoreszenz-In-situ-Hybridisierung mit fluoreszierender Immunhistochemie an frischen, gefrorenen oder fixierten Mäusehirnschnitten

Hier stellen wir eine auf Durchflusszytometrie basierende Methode zur Visualisierung und Quantifizierung mehrerer seneszenzassoziierter Marker in einzelnen Zellen vor.

Simultane Bildgebung und Durchflusszytometrie-basierte Detektion mehrerer fluoreszierender Seneszenzmarker in therapieinduzierten seneszenten Krebszellen

Ein Protokoll zur fluoreszierenden, durchflusszytometrischen Quantifizierung von seneszenten Krebszellen, die durch Chemotherapeutika in Zellkultur oder in murinen Tumormodellen induziert werden, wird vorgestellt. Optionale Verfahren umfassen die Co-Immunfärbung, die Probenfixierung zur Erleichterung der Analyse großer Chargen oder Zeitpunkte sowie die Anreicherung lebensfähiger seneszenter Zellen durch durchflusszytometrische Sortierung.

Far-Red Fluoreszenz-Seneszenz-assoziierte β-Galactosidase-Sonde zur Identifizierung und Anreicherung von seneszenten Tumorzellen mittels Durchflusszytometrie

In diesem Artikel wird ein Protokoll zur manuellen Tyramid-Signalverstärkung (TSA) Multiplex-Immunfluoreszenz (mIF) in Kombination mit Bildanalyse und räumlicher Analyse beschrieben. Dieses Protokoll kann mit formalinfixierten Paraffin-eingebetteten (FFPE) Schnitten für die Färbung von zwei bis sechs Antigenen pro Objektträger verwendet werden, je nachdem, welcher Objektträgerscanner im Labor verfügbar ist.

Multiplex-Immunfluoreszenz kombiniert mit räumlicher Bildanalyse zur klinischen und biologischen Beurteilung der Tumormikroumgebung

Dieser Bericht beschreibt ein automatisiertes Protokoll für Multiplex-Immunfluoreszenz-Assays (mIF) auf einem automatisierten Objektträgerfärbegerät. Es demonstriert die hohe Reproduzierbarkeit der räumlichen Proteomik auf Standard-Hochdurchsatz-Gewebe-Autostainern und Ganzobjektträger-Fluoreszenz-Imagern, was ideal für kundenspezifische mIF-Assays über eine große Anzahl von Gewebeobjektträgern in der translationalen Forschung ist.

Automatisierte Hochdurchsatz-Multiplex-Immunfluoreszenz-Assays für die translationale Forschung

Dieses Protokoll bietet eine reflektierte-licht-konfokale Mikroskopie zur objektiven, einzelzelligen Detektion der seneszenzassoziierten Beta-Galactosidase (SA-β-gal) Aktivität in der stromalen Gefäßfraktion, die aus menschlichem Fettgewebe isoliert ist. Die Methode ist mit der Immunzytochemie kompatibel, beinhaltet pH-Kontrollen zur quantitativen Beurteilung und bietet zudem eine sensiblere und weniger subjektive Alternative zur herkömmlichen SA-β-gal-Färbung.

Seneszenzdetektion mit reflektiertem Licht in der fettreichen stromalen Gefäßfraktion

Die mikroskopische Analyse von γH2AX Herde, die im Anschluss an die Phosphorylierung von H2AX an Ser-139 in Reaktion auf DNA-Doppelstrangbrüche zu bilden, hat sich zu einem wertvollen Werkzeug in der Strahlenbiologie. Hier haben wir ein Antikörper gegen mono-methylierte Histon H3 an Lysin 4 als epigenetische Marker aktiv Transkription Euchromatin, um die räumliche Verteilung der Strahlung induzierten γH2AX Bildung innerhalb des Zellkerns zu bewerten.

Auswertung der räumlichen Verteilung der γH2AX folgenden ionisierender Strahlung

Wir beschreiben ein Verfahren zur direkten Messung der Muskelkraft, Muskelkraft, kontraktile Kinetik und Ermüdbarkeit der isolierten Skelettmuskulatur in...

Ex Vivo Beurteilung der Kontraktilität, Müdigkeit und Alternans in isolierten Skelettmuskulatur

Erfahren Sie, wie multiplexierte Immunfluoreszenz zur räumlichen Analyse seneszenter Zellen in menschlichen Geweben eingesetzt wird. Diese Methode ermöglicht die gleichzeitige Detektion mehrerer Biomarker in einem einzelnen Gewebeschnitt.

Multiplexierter Immunfluoreszenz-Assay zur räumlichen Bewertung von Altersmarkern in vivo

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