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<table><tbody><tr><td>Künstlicher Speichel</td><td>Solarbio, China</td><td>A7990</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad Protein Assay Dye Reagenz</td><td>Bio-Rad, USA</td><td>5000006</td><td>Für Bradford-Assay</td></tr><tr><td>Coomassie-Blau</td><td>Abcam, UK</td><td>ab119211</td><td>Zur Proteinbanden-Visualisierung</td></tr><tr><td>Cortisol ELISA-Kit</td><td>Abcam, UK</td><td>ab154996</td><td></td></tr><tr><td>Cortisol LFA</td><td>Eigenherstellung</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heizplatte</td><td>Daihan Scientific, Republik Korea)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortison (Cortisol)</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>PHR1014</td><td></td></tr><tr><td>Laemmli-Stichprobenpuffer</td><td>GenDEPOT, USA</td><td>L1200-001</td><td>Zur Proteindenaturierung vor SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Membranhalter</td><td>GVS Filter Technology</td><td>1220950</td><td>13 mm Durchmesser-Halter</td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN&reg; Tetra Zelle für 0,75 mm Gele</td><td>Bio-Rad, USA</td><td>1658000</td><td>Für Gelelektrophorese</td></tr><tr><td>Mucin</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>M2378</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop 2000 Spektrophotometer</td><td>Thermo Fisher Scientific, USA</td><td></td><td>Für Protein-Assay</td></tr><tr><td>PES-Membranen</td><td>STERLITECH, USA</td><td>PES00313100</td><td>0,03 Mikron, 13 mm PES-Membran</td></tr><tr><td>Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>DUKSAN, Republik Korea</td><td>LB004</td><td></td></tr><tr><td>Gemischter menschlicher Speichel</td><td>Innovative Research Inc., USA</td><td>IRHUSL5ML</td><td></td></tr><tr><td>RBCM</td><td>Eigenherstellung</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Auflösungs-Gel-Puffer für PAGE</td><td>Bio-Rad, USA</td><td>1610798</td><td>Für die Herstellung des Auflösungs-Gels</td></tr><tr><td>Salivette Cortisol</td><td>SARSTEDT, Deutschland</td><td>51.1534.500</td><td>Speichel-Sammelset</td></tr><tr><td>Stapel-Gel-Puffer für PAGE</td><td>Bio-Rad, USA</td><td>1610799</td><td>Für die Herstellung des Stapel-Gels</td></tr><tr><td>Super&bull;SAL&trade;</td><td>Oasis Diagnostics, USA</td><td>SSAL-601</td><td>Speichel-Sammelset</td></tr><tr><td>Spritze</td><td>koreavaccine, Republik Korea)</td><td></td><td>1 mL Volumen</td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Bio-Rad, USA</td><td>1610800</td><td>Für die Acrylamid-Polymerisation</td></tr></tbody></table>

handgerät zur speichelvorbehandlung zur verbesserung der cortisolerkennung

Handheld Device for Saliva Pretreatment to Improve Cortisol Detection

Handgerät zur Speichelvorbehandlung zur Verbesserung der Cortisolerkennung

Salivary cortisol detection offers a noninvasive alternative to blood-based analysis. However, its practical implementation remains limited by the ...

Unsere Forschung konzentriert sich auf die Vorbehandlung von Speichel, um die Zuverlässigkeit der Cortisol-Detektion zu verbessern. Dieses Protokoll kann auf die Analyse von Biomarkern im Speichel mittels Lateral-Flow-Assay angewendet werden. Zunächst wird die kommerziell bezogene, anonymisierte, gepoolte menschliche Speichelprobe vor der Verwendung vorsichtig gemischt, um eine Homogenität zu gewährleisten.Bewahren Sie die Speichelproben bei vier Grad Celsius auf und verwenden Sie sie innerhalb des vom Hersteller empfohlenen Lagerzeitraums. Tauen Sie das blassrosa Pellet aus roten Blutkörperchenmembranen oder RBCM, das gemäß einem Standardprotokoll hergestellt und bei 80 Grad Celsius gelagert wurde, auf. Bereiten Sie eine Polyethersulfon- oder PES-Membran mit einer Porengröße von 30 Nanometern und einem Durchmesser von 13 Millimetern vor.Tragen Sie 100 Mikroliter einer 2 %igen (Gewicht pro Volumen) RBCM-Lösung auf eine Seite der PES-Membran auf. Verteilen oder dosieren Sie die Lösung vorsichtig tropfenweise, bis die gesamte Membranoberfläche vollständig benetzt ist. Inkubieren Sie die Membran 30 Minuten bei 50 Grad Celsius, um eine gleichmäßige Beschichtung und Trocknung zu gewährleisten.Bewahren Sie die beschichtete Membran bei Raumtemperatur auf und verwenden Sie sie innerhalb von 15 Tagen nach der Herstellung. Um das SaliFilter-Gerät herzustellen, platzieren Sie die mit RBCMs beschichtete PES-Membran in den vorgesehenen Filterhalter. Bauen Sie das Gerät zusammen, indem Sie die Einlass- und Auslasskomponenten sicher miteinander verbinden.Befestigen Sie eine Ein-Milliliter-Spritze am Geräteeinlass. Füllen Sie 500 Mikroliter Speichel in die mit dem SaliFilter-Gerät verbundene Spritze. Üben Sie sanften manuellen Druck aus, um die Speichelprobe etwa zwei Minuten lang durch die Membran zu leiten.Sammeln Sie den vorbehandelten Speichel am Auslass auf und verwenden Sie ihn sofort oder lagern Sie ihn bis zur weiteren Analyse bei vier Grad Celsius. Nach dem Nachweis der Proteine mittels SDS-PAGE geben Sie 150 µL des vorbehandelten Speichels auf das Probenfeld des LFA-Streifens zur Cortisol-Detektion. Lassen Sie die Probe 10 Minuten lang entlang des Streifens wandern.Stellen Sie die Testergebnisse mit einem Smartphone oder einem Bildgebungssystem sicher. Ziehen Sie die erfasste LFA-Datei per Drag & Drop in das ImageJ-Softwarefenster. Klicken Sie auf das Bild, wählen Sie Farbe und anschließend „Split Channels“, um die roten, grünen und blauen Kanäle zu trennen.Schließen Sie die roten und blauen Kanäle und verwenden Sie das Bild des grünen Kanals für die Analyse der Intensität der Testlinie. Verwenden Sie das Rechteck-Werkzeug, um den interessierenden Bereich (ROI) von 100 mal 10 Pixeln auszuwählen, der die Testlinie abdeckt. Öffnen Sie die Bilder der anderen LFA-Streifen und wenden Sie dieselbe ROI-Größe auf alle Proben an.Klicken Sie auf „analyze“ und wählen Sie „measure“, um den mittleren Intensitätswert des ROI der Testlinie zu erhalten. Wählen Sie anschließend einen benachbarten leeren Membranbereich mit der gleichen ROI-Größe aus und messen Sie die Hintergrundintensität. Exportieren Sie die Werte in eine Excel-Tabelle und berechnen Sie die normalisierte Intensität der Testlinie, indem Sie die Hintergrundintensität von der Intensität der Testlinie subtrahieren.Die Bewertung der Filtrationsleistung von SaliFilter durch Vergleich der Trübungsänderungen mit kommerziellen Speichel-Sammelkits zeigte eine hohe Trübung im unbehandelten Speichel, während die mit SaliFilter behandelten Proben sichtbar klar erschienen. Proben, die mit kommerziellen Kits aufbereitet wurden, zeigten nur eine begrenzte Verbesserung der Klarheit. Die Quantifizierung von Speichelproteinen mittels Absorption bei 280 Nanometern zeigte nach der Filtration eine etwaige Abnahme um 69 %.Ein Bradford-Assay zeigte eine deutliche Abnahme der Farbintensität in mit SaliFilter behandelten Proben, was einer etwa 80 %igen Verringerung der Gesamtproteinkonzentration entspricht. Die Kapillarflussanalyse zeigte, dass die Entfernung von Muzinen die Flussleistung in vorbehandeltem Speichel wiederherstellte. Die SDS-PAGE-Analyse bestätigte, dass Muzine stromaufwärts der Membran zurückgehalten wurden und in den aufbereiteten Proben fehlten.Dieses Protokoll ermöglicht es Forschern, lösliches Cortisol zu bewerten, nachdem Proteine und Mucine entfernt wurden. Nach der Filtration können die Proben mittels SDS-PAGE, Protein-Assays, ELISA oder anderen Methoden analysiert werden. Zukünftige Studien können diese Plattform mithilfe klinischer Speichelproben mit unterschiedlichen Cortisol-Konzentrationen validieren.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

Wir zeigen: (1) Verfahren zur Entnahme von Speichelproben bei kognitiv beeinträchtigten älteren Erwachsenen durch pflegende Angehörige im häuslichen Umfeld, (2) Verfahren zur Messung der Stressaktivität über Speichelcortisol und Alpha-Amylase und (3) repräsentative Profile. Protokolle, die es Forschern ermöglichen, stressbedingte Prozesse zu untersuchen, erweitern unser Verständnis von biologischer Empfindlichkeit und Anfälligkeit.

Speichelentnahme und Messung von Speichel-Cortisol und Alpha-Amylase in gebrechlichen älteren Erwachsenen in der Gemeinschaft über pflegende Angehörige

Cortisol (CORT) reichert sich in der wachsenden Haarschaft von Menschen und nicht-menschlichen Primaten. Wir beschreiben Methoden zur Extraktion und Analyse von Haar CORT mit hoher Genauigkeit und Empfindlichkeit. Messung von CORT Haar ist besonders für die Beurteilung chronischer Stress über einen Zeitraum von Wochen bis Monaten geeignet.

Extraktion und Analyse von Cortisol aus Menschen-und Affen-Haar

Die Forschung über die akademischen Leistungsemotionen von Studenten hat sich hauptsächlich auf Selbstberichte in Laborumgebungen gestützt. Studien beziehen biophysiologische Messungen selten in diese Selbstauskünfte ein. Dieses Protokoll beschreibt eine Methodik, die Selbstberichte mit biophysiologischen Messungen integriert, um die Reaktion und Leistung der Schüler während einer Laboruntersuchung zu bewerten.

Die Verwendung von galvanischen Haut Antworten, Biomarker aus dem Speichel, und Self-Berichte Bachelor-Student Leistung während einer Laborprüfung zur Beurteilung der Wirksamkeit

Es wird ein Studienprotokoll vorgestellt, das zeigt, wie man Zusammenhänge zwischen Musikhören und psychobiologischem Stress (gemessen an subjektivem Stressniveau, Speichelcortisol und Speichel-Alpha-Amylase) im täglichen Leben beurteilen kann. Es wird Beratung zu Studiendesign, Materialien, Methoden, Auswahl der Teilnehmer und statistischer Handhabung gegeben. Repräsentative Ergebnisse werden vorgestellt und diskutiert.

Die Bewertung der Auswirkungen von Musik hören über psychobiologische Belastungs im täglichen Leben

Haar-Cortisol-Konzentration-Analyse stellt eine Alternative zur traditionellen Maßnahmen von Cortisol; Wissenschaftler müssen jedoch um Haarproben von Afro-Amerikaner zu erfassen, kulturell informiert und kompetent sein. Dieses Protokoll soll eine kulturell fundierte Technik sammeln Haarproben für Cortisol Analyse von Afro-Amerikaner zu demonstrieren.

Sammeln von Haarproben für Cortisol Haaranalyse bei Afroamerikanern

Hier präsentieren wir Ihnen eine originelle gemischte Methode kombiniert eine quantitative und eine qualitative Herangehensweise, Teilnehmer Erfahrungen während der Trier Sozial Stress Test und Trier Sozial Stress Test für Gruppen genau zu untersuchen.

Faktischen phänomenologischen Ansatz zu Trier Sozial Stress Test: Sicht der gemischte Methoden

Wir präsentieren ein Protokoll zur Bestimmung des optimalen Extraktionslösungsmittels zur Messung von Cortisol aus Koalafell. Die in diesem Protokoll verwendeten Lösungsmittel sind Methanol, Ethanol und Isopropanol. Die Bestimmung eines optimalen Extraktionslösungsmittels hilft bei der zuverlässigen Messung von Fellen, um die Auswirkungen chronischer Belastungen auf Koalas zu bestimmen.

Cortisol Messung in Koala (Phascolarctos cinereus) Pelz

Der Zweck dieses Papiers ist es, Veränderungen des Stressniveaus nach der Visitation in drei verschiedenen Einstellungen zu identifizieren und die Methoden zu beschreiben, die bei der Identifizierung von Stressniveaus auf der Grundlage von Messungen von Speicheldrüsenkortisol, Amylase und einem psychologischen Selbstbericht verwendet werden. instrument.

Messung des biophysikalischen und psychologischen Stressniveaus nach der Visitation an drei Orten mit unterschiedlichen Naturniveaus

In dieser Studie stellen wir ein Protokoll zur Cortisolextraktion aus der Flosse und dem Kieferknochen von Störarten vor. Der Fin- und Kieferknochen-Cortisolspiegel wurde weiter untersucht, indem zwei Waschlösungsmittel mit anschließenden ELISA-Assays verglichen wurden. Diese Studie untersuchte die Durchführbarkeit von Kieferknochen-Cortisol als neuartigen Stressindikator.

Cortisol-Extraktion aus Störflossen und Kieferknochenmatrizen

Ein experimentelles Design wurde entwickelt, um die Echtzeiteinflüsse einer Prüfungserfahrung zu untersuchen, um die emotionalen Realitäten zu bewerten, die Studenten in hochschulischen Umgebungen und Aufgaben erleben. Dieses Design ist das Ergebnis eines fachübergreifenden (z.B. pädagogischePsychologie, Biologie, Physiologie, Ingenieurwesen) und multimodalen (z.B. Speicheldrüsenmarker, Vermessungen, Elektroder-Sensor)-Ansatz.

Ein fachübergreifendes und multimodales Experimentelles Design zum Studium authentischer Prüfungserfahrungen in naher Echtzeitzeit

Dieses Protokoll zeigt, wie schweinen, die in den verschiedenen Lebensphasen auf Lattenrostgehalten untergebracht sind, eine praktische sinnvolle Umweltanreicherung bietet und wie Speichelproben auf nicht-invasive Weise für die Messung von Cortisolkonzentrationen als Biomarker für akuten Stress.

Bereitstellung einer sinnvollen Umweltanreicherung und Messung von Speichel-Cortisol in Schweinen, die auf Lattenrost untergebracht sind

112 Aufrufe.  Kwangwoon University. Unsere Forschung konzentriert sich auf die Vorbehandlung von Speichel zur Verbesserung der Zuverlässigkeit der Cortisol-Erkennung. Dieses Protokoll kann auf die Analyse von Speichel-basierten Biomarkern unter Verwendung des Lateral-Flow-Assays angewendet werden. Um zu beginnen, mischen Sie vorsichtig die kommerziell erhältliche, anonymisierte, gepoolte menschliche Speichelprobe vor der Verwendung, um eine Homogenität zu gewährleisten.Lagern Sie die Speichelproben bei vier Grad Cels...

Handgerät zur Speichelvorbehandlung zur Verbesserung der Cortisolerkennung

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