Name: Trypsinizing und Subkultivierung Säugerzellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-12T13:28:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: Lernen Sie die Trypsinisierung und Subkultivierung von Säugerzellen für die Zellbiologie. Diese Methode zeigt, wie adhärente und Suspensionszellen bei Konfluenz passagiert werden, um Zellwachstum und Lebensfähigkeit zu erhalten.

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Der vollständige Text Protokoll für diesen experimentellen Ansatz ist in <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0101/current/abstract" target="_blank">Current Protocols in Cell Biology</a> .

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

trypsinizing und subkultivierung säugerzellen

Trypsinizing and Subculturing Mammalian Cells

Als Zellen Konfluenz erreichen, müssen sie subkultiviert oder passagiert werden. Andernfalls Subkultur konfluenten Zellen führt zu einer verringerten Mitoseindex und schließlich zum Zelltod. Der erste Schritt in Subkultivierung auf Zellen von der Oberfläche des primären Kulturgefäß durch Trypsinierung oder mechanischen Mitteln zu lösen. Die resultierende Zellsuspension wird dann aufgeteilt, oder reseeded, in frischen Kulturen. Sekundäre Kulturen sind für das Wachstum kontrolliert und gefüttert regelmäßig, und kann anschließend subkultiviert werden, um tertiären Kulturen zu produzieren. Die Zeit zwischen Passagieren der Zellen ändert sich mit der Zell-Linie und ist abhängig von der Wachstumsrate.

Als Zellen Konfluenz erreichen, müssen sie subkultiviert oder passagiert werden. Dieses Video wird ein Verfahren zur Subkultivierung sowohl adhärenten und Suspensionszellen demonstrieren.

Trypsinizing und Subkultivierung Säugerzellen

Sobald die Zellen Konfluenz erreichen, müssen sie subkultiviert oder passagiert werden. Wenn konfluente Zellen nicht subkultiviert werden, führt dies zu einem verringerten Mitoseindex und schließlich zu ...

Die Zellkultivierungstechnologie hat im Bereich der Zellbiologie breite Anwendung gefunden. Kultivierte Zellen erfordern jedoch regelmäßige Pflege, um gesund zu bleiben. Wenn die Zellen Konfluenz erreichen, müssen sie unterteilt oder passagiert werden.Die Nichteinhaltung führt zu vermindertem Wachstum und letztendlich zum Zelltod. In diesem Video zeigen wir, wie man Gewebekulturzellen sowohl für anheftungsabhängige als auch für Suspension-Zelllinien pflegt. Hallo, ich bin Ricky aus dem Labor von Dr. LAN bei den Molecular Pathology Laboratories Network in Ost-Tennessee.Heute möchte ich Ihnen zwei Techniken zur Aufbereitung von Suspension- und Adhäsionszellen zeigen. Um Zellen zu passagieren, beginnen wir mit einer Primärkultur, die bis zur Konfluenz in einer 60 Millimeter großen Petrischale oder einem 25 Quadratzentimeter großen Zellkulturkolben mit fünf Milliliter Zellkulturmedium gezüchtet wurde.Wir beginnen damit, das gesamte Medium der Primärkultur mit der sterilen Pipette zu entfernen. Anschließend waschen wir die anhaftende Zellmonoschicht ein- bis zweimal mit einem geringen Volumen an HBSS bei 37 Grad Celsius ohne Calcium und Magnesium. Dies dient dazu, restliches fetalen Käl

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Die Mikro-seziert Explantate Technik ist eine robuste und zuverlässige Methode zur Isolierung proliferative Skelettmuskelzellen von Jugendkriminalität, adulte oder embryonale Muskeln als eine Quelle der Skelettmuskulatur Stammzellen. Einzigartig sind diese Zellen klonal abgeleitet, um Skelettmuskulatur Stammzelllinien für in vivo-Transplantation verwendet produzieren.

Adulten und embryonalen Skelettmuskel Microexplant Kultur und Isolation der Skelettmuskulatur Stem Cells

In diesem Bericht zeigen wir ein System zur Isolierung und Kultur Spenderzellen von der Maus Brustdrüse und orthotop Transplantation dieser Zellen in Empfängermäuse zu Stromatumoren analysieren: epitheliale Interaktionen während Mammatumor Entwicklung.

Mammary Transplantation von Stromazellen und Carcinoma Cells in C57BL/6J-Mäuse

Das Video zeigt einen Assay zur Beurteilung der autophagischen Sequestrierungsaktivität in Säugetierzellen. Es nutzt die Elektroporation, um zytosolische Proteine, einschließlich der Laktatdehydrogenase (LDH), freizusetzen. Die sequestrierten LDH- und die gesamtzellulären LDH-Fraktionen werden bestimmt, um die LDH-Sequestrierung zu beurteilen und geben Einblicke in die Gesamtaktivität der Massensequestrierung.

Quantifizierung der autophagischen Sequestrierungsaktivität in Säugetierzellen

Dieses Video zeigt ein Protokoll zur Isolierung und Kultivierung von primären Großhirnrindenzellen aus dem dorsolateralen Telencephalon von Mausembryonen.

Isolierung und Kultivierung von Zellen aus dorsolateralen Telencephalonen von Mausembryonen

Diese Technik stellt ein Verfahren zu ernten, normalisieren und zu quantifizieren intrazellulären Wachstum bakterieller Pathogene, die in natürlichen Protozoon-Wirtszellen vorkultiviert vor Infektionen von Säugerzellen. Dieses Verfahren kann modifiziert werden, um eine große Vielzahl von Wirtszellen für das Priming Bühne sowie Zielzelltypen unterzubringen.

Gefügig Mammalian Cell Infektionen mit Protozoen-grundiert Bakterien

Wir beschreiben Verfahren für die Kennzeichnung und Genotypisierung neugeborenen Mäusen und Erzeugung primären neuronalen Kulturen von ihnen. Die Genotypisierung ist schnell, effizient und zuverlässig und ermöglicht die automatisierte Nukleinsäureextraktion. Dies ist besonders nützlich für neonatal letale Mäusen und Kulturen, die vor Abschluss der Genotypisierung erfordern.

Schnelle Genotypisierung der Tiere nach Aufbau Primärkulturen von Neuronen des Gehirns Gefolgt

Wir beschreiben ein Verfahren zur stabilen Markierung von Patienten stamm Xenotransplantaten (PDXs) mit lentivirale Partikel exprimieren grün fluoreszierenden Protein und Luziferase-Reporter. Diese Methode ermöglicht es, das Wachstum von PDXs am primären Standort zum Verfolgen sowie Detektieren spontaner und experimentelle Metastasen in vivo Bildgebungssysteme verwendet werden .

Die Markierung von Brustkrebs-Patienten stamm Xenografts mit Nachvollziehbare Reporter für Tumorwachstum und Metastasierung Studies

Ziel dieses Protokolls ist es, epidermale Keratinozyten aus der dorsalen Haut erwachsener Mäuse für eine Vielzahl nachgelagerter Anwendungen wie Molekularbiologie, Biochemie, Fluoreszenzaktivierte Zellsortierung und primäre In-vitro-Anwendungen (z. B. clonogene Keratinozyten).

Isolierung von Maus epidermalen Keratinozyten und ihrer In-Vitro-Clonogenen Kultur

Wir stellen eine Technik zur schnellen Stabilisierung translationaler (Proteinbiosynthese) Komplexe mit Formaldehydvernetzung in lebenden Hefe- und Säugetierzellen vor. Der Ansatz ermöglicht die Sezierung transienter Zwischenprodukte und dynamischer RNA:Protein-Interaktionen. Die vernetzten Komplexe können in mehreren nachgelagerten Anwendungen eingesetzt werden, z. B. in Deep-Sequencing-basierten Profilierungsmethoden, Mikroskopie und Massenspektrometrie.

Schnelle In-vivo-Fixierung und Isolierung translationaler Komplexe aus eukaryotischen Zellen

Die AviTag-spezifische standortbeschränkte Beleuchtungsverstärkte Biotinylierung (ALIBi) ist eine neuartige optogenetetisch aktivierte Methode, die zur Markierung und Affinitätsreinigung subzellulärer Populationen von Ribosomen für die nachgelagerte Sequenzierung und proteomische Analyse entwickelt wurde.

Isolierung subzellulärer Ribosom-Subpopulationen basierend auf rekombinanten, peptid-tag-spezifischer, ortsbeschränkter Beleuchtungsverstärkter Biotinylierung

Lernen Sie die Trypsinisierung und Subkultivierung von Säugerzellen für die Zellbiologie. Diese Methode zeigt, wie adhärente und Suspensionszellen bei Konfluenz passagiert werden, um Zellwachstum und Lebensfähigkeit zu erhalten.

Trypsinizing und Subkultivierung Säugerzellen

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