Name: Humane ES-Zellen: Starting Kultur aus eingefrorenen Zellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 47 s
Description: Lernen Sie die Kultivierung von HuES-Zellen aus eingefrorenen Stämmen für die Neurowissenschaft. Dieses Protokoll ermöglicht reproduzierbare Ergebnisse und bildet die Grundlage für zukünftige Forschung.

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Tauwetter aus einem gefrorenen Lager: <ol><li> Vor dem Auftauen FARBEN Zellen, sicherzustellen, dass die MEF Platte Sie bereits vorbereitet haben, richtig ist verzinkt und in gutem Zustand. NICHT versuchen, eine weniger als wünschenswert Platte, oder eine, die älter als drei Tage zu verwenden. Es ist vor-label alle konischen Rohren und Brunnen genutzt empfohlen. </li><li> Pre-warmen Farbtönen Medien bis 37 ° C. Aliquot FARBEN Medien in einem sterilen konischen Rohr für jede Zeile. Entfernen FARBEN Fläschchen / s von -80 und sofort tauchen in der unteren Hälfte des Rohres in einem 37 ° C Wasserbad. Es sollte etwa 45-60 Sekunden dauern, bevor die Zellen 80% aufgetaut (kleine gefrorene Teil links). </li><li> Bringt schnell das Rohr auf die Laminarströmungshaube, abspritzen mit 70% Alkohol und sanft Transfer-Zellen, die von vorgewärmten Medien. Drehen Sie das Rohr zu entfernen Medien und resuspendieren in einem geeigneten Volumen von frischem, vorgewärmten FARBEN Medien. </li><li> Absaugen des MEF Medien aus möglichst vielen Quellen, wie Sie in dem Auftauen werden. Schnell wird aliquoten vorgewärmten FARBEN Medien wieder in jede Vertiefung der Platte vorsichtig auf die beigefügte MEFs stören. Stellen Sie den Teller zur Seite in der Motorhaube. Wie bei MEFs werden die besten Ergebnisse erzielt, wenn die Tropfen gleichmäßig über die Platte verteilt sind. Vorsichtig wieder die Platte um 37 ° C Inkubator über Nacht, damit die Farbtöne Zellen Samen der MEFs. Ändern Medien ~ 48 Stunden nach dem Auftauen und ersetzt mit frischen FARBEN Medien. </li></ol>

<ol><li>Cowan, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+Embryonic+Stem+Cells+from+Human+Blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Derivation of Embryonic Stem Cells from Human Blastocysts.</a> , 1650-1656 (2004).</li>
</ol>

Die Autoren haben keine Offenlegungen vorzunehmen.

In diesem Video zeigen wir, wie unser Labor routinemäßig stellt eine FARBEN menschlichen embryonalen Stammzellen Kultur aus einem gefrorenen Lager. Dieser Prozess ist zugänglich für die allgemeine Verwendung mit jedem Säugetier-Zelle, wenn in einer DMSO-Lösung eingefroren. Effiziente Auftauen ist wichtig für den Aufbau einer neuen Kultur von Farbtönen Zellen aus einem gefrorenen Lager und wird für die experimentelle Konsistenz wichtig.

FARBEN Medien 651,5 ml KO-DMEM 500 ml PenStrep 6,5 ml Glutamin 6,5 ml NEAA 6,5 ml beta-Mercaptoethanol 0.5ul KO Serum Replacement 65 ml Plasmanate 65 ml bFGF2 (10 ng / mL Finale) 0,65 ml

humane es-zellen: starting kultur aus eingefrorenen zellen

Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells

Hier zeigen wir, wie unser Labor eine FARBEN menschliche embryonale Stammzell-Linie Kultur beginnt aus einem gefrorenen Lager. Zunächst wird eine 1-2 Tage alte zehn cm Platte von etwa einer (zwei) Millionen bestrahlt embryonalen Maus-Fibroblasten-Feeder-Zellen mit Farben Medien gespült, um restliche Serum und Zelltrümmer zu entfernen, und dann FARBEN Medien hinzugefügt und links in der Zelle ausgleichen Inkubator. Eine gefrorene Röhrchen von Zellen aus langfristigen flüssigem Stickstoff Lagerung oder a-80C Gefrierschrank ist bezogen und schnell unter Wasser in einem 37C Wasserbad für schnelles Auftauen. Die Zellen in dem Gefrierpunkt Medien werden dann aus dem Fläschchen entnommen und in einem großen Volumen von Farbtönen Medien. Das große Volumen von Farbtönen Medien erleichtert die Entfernung von überschüssigem Serum und DMSO, die dazu führen FARBEN humanen embryonalen Stammzellen zu differenzieren können. Die Zellen werden vorsichtig aus der Suspension gesponnen und dann in eine kleine Menge frischer FARBEN Medien, die dann verwendet wird, um Samen der MEF Platte resuspendiert. Es wird als wichtig angesehen, um Samen der MEF Platte durch vorsichtiges Hinzufügen die Farbtöne Zellen in einem tropfenweise Mode gleichmäßig verteilen sie in der gesamten Platte. Die neu gegründete FARBEN Kulturplatte in den Inkubator ist für 48 Uhr zurückgegeben werden, bevor Medien ersetzt wird, wird dann alle 24 Stunden danach zugeführt.

Hier zeigen wir, wie unser Labor eine FARBEN menschliche embryonale Stammzell-Linie Kultur beginnt aus einem gefrorenen Lager.

Humane ES-Zellen: Starting Kultur aus eingefrorenen Zellen

Hier demonstrieren wir, wie unser Labor eine Kultur der HuES-humanen embryonalen Stammzelllinie aus einem gefrorenen Vorrat anlegt. Zunächst wird eine ein bis zwei Tage alte 10-cm-Platte mit ...

human-es-cells-starting-culture-from-frozen-cells

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Hier zeigen wir, wie unser Labor FARBEN humanen embryonalen Stammzelllinien gefriert.

Einfrieren menschlicher ES-Zellen

Seit James Thomson et al eine Technik entwickelt, im Jahr 1998 zu isolieren und zu wachsen hES in Kultur, haben Einfrieren von Zellen für die spätere Verwendung und Auftauen und Ausbau von Zellen aus einem gefrorenen Lager zu wichtigen Verfahren in der Routine-hES-Zell-Kultur durchgeführt. Da hES-Zellen sehr empfindlich auf die Belastungen von Einfrieren und Auftauen sind, ist besondere Sorgfalt. Hier zeigen wir die richtige Technik für die schnelle Auftauen hES-Zellen aus flüssigem Stickstoff...

Einfrieren und Auftauen humanen embryonalen Stammzellen

Wir präsentieren ein Protokoll für die effiziente Reprogrammierung von menschlichen Körperzellen in die menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen (hiPSC) mit retroviralen Vektoren kodieren Oct3 / 4, Sox2, Klf4 und c-Myc (OSKM) und Identifizierung von richtig umprogrammiert hiPSC durch Live-Färbung mit Tra- 1-81 Antikörper ist.

Selektieren und Isolieren Colonies of Human induzierten pluripotenten Stammzellen aus adulten Fibroblasten Umprogrammierte

Wir beschreiben ein Protokoll zur Isolierung und Kultivierung von humanen Amnionenepithelzellen (hAECs) unter Verwendung von Reagenzien ohne tierische Produkte in Übereinstimmung mit den aktuellen Richtlinien der guten Herstellungspraxis (cGMP).

Isolation, Kryokonservierung und Kultur der Menschen Amnion Epithelzellen für Klinische Anwendungen

Dieses Protokoll bietet eine einfache und effiziente Möglichkeit, humane pluripotente Stammzellen (hPSCs) zu vermehren, indem nur konditionierte Medien aus der menschlichen Plazenta in einer mit Gelatine überzogenen Schale verwendet werden, ohne zusätzliche exogene Supplementierung oder hPSC-spezifische synthetische Substrate.

A Novel Kultur Modell für menschliche pluripotente Stammzelle Propagation auf Gelatine in Placenta Anlage Medien

Die menschliche Haut wirkt als eine erste Verteidigungslinie gegen die Außenumgebung. Wir präsentieren Ihnen eine Methode zur Isolierung von primären menschlichen Keratinozyten von Erwachsenen. Diese isolierten Keratinozyten eignen sich zahlreiche Versuchsaufbauten und sind ein sehr geeignetes Modell für die Untersuchung der molekularer Mechanismen in kutane Biologie in-vitro-.

Generation und Kultivierung der primären menschlichen Keratinozyten von Erwachsenen

Ein Protokoll wird präsentiert, um bereiten polyvinyl Alkohol-co-Itaconic Säure Hydrogele mit unterschiedlicher Steifigkeit, die mit und ohne Oligopeptide, aufgepfropft wurden, um zu untersuchen, die Wirkung der Steifigkeit von Biomaterialien auf die Differenzierung und Proliferation von Stammzellen. Die Steifigkeit der Hydrogele wurde dadurch die Vernetzung bestimmt.

Menschlichen pluripotenten Stammzelle-Kultur auf Polyvinyl Alkohol-Co-Itaconic Säure Hydrogele mit unterschiedlicher Steifigkeit Xeno-freien Bedingungen

Dieses Protokoll ermöglicht die Aufrechterhaltung von ruhenden humanen hämatopoetischen Stammzellen in vitro, indem die Mikroumgebung des Knochenmarks mit reichlich Fettsäuren, Cholesterin, niedrigeren Konzentrationen von Zytokinen und Hypoxie imitiert wird.

Eine Kulturmethode zur Erhaltung von quiescent Human Hematopoietic Stammzellen

Xenogene (chemische oder tierische) Produkte, die in den Vorbereitungs-/Manipulationsschritten der Zelltherapie eingeführt werden, sind mit einem erhöhten Risiko für Immunreaktivität und pathogene Übertragung bei Wirtspatienten verbunden. Hier wird eine vollständige xenogenfreie Methode zur Isolierung und in vitro Expansion von humanen adipösen Stammzellen beschrieben.

Isolierung und Kultivierung von humanen Fettstammzellen mit einer innovativen xenogenfreien Methode für die Humantherapie

Das aktuelle Protokoll beschreibt Schritte zur Fehlersuche der Derivation induzierter pluripotenter Stammzellen (iPSC) aus peripheren mononuklearen Blutzellen (PBMCs) von Patientenproben, die sich nach den Anweisungen des Herstellers schwer umprogrammieren ließen. Dieses Protokoll ist spezifisch für gefrorene Buffy-Coat-Proben, kann aber auch auf die Umprogrammierung gereinigter PBMCs angewendet werden.

Neuprogrammierung induzierter pluripotenter Stammzelllinien aus eingefrorenen Buffy-Coat-Proben

Lernen Sie die Kultivierung von HuES-Zellen aus eingefrorenen Stämmen für die Neurowissenschaft. Dieses Protokoll ermöglicht reproduzierbare Ergebnisse und bildet die Grundlage für zukünftige Forschung.

Humane ES-Zellen: Starting Kultur aus eingefrorenen Zellen

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