Name: Doppel Whole Mount in situ Hybridisierung von Anfang Hühnerembryonen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-10-27T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 42 s
Description: Lernen Sie die doppelte Whole-Mount-in-situ-Hybridisierung zur gleichzeitigen Visualisierung zweier Gene in jungen Hühnerembryonen. Diese Methode ermöglicht präzise Analysen der Genexpressionsmuster in der Entwicklungsbiologie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Diese Arbeit wurde von der Margaret M. Alkek Stiftung RHF unterstützt.

Teil 1: Befestigung des Embryos <ol><li> Füllen Sie Dissektion Schüssel mit eiskaltem DEPC-PBS. Keep on ice. Öffnen Sie das Ei, indem Sie die Schale mit einer Pinzette entfernen und Shell Stücke. </li><li> Entfernen Sie dicke Albumin mit einer Pinzette. Tilt Dottersack mit groben Pinzette so, dass Embryos nach oben zeigt. </li><li> Mit Schere, schnitt ein Quadrat der Dottersack rund um den Embryo. </li><li> Mit Löffel entfernen Embryo aus Eigelb und auf Eis kalt DEPC-PBS. </li><li> Unter dem Mikroskop entfernen Membranen und Eigelb und Transfer zum Fixieren Gericht. </li><li> Pin nach unten, zu entfernen DEPC-PBS. Ersetzen mit 4% PFA in DEPC-PBS und fixieren O / N bei 4 ° C. </li><li> Entfernen Fixativ. Ersetzen Sie mit eiskaltem DEPC-PBS. Mit einem stumpfen Ende Mikrokapillare Nadel oder ein Mikrodissektion Messer, perforieren das Nervensystem und das Herz Hohlräumen, zum Einfangen der Sonde zu verhindern. </li><li> Wash 2x 10 Minuten DEPC-PBS mit 0,1% Tween-20 (PBT). Entwässern 10 mn jeweils in 25%, 50%, 75% Methanol in PBT. Entwässern Embryonen zweimal in 100% Methanol. Lagerung bei -20 ° C in Methanol. </li></ol> Teil 2: Prähybridisierung <ol><li> Rehydrieren Embryonen 10 Minuten jeweils in 75%, 50% und 25% Methanol in PBT. Wash 2x 10 min in PBT. </li><li> In der Zwischenzeit bereiten eiskalt Fixativ (4% Paraformaldehyd in PBT). Ersetzen PBT mit Proteinase K-Lösung (3 ml / Flasche; [? 5 g / ml] Finale in PBT). Achten Sie darauf, das gesamte Gefäß mit Proteinase K-Lösung wird durch sanften das Fläschchen ausgesetzt, finden Sie unter Problembehandlung für Belichtungszeiten. </li><li> Mit RNase frei Pasteurpipette entfernen Proteinase K und fügen Fixativ (2 ml). Sofort auf Eis Platz für genau 20 Minuten. </li><li> Alle RT wäscht auf Kolbenpendel durchgeführt. Wash 2x 10 min in PBT, und 1x 10mn in PBT mit 50% Hybridisierungspuffer. </li><li> Wash 1x in Hybridisierungspuffer. Inkubation bei 65 ° C in 2 ml Hybridisierungspuffer für 4-5 Stunden. </li></ol> Teil 3: hybridisieren Embryonen mit Sonden <ol><li> DIG und FITC gekoppelt Sonde Synthese ist in Anhang A beschrieben. Die Sonde soll ein starkes Signal zu geben, sollte mit FITC-haltigen Nucleotiden synhesized werden, die schwächeren Sonde sollte mit mit DIG-haltigen Nucleotiden synthetisiert werden. </li><li> Vorwärmen Sonden in Hybridisierungspuffer (500 ng / ml) mit einer 2 ml-Fläschchen. Umgehend zu ersetzen Hybridisierungspuffer mit der Sonde Lösung. Lassen Sie sich nicht die Embryonen trocken. Inkubieren für 16 h bei 65 ° C. </li><li> Ersetzen Sonde mit Hybridisierungspuffer, 2 Wäschen, 30 mn jeweils bei 65 ° C. Wash 15 mn in Hybridisierungspuffer / MABT (1.1 v / v /) bei 65 ° C. </li></ol> Teil 4: DIG Antikörper-Inkubation und Farbreaktion <ol><li> Wash 2x20 Min. in MABT. Wash 1 h in 2% BBR / MABT. Wash 5 Stunden in 2% BBR/20% HISS / MABT (Blocking-Puffer). Inkubieren in 1:2000 DIG-Antikörper in Blocking-Puffer verdünnt, O / N bei 4 ° C auf Kolbenpendel. </li><li> 3x 10 Minuten jeweils in MABT und 3x 1 Stunde jeweils in MABT. </li><li> Wash 2x 20 Minuten in NTMT. Add 200 &amp;mgr; l NBT / BCIP Substrat 10 ml NTMT. Unverzüglich entfernen NTMT von Fläschchen und ersetzen mit 1-2 ml NBT / BCIP-Puffer. Legen Sie im Dunkeln. Monitor Farbreaktion nach 20 Minuten und bei 20 mn Abständen. </li><li> Nach Farbreaktion (sollte erscheinen blau), in PBS waschen für 10 Minuten, festzunageln auf Fixierung Schale mit PBS gefüllt, und ersetzen Lösung mit 4% PFA in PBS. Fix O / N bei 4 ° C. </li><li> Transfer zum neuen Scintillationsfläschchen. Wash in PBST (PBS mit 1% Tween-20) 2x10 mn. Wash in MABT 2x 10 Minuten. </li><li> Inkubieren in MABT 30 mn bei 63 ° C. </li></ol> Teil 5: FITC Antikörper-Inkubation und Farbreaktion <ol><li> Wash 2x 10 Minuten in MABT, 1 Stunde in 2% BBR / MABT, 5 Stunden in Blocking-Puffer </li><li> Inkubieren in alkalische Phosphatase-gekoppelten anti-FITC-Antikörper (1:500) O / N bei 4 ° C. </li><li> 3x 10 Minuten jeweils in MABT und 3x 1 Stunde jeweils in MABT. </li><li> Wash in 2x 20 Minuten in TBS pH 8,45 mit 0,1% Tween-20 (TBST). </li><li> Bereiten Vector Red funktionierende Lösung (5 ml) in TBST mit Reagenzien 1,2 und 3 in Kit zur Verfügung gestellt. Unverzüglich entfernen TBST von Fläschchen und ersetzen mit Vector Red-Puffer. Legen Sie im Dunkeln. Monitor Farbreaktion nach 40 mn, und bei 30 mn Abständen. </li><li> Nach Farbreaktion (sollte erscheinen rot),-Embryonen zu PBS. </li></ol> Teil 6: Fixation und Verarbeitung <ol><li> Transfer zum Fixieren Schale mit PBS und fix in 4% PFA für 20 Minuten bei RT oder O / N bei 4 ° C. </li><li> Wash in PBS, 2x 10 Minuten. Für die Verarbeitung für die Fotografie, um 20% Glycerin in PBS (das macht die Embryonen transluzent) zu übertragen. So erstellen Sie eine Kammer, 2 Streifen aus PVC-Band, überlagern sie auf Folie. Schneiden Sie ein Quadrat in der Mitte mit einem Messer. Entfernen Sie den Platz mit einer Pinzette. </li><li> Zur Bearbeitung für Wachs Schneiden, Transfer zurück zum PBS waschen 2x 10 Minuten, dehydrieren in abgestufte Reihe von Methanol (25%, 50%, 75% und 100% in PBS, 10 min jeweils). </li><li> Ersetzen Sie mit Propanol, 3min. Ersetzen Sie mit 1,2,3,4-Tetrahydronaphthalin, gefolgt von 20 Minuten Histoclear (2x 1 Std.). Ersetzen durch histoclear / Wachs 1.1 (v / v) 60 ° C für 1 Stunde. Ersetzen mit Wachs-und Prozessfür die Histologie. </li></ol> Teil 7: Lösungen Hybridisierungspuffer, Lagerung bei -20 ° C in Falcon, 50 ml: 25 ml Formamid; 3,25 ml (20xSSC), 0,5 ml (0,5 M EDTA), 1 ml (10% Tween-20), 2,5 ml (1% SDS) ; 125 ul (20mg/ml tRNA);. 100 ul (50 mg / ml Heparin) MABT, bereiten 100 mM Maleinsäure, pH auf 7,5 mit NaOH Pellets. Add 150 mM NaCl und 0,1% Tween-20. NTMT (made unmittelbar vor der Verwendung), 50 ml: 1 ml (5M NaCl), 2,5 ml (2M Tris-HCl pH9.5), 1,25 ml (2M MgCl 2), 5 ml (10% Tween-20). TBST: 0,1 M Tris-HCl, 0,15 M NaCl, pH 8,45, 0,1% Tween-20. Teil 8: Fehlersuche <table border="1"><tbody><tr><th> Problem </th><th> Ursache </th><th> Abhilfe </th></tr><tr><td valign="top"> Embryo ist zusammengerollt </td><td valign="top"> Unzureichende Dehydration / Rehydration </td><td valign="top"> Halten Sie 10 Minuten Intervallen während aufeinanderfolgender Dehydration / Rehydration Schritte </td></tr><tr><td valign="top"> Es gibt keine Sondensignal </td><td valign="top"> Probe abgebaut wird RNase Kontamination in einem Fläschchen </td><td valign="top"> Run-Sonde auf 1% Agarosegel Stellen Sie sicher, dass das gesamte Gefäß zu Proteinase K-Lösung wird in Schritt 2 ausgesetzt </td></tr><tr><td valign="top"> Probe ist Etiketten Hohlräume Herzen ein Neuralrohr </td><td valign="top"> Probe gefangen ist </td><td valign="top"> In Schritt 2, um sicherzustellen, dass alle Hohlräume perforiert mit Mikrodissektion Messer oder Mikrokapillare </td></tr><tr><td valign="top"> Embryo zerfiel nach der Hybridisierung (Schritt 3) </td><td valign="top"> Proteinase K Schritt nach links zu lange Hybridisierung Temperatur zu hoch ist </td><td valign="top"> Proteinase K sollte nicht länger als 1 Mio. gelassen werden (Stufen 3 + und 4), 2 mn (Stufe 5 bis 7), 3 Minuten (Stufe 8-10), 4 mn (Stufe 11-13) Nicht bei T o höhere hybridisieren als 65 o C </td></tr></tbody></table> Teil 9: Repräsentative Ergebnisse Vertreter Embryonen sind unten dargestellt: (A) Embryo (Stadium HH7) ist mit einer DIG-Sox-Sonde (blau) und ein FITC-Delta-1-Sonde (rot) gekennzeichnet. (B) Embryo (Stadium HH8) ist mit einer DIG-Pax6-Sonde (blau) und ein FITC-Shh-Sonde (rot) gekennzeichnet. Nf, neuronale fach, ANP, vorderen Neuralplatte, psm, präsomitischen Mesoderm, n, Chorda, nt, Neuralrohr). Probe Geschenke aus den Labors von Drs. C. Tabin, M. Goulding, D. Henrique, und J. Briscoe. <img src="/files/ftp_upload/old/904_2008_10_20_1/904_Figure-01.png" alt="" width="303" height="300" />

<ol><li>Streit, A., Berliner, A. J., Papanayotou, C., Sirulnik, A., Stern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiation+of+neural+induction+by+FGF+signaling+before+gastrulation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Initiation of neural induction by FGF signaling before gastrulation.</a> Nature. 406, 74-78 (2000).</li>
<li>Rodríguez Esteban, C., Capdevila, J., Economides, A. N., Pascual, J., Ortiz, A., Izpisúa Belmonte, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+novel+Cer-like+protein+Caronte+mediates+the+establishment+of+embryonic+left-right+asymmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The novel Cer-like protein Caronte mediates the establishment of embryonic left-right asymmetry.</a> Nature. 401, 243-251 (1999).</li>
<li>Psychoyos, D., Stern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+the+organizer+after+radical+ablation+of+Hensen%27s+node+and+the+anterior+primitive+streak+in+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Restoration of the organizer after radical ablation of Hensen's node and the anterior primitive streak in the chick embryo.</a> Development. 122, 3263-3273 (1996).</li>
<li>Kawakami, M., Nakanishi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+an+endogenous+PKA+inhibitor%2C+PKIalpha%2C+in+organizing+left-right+axis+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The role of an endogenous PKA inhibitor, PKIalpha, in organizing left-right axis formation.</a> Development. 128, 2509-2515 (2001).</li>
<li>Basch, M. L., Bronner-Fraser, M., Garcia-Castro, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specification+of+the+neural+crest+occurs+during+gastrulation+and+requires+Pax7%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Specification of the neural crest occurs during gastrulation and requires Pax7.</a> Nature. 441, 218-222 (2006).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Die 2-Farben-whole mount in situ Hybridisierung Methode wird verwendet, um sowohl die räumliche und zeitliche Muster der Genexpression zu bestimmen, mit ein oder zwei Gene von Interesse. Zu den Anwendungen gehören Beurteilung der Genexpressionsmuster von neuen Genen (zB 1,2, sowie Veränderungen in der Genexpression nach Beleidigung (embryonale Manipulationen 3, Perlen 4 und Elektroporation von RNA oder DNA-Konstrukte, 5).

<table><tbody><tr><td>Eier</td><td>Tier</td><td>Charles River Laboratories</td><td>Premium Fertile</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Mikroskop</td><td>Leica Microsystems</td><td>MZ9.5</td><td></td></tr><tr><td>Marsh-Automateninkubator</td><td>Werkzeug</td><td>Lyon</td><td>RX</td><td></td></tr><tr><td>Hybridisierungsinkubator</td><td>Werkzeug</td><td>Hybaid</td><td>Micro-4</td><td></td></tr><tr><td>Adams Nutator Orbitalmischer</td><td>Werkzeug</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-062</td><td></td></tr><tr><td>Gebogene Pinzette (1)</td><td>Werkzeug</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72991-4C</td><td></td></tr><tr><td>Feinschere</td><td>Werkzeug</td><td>Fine Science Tools</td><td>14161-10</td><td></td></tr><tr><td>Löffel</td><td>Werkzeug</td><td>Fine Science Tools</td><td>10370-18</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur-Kapillarpipette</td><td></td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>70950-12</td><td></td></tr><tr><td>Mikrokapi­llare</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1049-1PAK</td><td>Mit vertikalem Mikropipettenzieher ziehen; stumpfes Ende mit feiner Pinzette bearbeiten</td></tr><tr><td>Mikrodissektionsmesser</td><td></td><td>Fine Science Tools</td><td>10056-12</td><td>Zum Anstechen von Hohlräumen vor der In-situ-Hybridisierung verwenden</td></tr><tr><td>Minuten-Nadeln, 0,2 mm Durchmesser</td><td></td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-20</td><td>Nadeln mit einem Magnetrührer zusammenhalten;</td></tr><tr><td>Sylgard 184 Silikon-Elastomer-Härter und -Basis</td><td>Reagenz</td><td>Dow Corning</td><td>0001986475</td><td>1 Teil Härter mit 9 Teilen Basis mischen; über Nacht bei 37 °C aushärten lassen</td></tr><tr><td>Diethylpyrocarbonat (DEPC)</td><td>Reagenz</td><td>Acros Organics</td><td>10025025</td><td>1 ml DEPC zu 1 l PBS hinzufügen; schütteln; autoklavieren</td></tr><tr><td>16 % PFA</td><td>Reagenz</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2308-5MG</td><td>Stammlösung bei 10 mg/ml in DEPC-H₂O in 10 µl-Aliquoten. Bei -20 °C lagern.</td></tr><tr><td>Formamid, deionisiert</td><td>Reagenz</td><td>Ambion</td><td>9342</td><td></td></tr><tr><td>Hefe-tRNA-25 mg</td><td>Reagenz</td><td>Invitrogen</td><td>15401-011</td><td>Stammlösung bei 20 mg/ml in DEPC-H₂O in 125 µl-Aliquoten. Bei -20 °C lagern</td></tr><tr><td>Heparin-Natriumsalz</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H4784-250MG</td><td>Stammlösung bei 50 mg/ml in DEPC-H₂O in 100 µl-Aliquoten. Bei -20 °C lagern.</td></tr><tr><td>SSC 20×, pH 5,5</td><td>Reagenz</td><td>Fisher Scientific</td><td>PR-V4261</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (0,5 M)</td><td>PR-V4231</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>Reagenz</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP166-100</td><td></td></tr><tr><td>Maleinsäure</td><td>Reagenz</td><td>Fluka</td><td>63189</td><td></td></tr><tr><td>B&amp;#8211;hringer-Blockierreagenz</td><td>Reagenz</td><td>Roche Group</td><td>11096176001</td><td>2 % in MABT verwenden. Zum Herstellen mit MABT 20 Minuten bei 60 °C erhitzen. Stammlösung herstellen und in 1–5 ml-Aliquoten bei 20 °C lagern.</td></tr><tr><td>Hitzedinaktiviertes Schafserum</td><td>Reagenz</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>013-000-121</td><td>In 10 ml H₂O lösen; 30 Minuten bei 55 °C erhitzen. In 1 ml-Aliquoten bei -20 °C lagern.</td></tr><tr><td>Anti-Digoxigenin-AP, Fab-Fragmente</td><td>Reagenz</td><td>Roche Group</td><td>11093274910</td><td></td></tr><tr><td>NBT/BCIP-Stammlösung</td><td>Reagenz</td><td>Roche Group</td><td>11681451001</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Fluorescein-AP, Fab-Fragmente</td><td>Reagenz</td><td>Roche Group</td><td>11426338910</td><td></td></tr><tr><td>2 M Tris</td><td>BP1759-500</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vector Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit</td><td>Reagenz</td><td>Vector Laboratories</td><td>SK-5100</td><td></td></tr><tr><td>1,2,3,4-Tetrahydronaphthalin</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>429325-100ML</td><td>Unter Abzugshaube arbeiten</td></tr></tbody></table>

doppel whole mount in situ hybridisierung von anfang hühnerembryonen

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

Der Hühnerembryo ist ein wertvolles Werkzeug in der Studie der frühen Embryonalentwicklung. Seine Transparenz, Zugänglichkeit und einfache Handhabung machen ihn zu einem idealen Werkzeug zur Untersuchung der Genexpression im Gehirn, Neuralrohr, Somiten und Herz Primordien Bildung. Dieses Video zeigt die verschiedenen Schritte in 2-Farben-whole mount in situ Hybridisierung; Erste, der Embryo aus dem Ei präpariert und fixiert in Paraformaldehyd. Zweitens ist der Embryo für Prähybridisierung verarbeitet. Der Embryo wird dann mit zwei verschiedenen Sonden, einer gekoppelten DIG, und man gekoppelt an FITC hybridisiert. Nach einer Hybridisierung über Nacht wird der Embryo mit DIG-gekoppelten Antikörper inkubiert. Farbreaktion für DIG Substrat durchgeführt wird, und die Region von Interesse blau erscheint. Der Embryo wird dann mit FITC gekoppelten Antikörper inkubiert. Der Embryo ist für Farbreaktion mit FITC verarbeitet, und die Region von Interesse erscheint rot. Schließlich ist der Embryo fixiert und phtograph verarbeitet und Schneiden. Ein Leitfaden für die Fehlersuche wird ebenfalls vorgestellt.

Dieses Video zeigt 2-Farben-whole mount in situ Hybridisierung, eine Methode, durch die die räumliche und zeitliche Expressionsmuster von 2 unterschiedlichen Genen visualisiert werden bei jungen Hühnerembryonen kann. Diese Methode wurde ursprünglich von David Wilkinson, Domingos Henrique, Phil Ingham und David Ish-Horowicz eingeführt.

Doppel Whole Mount in situ Hybridisierung von Anfang Hühnerembryonen

Der Hühnerembryo ist ein wertvolles Instrument zur Untersuchung der frühen embryonalen Entwicklung. Seine Transparenz, Zugänglichkeit und einfache Manipulierbarkeit machen ihn zu einem ...

Dieses Verfahren beginnt mit der Fixierung, Behandlung mit Methanol und Proteinase K der Embryonen, gefolgt von einer Übernacht-Inkubation mit der Sondenlösung, die Digoxigenin (dig) enthält. Zwei mit Fluoresceinisothiocyanat markierte oder ZI-Embryonen werden anschließend mit einem Anti-dig-Antikörper inkubiert, nachdem eine Farbreaktion mit dig-markierter alkalischer Phosphatase durchgeführt wurde. Die Enzymaktivität wird inaktiviert und die Embryonen werden inkubiert.Mit dem FSE-Antikörper wird die Farbreaktion mit Zi durchgeführt und die Embryonen werden fixiert. Hallo, ich bin Delphine aus dem Labor von Rick Finnel am Zentrum für Umwelt- und genomische Medizin der Texas A&M University in Houston. Heute zeigen wir Ihnen die Vorgehensweise für eine zweifarbige In-situ-Hybridisierung am Hühnerembryo.Wir verwenden dieses Verfahren im Labor, um die Wirkungen von Antiepileptika auf gastrointestinale und neuronale Gene zu analysieren. Beginnen wir: Um eine In-situ-Hybridisierung an Hühnerembryonen durchzuführen, öffnen Sie zuerst ein Ei, indem Sie mit einer Pinzette leicht gegen die Schale klopfen und Stücke der Schale entfernen. Entfernen Sie das dicke Eiweiß mit der Pinzette und ki

double-whole-mount-in-situ-hybridization-of-early-chick-embryos

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dieses Video zeigt neue Kultur, eine Methode, durch die Hühnerembryonen außerhalb der Eizelle bis zu 24 h kultiviert. Diese Methode ermöglicht ein bis frühen Entwicklung (Primitivstreifens bis 14 som.), Ein Zeitraum entsprechend E7-9 in der Maus zu studieren. Anwendungen dieser Technik sind die Elektroporation, in situ Hybridisierung und Immunhistochemie.

Method for Culture of Early Hühnerembryonen ex vivo (New Culture)

Dieses Video zeigt whole mount Immunhistochemie, eine Methode, durch die die räumliche und zeitliche Expressionsmuster eines Antigens visualisiert werden bei jungen Hühnerembryonen kann. Diese Methode wurde ursprünglich von Jane Dodd und Tom Jessell eingeführt.

Verfahren zur Whole Mount Antikörper-Färbung in Küken

Mit Whole Berg In situ Hybridisierung zu Molecular Biology und Organismal Link-

Ganze Berge In-situ Hybridisierung von E8.5 bis E11.5 Maus Embryonen

Dieser Artikel beschreibt Oberfläche Kennzeichnung...

Tracking Morphogenetic Tissue Verformungen in der frühen Hühnerembryo

Ein Ansatz zur Analyse von Migration und schließlich das Schicksal der aviären Neuralleistenzellen in Wachtel-Küken chimären Embryos beschrieben wird. Diese Methode ist eine einfache und unkomplizierte Technik zum Aufspüren Neuralleistenzellen während der Migration und Differenzierung, die sonst schwer zu unmanipulierten innerhalb eines Hühnerembryo zu unterscheiden sind.

Die Analyse der Neuralleiste Migration und Differenzierung von Cross-Spezies Transplantation

Der Zebrafisch, einem kleinen tropischen Fischen, hat sich zu einem beliebten Modell zum Studium der Genfunktion während Wirbeltiere Entwicklung und Krankheit. Die zeitliche und räumliche Expression von Zielgenen kann bestimmt werden...

Hohe Auflösung Ganze Berge<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisierung innerhalb Zebrafischembryonen Gene Expression und Funktion zu untersuchen

Der Xenopus laevis Embryo ist aufgrund seiner Größe und Leichtigkeit der Manipulation weiterhin außerordentlich nützlich bei der Erforschung der frühen Entwicklung.   Es wird ein vereinfachtes Protokoll für das Whole Mount in situ Hybridisierungsprotokoll zur Verfügung gestellt, das bei der Identifizierung spezifischer Organe in diesem Modellsystem verwendet werden kann.

Das Verständnis frühen Organogenese das vereinfachte<em&gt; In-situ-</em&gt; Hybridisierung Protokoll<em&gt; Xenopus</em

Hier stellen wir eine neue Technik vor, um Hühnerembryonen ex ovo für die Zeitrafferbildgebung mittels Durchlicht- und Fluoreszenzmikroskopie zu kultivieren. Das getauchte Filterpapiersandwich ist eine Variante der etablierten Filterpapierträgertechnik1, die die Kultivierung von Hühnerembryonen ermöglicht, die vollständig in ein flüssiges Kulturmedium getaucht sind.

Ein Abgetaucht Filterpapier Sandwich für Langzeit Ex Ovo Zeitraffer-Imaging von frühen Hühnerembryonen

Dieser Artikel beschreibt eine Gewebetransplantationstechnik, die entwickelt wurde, um die Signal- und Musterbildungseigenschaften des basalen Vorderhirns während der kraniofazialen Entwicklung zu testen.

Erstellung von Vogel-Vorderhirn-Chimären zur Beurteilung der Gesichtsentwicklung

Lernen Sie die doppelte Whole-Mount-in-situ-Hybridisierung zur gleichzeitigen Visualisierung zweier Gene in jungen Hühnerembryonen. Diese Methode ermöglicht präzise Analysen der Genexpressionsmuster in der Entwicklungsbiologie.

Doppel Whole Mount in situ Hybridisierung von Anfang Hühnerembryonen

Weitere Videos entdecken