Name: Die hypoxische ischämischen Enzephalopathie Model of Perinatal Ischämie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-11-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: Erfahren Sie das postnatale Rattenmodell für hypoxisch-ischämische Enzephalopathie mit Karotisligatur und Hypoxiekammer. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Hirnverletzungsmechanismen und therapeutischen Ansätzen.

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Dieses Protokoll wurde von der Institutional Animal Care und Verwenden Ausschuss an der Stanford University und hält sich an die National Institutes of Health Richtlinien für die Verwendung von Versuchstieren verabschiedet. Neonatal Rat HIE-Modell <ol><li> Post-Natal-Tag (PND) 7 Sprague-Dawley Ratten Welpen (Charles River Laboratories, Inc., Wilmington, MA) sind voll mit Isofluran (Aerrane, Baxter, Deerfield, IL, 3-4% für Induktions-und 1-2% für Wartung). </li><li> Durch einen kleinen Schnitt in den Hals gemacht (Extra Thin Iris Scissors # 14088-10, Fine Science Tools Inc, Foster City, CA) auf der linken Arteria carotis communis (CCA) aussetzen. </li><li> Der CCA ist mit 5-0 Seidenfaden (5-0 Seide, Ethicon, Somer, NJ) ligiert. </li><li> Der Schnitt wird mit Cyanacrylat-Klebstoff (Elmers Products Inc, Columbus, OH) geschlossen. Der Schnitt wird mit Klebeband abgedeckt und Anästhesie wird gestoppt. Die Welpen sind, um ihre Mutter zurück und lässt 1-2 Stunden erholen. </li><li> Welpen sind dann in einer hypoxischen Kammer, die 8% Sauerstoff mit 92% Stickstoff für 100 Minuten bei 37 ° C. ausgewogenen enthält platziert 8% oxygen/92% Stickstoff (Airgas, Sacramento, CA) fließen über einen Schlauch in die Maus Käfig mit einer Kunststoffabdeckung ausgestattet. Der Deckel unternommen wird, um den Käfig fit und hat zwei Löcher von 2 cm im Durchmesser, ermöglicht eine davon mit dem Rohr verbunden, um die 8% Sauerstoff Gastank und anderen erhalten das Gas flowout. Die Kammer ist in ein Wasserbad gestellt und ist bis vor gewärmt zu bedienen und ein Thermometer im Inneren der muss 37 ° C vor Beginn der Hypoxie zu registrieren. </li><li> Am Ende der 100 Minuten von Hypoxie, sind die Welpen wieder zu ihren Damm für die Verwertung zurückgegeben. </li><li> 24 Stunden nach dem Ende der Hypoxie, sind Welpen durch tiefe Narkose mit Isofluran getötet. Hirngewebe wird mit kaltem physiologischer Kochsalzlösung perfundiert, gefolgt von einer Lösung aus kaltem 1% TTC in Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung, pH 7,4 (Sigma Chemical Co, St Louis, MO). TTC muss immer vor Licht geschützt werden. </li><li> Brains entfernt und gekühlt 1-2 Minuten auf dem Eis, und vier koronalen Abschnitte 3 mm auseinander (Ebenen 1-4) geschnitten werden, beginnend rostral auf der Ebene der opticchiasm und Infundibulum, entsprechend der Bregma 1,8 ~ 2,0 mm Höhe der adulten Maus Gehirn. </li><li> Hirnschnitten werden in TTC-Lösung getaucht und bei 37 ° C für 8 Minuten, gefolgt von Fixierung in 4% Paraformaldehyd / PBS über Nacht. Da TTC lichtempfindlich ist, halten Scheiben fern von Licht in dieser Zeit. </li><li> Der TTC gefärbten Schnitten werden gescannt und digitalisiert. Mit Bild-J (NIH, Bethesda, MD), die folgenden sind für jede Ebene gemessen: Bereich des Infarktes (ungefärbten Bereich), im Bereich der ipsilateralen Hemisphäre und im Bereich der kontralateralen Hemisphäre. Der prozentuale Infarktareal pro Scheibe wie folgt berechnet: (Bereich der Infarkt / Bereich der ipsilateralen Hemisphäre) oder A 1, A 2, A 3 und A 4. Der prozentuale Volumen des Infarkts ist als die Summe (A 1 + A 2 + A 3 + A 4) * 3mm berechnet. Bereiche der kortikalen oder striatalen Verletzungen können auch separat in einer ähnlichen Weise quantifiziert werden. </li></ol> Repräsentative Ergebnisse <img src="/files/ftp_upload/old/955_2008_9_2_2/955_Fig-01.png" alt="Abbildung 1" width="660" height="190" /> Abbildung 1. Vertreter HIE koronalen Ebenen 1-4 gefärbt mit TTC. TTC gefärbten koronalen Abschnitte demonstrieren Bereich der Infarkt (in weiß).

<ol><li>Rice, J. E. 3rd, Vannucci, R. C., Brierley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+immaturity+on+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+neurology%22%5BJournal%5D)">The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat.</a> Annals of neurology. 9 (2), 131-141 (1981).</li>
<li>Vannucci, R. C., Vannucci, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perinatal+Hypoxic-Ischemic+Brain+Damage%3A+Evolution+of+an+Animal+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Perinatal Hypoxic-Ischemic Brain Damage: Evolution of an Animal Model.</a> Dev Neurosci. 27 (2-4), 81-86 (2005).</li>
<li>Bona, E., Hagberg, H., Loberg, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+moderate+hypothermia+after+neonatal+hypoxia-ischemia%3A+short-+and+long-term+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+research%22%5BJournal%5D)">Protective effects of moderate hypothermia after neonatal hypoxia-ischemia: short- and long-term outcome.</a> Pediatric research. 43 (6), 738-738 (1998).</li>
<li>Trescher, W. H., Ishiwa, S., Johnston, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+hypothermia+and+hyperthermia+on+attentional+and+spatial+learning+deficits+following+neonatal+hypoxia-ischemic+insult+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+brain+research%22%5BJournal%5D)">Effects of hypothermia and hyperthermia on attentional and spatial learning deficits following neonatal hypoxia-ischemic insult in rats.</a> Behavioural brain research. 151 (1-2), 209-209 (2004).</li>
<li>Mishima, K., Ikeda, T., Yoshikawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+post-hypoxic-ischemic+hypothermia+markedly+delays+neonatal+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+development%22%5BJournal%5D)">Brief post-hypoxic-ischemic hypothermia markedly delays neonatal brain injury.</a> Brain development. 19 (5), 326-326 (1997).</li>
<li>Young, R. S., Olenginski, T. P., Yagel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+graded+hypothermia+on+hypoxic-ischemic+brain+damage%3A+a+neuropathologic+study+in+the+neonatal+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">The effect of graded hypothermia on hypoxic-ischemic brain damage: a neuropathologic study in the neonatal rat.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 14 (6), 929-929 (1983).</li>
<li>Bederson, J. B., Pitts, L. H., Germano, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+2%2C3%2C5-triphenyltetrazolium+chloride+as+a+stain+for+detection+and+quantification+of+experimental+cerebral+infarction+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Evaluation of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride as a stain for detection and quantification of experimental cerebral infarction in rats.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 17 (6), 1304-1304 (1986).</li>
<li>Cai, J., Kang, Z., Liu, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+therapy+reduces+apoptosis+in+neonatal+hypoxia-ischemia+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Hydrogen therapy reduces apoptosis in neonatal hypoxia-ischemia rat model.</a> Neuroscience letters. 441 (2), 167-167 (2008).</li>
<li>Grow, J., Barks, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+hypoxic-ischemic+cerebral+injury+in+the+term+infant%3A+current+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Clinics+in+perinatology%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of hypoxic-ischemic cerebral injury in the term infant: current concepts.</a> Clinics in perinatology. 29 (4), 585-585 (2002).</li>
<li>Aden, U., Halldner, L., Lagercrantz , H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggravated+brain+damage+after+hypoxic+ischemia+in+immature+adenosine+A2A+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Aggravated brain damage after hypoxic ischemia in immature adenosine A2A knockout mice.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 34 (3), 739-739 (2003).</li>
</ol>

Das Nagetier postnatale HIE-Modell ist ein etabliertes Modell, rekapituliert zerebralen Hypoxie in der perinatalen Periode bei Neugeborenen auftreten. Umfangreiche histologische und immunhistochemische Charakterisierung Studien haben gezeigt, dass die 7 Tage alte Nagetier der analogen Gehirn Reife zu einer dritten Trimester menschlichen Fötus 7 Modell hat. Das Nagetier HIE-Modell wurde sehr informativ für das Verständnis der Mechanismen der Hirnschädigung von perinatalen Hypoxie 2, wo Eingriffe wie Hypothermie wurde mi...

<table><tbody><tr><td>Sprague-Dawley-Rattenwelpen</td><td>Tier</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Chirurgie</td><td>Baxter Internationl Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>8 % Sauerstoff / 92 % Stickstoffgas</td><td>Chirurgie</td><td>Airgas</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8877</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS), pH 7,4</td><td>Reagenz</td><td>GIBCO, von Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr></tbody></table>

die hypoxische ischämischen enzephalopathie model of perinatal ischämie

The Hypoxic Ischemic Encephalopathy Model of Perinatal Ischemia

Hypoxisch-ischämischen Enzephalopathie (HIE) ist die Folge der systemischen Asphyxie auftreten bei der Geburt. Fünfundzwanzig Prozent der Neugeborenen mit HIE entwickeln schweren und dauerhaften neuropsychologischen Spätfolgen, darunter geistige Retardierung, Zerebralparese und Epilepsie. Die Ergebnisse der HIE sind verheerend und permanent, so dass es kritisch zu identifizieren und zu entwickeln, therapeutische Strategien zu Hirnverletzungen bei Neugeborenen reduzieren mit HIE. Zu diesem Zweck hat die neugeborenen Rattenmodell für hypoxisch-ischämischen Hirn-Trauma wurde entwickelt, um diese conditio humana Modell. Die HIE-Modell wurde erstmals von Vannucci et al 1 validiert und ist seitdem intensiv genutzt, um Mechanismen der Hirnschädigung durch perinatale Hypoxie-Ischämie 2 zu identifizieren und zu testen, mögliche therapeutische Interventionen 3,4. Die HIE-Modell ist ein zweistufiger Prozess und umfasst die Ligation der linken Arteria carotis communis durch die Exposition gegenüber einer hypoxischen Umgebung gefolgt. Zerebralen Blutflusses (CBF) in der Hemisphäre ipsilateral zur ligiert Halsschlagader nicht wegen der Sicherheit des Blutflusses über den Kreis der Willis Rückgang, allerdings mit geringeren Sauerstoff-Partialdruck nimmt die CBF in der ipsilateralen Hemisphäre deutlich und führt zu einseitigen ischämischen Schädigung . Die Verwendung von 2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) zu färben und zu identifizieren ischämische Hirngewebe wurde ursprünglich für die Erwachsenen-Modelle von Nagetier zerebraler Ischämie 5 entwickelt, und wird verwendet, um das Ausmaß der zerebralen infarctin zu frühen Zeitpunkten bewerten bis zu 72 Stunden nach dem ischämischen Ereignis 6. In diesem Video zeigen wir die hypoxisch-ischämischen Schädigung Modell in postnatalen Rattenhirn und der Auswertung der Infarktgröße mittels TTC-Färbung.

Die postnatale Rattenmodell für hypoxisch-ischämischen Hirn-Trauma ist ein gut etabliertes Modell der menschlichen Neugeborenen hypoxisch ischämischen Enzephalopathie (HIE). In diesem Artikel beschreiben wir das Modell der HIE in postnatalen Rattenjungen.

Die hypoxische ischämischen Enzephalopathie Model of Perinatal Ischämie

Die hypoxisch-ischämische Enzephalopathie (HIE) ist die Folge einer systemischen Asphyxie bei der Geburt. Fünfundzwanzig Prozent der Neugeborenen mit HIE entwickeln eine schwere ...

Um dieses Modell der hypoxischen Enzephalopathie-Ischämie nach der Geburt zu induzieren, werden am siebten Lebenstag Sprague-Dawley-Rattenwelpen einer Mikrochirurgie unterzogen, bei der die linke Arteria carotis communis ligiert wird. Nach einer Erholungsphase von ein bis zwei Stunden werden die Welpen für 100 Minuten in eine hypoxische Kammer bei 37 Grad Celsius gebracht.Die Welpen werden anschließend zu ihrer Mutter zurückgebracht, bis sie getötet werden. Nach zwei systemischen Perfusions­schritten werden die Gehirne entnommen und in drei Millimeter dicke Schnitte geteilt. Die Schnitte werden dann mit einer 1%-igen Lösung aus 2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) gefärbt, um das Infarktareal sichtbar zu machen.Hallo, ich bin Hi tango aus dem Andre-Lab der Abteilung für Neurologie und Neurologische Wissenschaften an der medizinischen Fakultät der Stanford University. Heute zeigen wir Ihnen ein Verfahren für ein Modell der hypoxisch-ischämischen Hirnschädigung beim Neugeborenen. Wir verwenden dieses Verfahren in unserem Labor, um die Mechanismen der hypoxisch-ischämischen Enzephalopathie im neonatalen Gehirn zu untersuchen, mit dem langfristigen Ziel, neue Therapieansätze zu entw

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Großtiermodelle haben gute translationale Werte in der Untersuchung der Physiologie und Pharmakologie von neonataler Asphyxie. Mit neugeborenen Ferkeln, entwickeln wir ein experimentelles Protokoll neonatale Asphyxie die Vorteile eines Studiums der systemischen und regionalen Hämodynamik, Sauerstoff-Transport mit biochemischen und pathologischen Wege und Zusammenhänge hat zu simulieren.

A Swine Modell von neonataler Asphyxie

Das Video zeigt das Verfahren zur Erstellung eines Mausmodells zur Untersuchung von hypoxisch-ischämischen Hirnverletzungen bei Neugeborenen. Es beschreibt die Schritte zur chirurgischen Induktion einer Ischämie und zur Unterwerfung des Tieres unter Hypoxie, um die Hirnschädigung zu verschlimmern. Schließlich wird gezeigt, wie die resultierenden Hirnläsionen beurteilt werden können, um sicherzustellen, dass das Mausmodell für weitere wissenschaftliche Untersuchungen vorbereitet wird.

Etablierung eines Mausmodells für hypoxisch-ischämische Hirnverletzungen bei Neugeborenen

Quelle: Jantzie, L. L., et. al. Modellierung der Frühgeborenen-Enzephalopathie unter Verwendung der pränatalen Hypoxie-Ischämie mit intraamniotischem Lipopolysaccharid bei Ratten. J. Vis. Exp. (2015)Dieses Video zeigt ein Protokoll zur Induktion hypoxisch-ischämischer und entzündlicher Zustände bei fötalen Ratten durch Einschränkung des uterinen Blutflusses und Injektion von LPS, Modellierung von Neuroinflammation und gestörter Gehirnentwicklung, die für Frühgeburtenstudien relevant sind.

Induktion hypoxisch-ischämischer und entzündlicher Zustände zur Modellierung der Enzephalopathie bei pränatalen Ratten

Hypoxisch-ischämische Enzephalopathie nach perinataler Asphyxie kann mit Tiermodellen untersucht werden. Wir demonstrieren die Verfahren, die zur Etablierung eines Ferkelmodells der neonatalen hypoxisch-ischämischen Enzephalopathie erforderlich sind.

Ein Ferkel Modell Neonatal hypoxischischämischer Enzephalopathie

Thromboembolische Schlaganfallmodelle sind wichtige Werkzeuge zur Optimierung der Rekanalisationstherapie. In dieser Arbeit berichten wir über ein murines thrombotisches Schlaganfallmodell, das auf einem transitorischen zerebralen hypoxisch-ischämischen (tHI) Insult basiert, der Thrombose und Infarkt auslöst und positiv auf die durch Gewebeplasminogenaktivator (tPA) vermittelte Fibrinolyse in einem therapeutischen Fenster ähnlich wie bei Schlaganfallpatienten anspricht.

A thrombotischer Schlaganfall Modell basierend auf Transient zerebrale Hypoxie-Ischämie

Die Frühgeborenen-Enzephalopathie umfasst die Anomalien des Zentralnervensystems, die mit Verletzungen durch Frühgeburten verbunden sind. Dieser Bericht beschreibt ein klinisch relevantes Rattenmodell der in utero transienten systemischen Hypoxie-Ischämie und der intraamniotischen Lipopolysaccharid-Verabreichung (LPS), das die Chorioamnionitis nachahmt, und den damit verbundenen Einfluss von infektiösen Reizen und Plazenta-Unterperfusion auf die ZNS-Entwicklung.

Modellierung Enzephalopathie praematurorum Mit Prenatal Hypoxie-Ischämie mit Intra-Frucht Lipopolysaccharide bei Ratten

Neonataler Schlaganfall ist eine signifikante Ursache für frühe Hirnverletzungen, die ein translationales Modell mit konsistenten fokalen Verletzungsmustern und hoher Reproduzierbarkeit erfordern, um eine Studie zu ermöglichen. Diese Studie beschreibt das detaillierte chirurgische Verfahren zur Schaffung einer nicht-hämorrhagischen, einseitigen fokalen Ischämie-Reperfusionsverletzung bei langzeitäquivalenten Nagetieren.

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Modell von Neugeborenen Stroke in P10 Ratten

Führten wir einseitige Halsschlagader Okklusion auf postnatale Tag 7-10 CD-1 Maus Welpen eine neonatale hypoxisch-ischämische (HI) Modell erstellt und untersucht die Auswirkungen der HI-Hirn-Trauma. Wir untersuchten neurologischen Funktionen in diesen Mäusen im Vergleich zu normalen Mäusen nicht betrieben.

Neurobehavioral Bewertungen in einem Mausmodell der Neugeborenen hypoxisch-ischämische Hirnschädigung

Die Methode beschreibt entzündungsempfindliche hypoxisch-ischämische und hyperoxische Hirnverletzungen im P17-Ferret, um die komplexe Wechselwirkung zwischen längeren Entzündungen und oxidativen Hirnverletzungen bei einer Reihe von späten Frühgeborenen zu modellieren.

Ein Frettchenmodell einer entzündungssensibilisierten spätpräfristifernen hypoxischen-ischämischen Hirnverletzung

Dieses Manuskript beschreibt eine Methode zur kontinuierlichen Video-EEG-Aufzeichnung mit mehreren Tiefenelektroden bei neugeborenen Mäusen, die eine Hypoxie-Ischämie erleiden.

Kontinuierliches Video-Elektroenzephalogramm während Hypoxie-Ischämie bei neonatalen Mäusen

Erfahren Sie das postnatale Rattenmodell für hypoxisch-ischämische Enzephalopathie mit Karotisligatur und Hypoxiekammer. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Hirnverletzungsmechanismen und therapeutischen Ansätzen.

Die hypoxische ischämischen Enzephalopathie Model of Perinatal Ischämie

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