Eine Technik für Serial Sammlung von Liquor aus der Cisterna Magna in Maus

Der Eingriff beginnt mit der Betäubung der Maus und der Vorbereitung der Operationsstelle. Die Maus wird dann bäuchlings auf das stereotaktische Instrument gelegt. Ein sagittaler Hautschnitt wurde dem Hinterhaupt unterlegen gemacht und das Unterhautgewebe und die Halsmuskulatur durch die Mittellinie stumpf getrennt.

Dann wird der hintere Körperteil so abgelegt, dass der Körper mit dem fixierten Kopf einen 135 Grad Winkel bildet, die Dura mater des CI sternum magna mit der Glaskapillare durchdrungen und der Liquor entnommen. Nach der Liquorprobenahme werden die Muskeln neu ausgerichtet und die Haut wird vernäht, etwa ein Milliliter 0,9%ige NACL-Kochsalzlösung wird subkutan injiziert, um eine Austrocknung zu verhindern, und die Maus wird warm gehalten, bis sie sich erholt hat. Hallo, mein Name ist Liu aus dem Labor von Dr. Karen Duff am Top Institute der Columbia University.

Heute zeige ich Ihnen, wie Sie zerebrale Rückenmarksflüssigkeit aus dem Systemmagazin der Maus sammeln. Mit dieser Technik können wir bis zu dreimal serielle Liquorproben von derselben Maus im Abstand von zwei bis drei Monaten sammeln. In unserem Labor verwenden wir diese Technik, um die CSFA-Beta- oder Tau-Spiegel in verschiedenen Altersstufen unserer transgenen Mausmodelle der Alzheimer-Krankheit zu bestimmen und diese Werte mit denen des Gehirns zu korrelieren.

Abschließend interessieren wir uns für das Potenzial von CSFA-Beta- oder Tau-Spiegeln als potentielle biologische Marker für das Fortschreiten der Erkrankung und auch für die therapeutischen Studien an den Mäusen. Also lasst uns loslegen. Für dieses Verfahren ist es notwendig, Kapillaren mit einer Mikropipette polar herzustellen.

Die hier verwendeten Kapillaren sind BOA Silikatglas B 175 10 von Sutter Instruments; ziehen die Kapillaren an einer Sutter P 87 flammenden Mikropipette polar mit dem Hitzeindex 300 und dem Druckindex drei 30. Die Glaskapillare ist fünf Zentimeter lang und hat eine spitz zulaufende Spitze. Die Spitze der Kapillare wird mit einer Schere so beschnitten, dass ihr Innendurchmesser etwa 0,5 Millimeter beträgt.

Der chirurgische Eingriff beginnt mit der Betäubung der Maus mit Ketamin 100 Milligramm pro Kilogramm und Xylazin 10 Milligramm pro Kilogramm, die während der Anästhesie intraperitoneal verabreicht werden, und hält die Maus in einem 37 Grad Celsius heißen Inkubator warm. Nachdem Sie festgestellt haben, dass das Tier vollständig betäubt ist und einen Zehenkneif-Entzugsreflex hat, rasieren Sie den Hals Probe und platzieren Sie die Maus dann auf dem stereotaktischen Instrument wie diesem von David Kink. Führen Sie in direktem Kontakt mit dem Heizkissen einen rektalen Temperaturfühler ein, damit die Wärme des Kissens an die Körpertemperatur der Maus angepasst werden kann.

Sichern Sie den Kopf mit den Kopfadaptern, tupfen Sie die Halshaut dreimal mit 10 % Povidon, Jod und 70 % Ethanol ab und machen Sie einen sagittalen Schnitt, der dem hinteren Teil des Kopfes oder des Hinterhaupts unterliegt. Die nächsten Schritte sollten unter einem Präpariermikroskop mit einer stumpfen Pinzette durchgeführt werden. Trennen Sie das Unterhautgewebe und die Muskeln M durch Ventordienste und M rectus capita dorsalis major, so dass die Dura-Materie des Brustbeins magna freiliegt. Verwenden Sie richtig ein Paar Mikro-Retraktoren, um die Muskeln auseinander zu halten.

Zum Schluss legst du die Maus mit dem Kopf in einem 135-Grad-Winkel zum Körper ab. Die Maus ist nun bereit für die Liquorsammlung. Diese Technik zur Entnahme von Liquor aus dem Magno-Brustbein wurde bereits zuvor veröffentlicht.

C Abbildung eins A unter dem Präpariermikroskop. Die Dura-Materie erscheint als ein glitzerndes und klares umgekehrtes Dreieck, durch das die Medulla oblongata und ein großes Blutgefäß sichtbar sind. Arteria dural spinella C Abbildung eins B. Zu sehen ist die zirkulatorische Pulsation der Medulla und des angrenzenden Liquorraums.

Mit einem sterilen Wattestäbchen die Duramasse trocken tupfen, durch die Duramasse lateral der Arteria dorsalis Spinelle die Kapillare in das CI sternum magna eindringen. Wenn die Kapillare richtig eingeführt wird, kommt es zu einer spürbaren Widerstandsänderung und der Liquor fließt dann in die Kapillare. Nachdem der Liquor entnommen wurde, entfernen Sie vorsichtig die Kapillare und verbinden Sie sie mit einer Drei-Milliliter-Spritze unter Verwendung eines Polyethylenschlauchs mit einem Innendurchmesser von einem Millimeter

Injizieren Sie den Liquor in ein 0,5-Milliliter-Röhrchen. Beschriften Sie die Tube und frieren Sie sie sofort auf Trockeneis ein. Nach dem Einfrieren den Liquor in einen Gefrierschrank mit minus 80 Grad Celsius umfüllen.

Die soeben demonstrierte Probenahmetechnik ist äußerst schonend und ermöglicht es, nachfolgende Liquorproben über einen Zeitraum von zwei bis drei Monaten aus derselben Maus zu entnehmen. So sollten nach der Probenentnahme Hals, Muskeln und Haut neu ausgerichtet und mit Nähten verschlossen werden. Nachdem der Schnitt genäht wurde, injizieren Sie etwa einen Milliliter Kochsalzlösung 0,9 % NACL subkutan, um die Maus zu rehydrieren.

Halten Sie die Maus bei etwa 37 Grad Celsius warm, bis sie sich erholt hat. Überwachen Sie das Gewicht am ersten Tag und am siebten Tag nach der Operation. Ich habe Ihnen gerade gezeigt, wie Sie zerebrale Rückenmarksflüssigkeit aus dem Systemmagazin der Maus sammeln können.

Bei diesem Verfahren sind drei wichtige Dinge zu beachten. Positionieren Sie zunächst den Kopf und den Körper der Maus richtig auf dem stereotaktischen Rahmen, damit der ator der Cy Magna so weit wie möglich belichtet werden kann. Zweitens, vermeiden Sie vorsichtig die Blutgefäße, wenn Sie mit Kapillaren in das Durometer eindringen.

Andernfalls wird Ihre Probe durch das Blut verunreinigt. Zu guter Letzt denken Sie bitte daran, Ihre Mäuse während des gesamten Eingriffs warm zu halten, um eine Unterkühlung zu vermeiden. Hypothermie ist nicht nur schädlich für Ihre Mäuse, sondern kann auch Ihre Ergebnisse erheblich beeinflussen, indem sie eine Beta-Produktion oder eine hohe Hypophosphorylierungsbeziehung induziert.

Okay, das war's. Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Erfolg bei Ihren Experimenten.