Name: Eine Technik für Serial Sammlung von Liquor aus der Cisterna Magna in Maus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-11-10T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 8 s
Description: Erfahren Sie eine verfeinerte Technik zur seriellen Liquorentnahme aus der Cisterna magna bei transgenen Mäusen. Diese Methode ermöglicht präzise Messungen von Aβ- und Tau-Biomarkern für die Alzheimer-Forschung.

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Unsere Arbeit wird von NIH gewährt NS048447 und AG017216to KD unterstützt. Li Liu möchte Dr. Heikki Tanila (University of Kuopio, Kuopio, Finnland) für seine Betreuung und Unterstützung danken, während die Entwicklung der Original-Protokoll.

Pulling der Glaskapillare <ol><li> Die Glaskapillare ist von der Sutter Instrument Inc (Borosilikatglas, B100-75 bis 10) gekauft. </li><li> Ziehen Sie die Kapillaren auf einer Sutter P-87 Flaming Mikropipette Abzieher, mit der Hitze Index 300 gesetzt und der Druck Index bei 330 gesetzt. </li><li> Schneiden Sie die Spitze des Glaskapillare mit einer Schere, so dass die verjüngte Spitze einen Innendurchmesser von etwa 0,5 mm hat. </li></ol> Cisterna magna Punktionstechnik für CSF CSF-Proben werden aus der Cisterna magna (Abb. 1) mit einer Methode, die zuvor 1 wurde veröffentlicht wurde. <img src="/files/ftp_upload/old/960_2008_10_13_2/960_Figure-01.png" alt="Anatomiediagramm des Gehirns: Kleinhirn, Cisterna magna, Cortex, Hirnstammbeschriftungen." width="432" height="184" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1 1. Die Mäuse werden von Ketamin (100mg/kg) und Xylazin (10mg/kg), intraperitoneal narkotisiert. Während der Zeit der Narkose werden die Mäuse in einem 37 o C Brutschrank gehalten. 2. Die Haut des Halses ist rasiert, und die Maus wird dann gelegt in Bauchlage auf der stereotaktischen Instrument mit direktem Kontakt von einem Heizkissen. Eine rektale Temperatursonde in den Enddarm eingeführt, so dass die Wärme durch das Heizkissen produziert als Reaktion auf die Veränderungen der Körpertemperatur angepasst ist. Der Kopf ist mit dem Kopf Adapter gesichert. Die Operationsstelle wird mit 10% Povidon-Jod abgetupft, gefolgt von 7 0% Ethanol (3 Mal wiederholen) und eine sagittale Inzision der Haut wird schlechter als das Hinterhaupt. 3. Unter dem Dissektionsmikroskop, das subkutane Gewebe und Muskeln (m. biventer cervicis und M. rectus capitis dorsalis major) sind stumpf mit einer Pinzette getrennt. Ein Paar microretractors wird verwendet, um die Muskeln auseinander zu halten. 4. Die Maus ist unten so gelegt, dass der Kopf eine fast 135 o Winkel mit dem Körper bildet. 5. Unter dem Dissektionsmikroskop, erscheint die Dura mater der Cisterna magna als glänzend und klar reverse Dreiecks, durch die der Medulla oblongata und ein wichtiges Blutgefäß (Arteria dorsalis spinalis) und der CSF Raum sichtbar sind (Abbildung 2). <img src="/files/ftp_upload/old/960_2008_10_13_3/960_Figure-02.png" alt="Demonstration der chirurgischen Anatomie; Verfahren zum Sezieren; Exposition des Gewebes; Bildungszwecke." width="304" height="307" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2 6. Die Dura mater ist trocken getupft mit sterilen Wattestäbchen. Dringen in die Kapillare in die citerna magna durch die Dura mater, lateral der Arteria dorsalis spinalis (Abbildung 2). Nach einem spürbaren Wandel im Widerstand gegen die Kapillare Einlegen, fließt der Liquor in die Kapillare. 7. Entfernen Sie vorsichtig die Kapillare, und verbinden Sie es mit einer 3 ml Spritze durch ein Polyethylen-Rohr, dass eine 1 mm Innendurchmesser hat. Spritzen Sie die CSF in eine pre-markierten 0,5 ml Eppendorf-Röhrchen, und frieren das Rohr sofort auf Trockeneis und übertragen sie in eine -80 ° C Gefrierschrank. 8. Nach CSF Probenahme, die Muskeln werden neu ausgerichtet, und die Haut vernäht (4-0, Ethicon, Johnson &amp; Johnson). Etwa 1 ml 0,9% NaCl subkutan zu de-Hydratation verhindern injiziert. Die Maus ist in den Inkubator gehalten, um die Körpertemperatur zu halten, bis es wieder, das Gewicht der Maus ist 1 Tag und 1 Woche nach der Operation überwacht. Ergebnisse und Diskussion Wir beschrieben eine sehr zuverlässige Protokoll für serielle Probenahme von CSF aus Mäusen ohne nachweisbare Plasma Kontamination. 1. Die ganze Prozedur dauert in der Regel 10 min pro Maus (einschließlich Narkose). Das Volumen der CSF erhalten ist abhängig von der Maus-Stämme. In der PS / APP doppelte Tg Mäusen benutzten wir 2, ist das durchschnittliche Volumen ca. 5 ul (3 bis 7 ul), während die P301L (JNPL3) Mäuse 3 geben eine Ausbeute von etwa 10 ul-15 ul. Für die serielle Probenahme, kann ein Maximum von 7-8 ul sicher genommen werden jedes Mal in einem Intervall von 2-3 Monaten. 2. Während der Operation ist es wichtig, den Kopf und den Körper der Maus richtig Stellung auf dem stereotaktischen Rahmen, so dass die Dura mater der Cisterna magna ausreichend belichtet werden können. Vermeiden Sie sorgfältig die Blutgefäße bei Eindringen in die Dura mater mit der Kapillare eine Verunreinigung von Plasmaproteinen, die in der CSF Probe durch Immunoblot für ApoB 4 überwacht werden verhindern können. 3. Die Minimierung der Gewebeschädigung bei jeder Operation ist wichtig, da Gewebe Verklebung der Schwierigkeit durch prädisponierende Blutungen für die nach der Probenahme erhöhen können. 4. Die Körpertemperatur muss auch während der Operation gewartet werden, weil Unterkühlung durch die Anästhesie verursachte wesentlich beeinflussen können das phosphorylierte Tau-Spiegel im Gehirn sehr schnell 5. 5. Die Ab ELISA-Protokoll und Antikörper, die wir verwendet wurden ausführlich in Refolo et al. 6. Zwei ul CSF aus dem PS / APP-Mäuse werden zufriedenstellende Ergebnisse bei einer Verdünnung von 1:50-1:60. Für die tau ELISA, ist 4-5 ul CSF aus P301L (JNPL3) Mäuse ausreichend für dieNachweis von Gesamt-Tau-oder Tau- Phosphor ylated an Threonin 231 (Kits sind aus Bio-Source gekauft). 6. Diese Technik kann auch auf andere Mausmodelle von neurologischen Erkrankungen, für die ein kleines Volumen von CSF ist zufriedenstellend für die gewünschten Tests angewendet werden.

<ol><li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+observation+on+CSF+Abeta42+levels+in+young+to+middle-aged+amyloid+precursor+protein%2Fpresenilin-1+doubly+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Longitudinal observation on CSF Abeta42 levels in young to middle-aged amyloid precursor protein/presenilin-1 doubly transgenic mice.</a> Neurobiol Dis. 17, 516- (2004).</li>
<li>Holcomb, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+Alzheimer-type+phenotype+in+transgenic+mice+carrying+both+mutant+amyloid+precursor+protein+and+presenilin+1+transgenes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Accelerated Alzheimer-type phenotype in transgenic mice carrying both mutant amyloid precursor protein and presenilin 1 transgenes.</a> Nat Med. 4, 97(1998).</li>
<li>Lewis, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibrillary+tangles%2C+amyotrophy+and+progressive+motor+disturbance+in+mice+expressing+mutant+%28P301L%29+tau+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Neurofibrillary tangles, amyotrophy and progressive motor disturbance in mice expressing mutant (P301L) tau protein.</a> Nat Genet. 25, 402- (2000).</li>
<li>DeMattos, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plaque-associated+disruption+of+CSF+and+plasma+amyloid-beta+%28Abeta%29+equilibrium+in+a+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Plaque-associated disruption of CSF and plasma amyloid-beta (Abeta) equilibrium in a mouse model of Alzheimer's disease.</a> J Neurochem. 81, 229(2002).</li>
<li>Planel, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthesia+leads+to+tau+hyperphosphorylation+through+inhibition+of+phosphatase+activity+by+hypothermia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Anesthesia leads to tau hyperphosphorylation through inhibition of phosphatase activity by hypothermia.</a> J Neurosci. 27, 3090(2007).</li>
<li>Refolo, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cholesterol-lowering+drug+reduces+beta-amyloid+pathology+in+a+transgenic+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">A cholesterol-lowering drug reduces beta-amyloid pathology in a transgenic mouse model of Alzheimer's disease.</a> Neurobiol Dis. 8, 890(2001).</li>
</ol>

Wir beschrieben eine sehr zuverlässige Protokoll für serielle Probenahme von CSF aus Mäusen ohne nachweisbare Plasma Kontamination. 1. Die ganze Prozedur dauert in der Regel 10 min pro Maus (einschließlich Narkose). Das Volumen der CSF erhalten ist abhängig von der Maus-Stämme. In der PS / APP doppelte Tg Mäusen wir Gebraucht2, ist das durchschnittliche Volumen ca. 5 ul (3 bis 7 ul), während die P301L (JNPL3) Mäuse 3 geben eine Ausbeute von etwa 10 ul-15 ul. Für die serielle Probenahme, kann ein Maximum von 7-8 ul sicher genommen we...

eine technik für serial sammlung von liquor aus der cisterna magna in maus

A Technique for Serial Collection of Cerebrospinal Fluid from the Cisterna Magna in Mouse 

Alzheimer-Krankheit (AD) ist eine fortschreitende neurodegenerative Erkrankung, die pathologisch durch extrazelluläre Ablagerung von β-Amyloid-Peptid (Aß) und intraneuronale Ansammlung von hyperphosphorylierte Tau-Protein ist aus. Da Liquor (CSF) ist in direktem Kontakt mit dem extrazellulären Raum des Gehirns, bietet es eine Reflexion der biochemischen Veränderungen im Gehirn als Reaktion auf pathologische Prozesse. CSF von AD-Patienten zeigt eine Abnahme in den 42 Aminosäure-Form von Aß (Aß42), und erhöht in Gesamt-tau und hyperphosphorylierte tau, obwohl die Mechanismen, die für diese Veränderungen noch nicht vollständig verstanden. Transgene (Tg) Mausmodellen der Alzheimer bieten eine ausgezeichnete Gelegenheit, um zu untersuchen, wie und warum Aß oder tau-Spiegeln im Liquor ändern, wenn die Krankheit fortschreitet. Hier zeigen wir eine raffinierte Cisterna magna Punktionstechnik für CSF Probenahme aus die Maus. Diese äußerst schonende Sampling-Technik ermöglicht serielle CSF Proben aus der gleichen Maus Abstand von 2-3 Monaten die stark minimiert die verwirrende Wirkung der zwischen-Maus-Variabilität in Aß oder tau-Spiegeln, die es ermöglicht, subtile Veränderungen im Laufe der Zeit zu erkennen eingeholt werden. In Kombination mit Aß und Tau-ELISA, wird diese Technik nützlich sein Studium konzipiert, um die Beziehung zwischen den Ebenen der CSF Aß42 und Tau, und deren Stoffwechsel im Gehirn in AD Mausmodellen untersuchen. Studies in Tg Mäusen konnten wichtige Bestätigung, um das Potenzial der CSF Aß oder tau-Spiegeln als biologische Marker für die Überwachung der Krankheitsprogression verwendet werden kann, und um die Wirkung von therapeutischen Interventionen zu überwachen. Da die Mäuse geopfert und das Gehirn kann für biochemische oder histologische Veränderungen untersucht werden, können die zugrunde liegenden Mechanismen der CSF Veränderungen besser beurteilt werden kann. Diese Daten sind wahrscheinlich informative zur Interpretation der menschlichen AD CSF Veränderungen.

Transgene (Tg) Mausmodellen der Alzheimer bieten eine ausgezeichnete Gelegenheit, um zu untersuchen, wie und warum Aß oder tau-Spiegeln im Liquor ändern, wenn die Krankheit fortschreitet bei menschlichen Patienten. Hier zeigen wir eine raffinierte Cisterna magna Punktionstechnik für serielle CSF Probenahme aus die Maus.

Eine Technik für Serial Sammlung von Liquor aus der Cisterna Magna in Maus

Die Alzheimer-Krankheit (AD) ist eine progressive neurodegenerative Erkrankung, die pathologisch durch die extrazelluläre Ablagerung von &#946;-Amyloid gekennzeichnet ist ...

Das Verfahren beginnt mit der Anästhesie der Maus und der Vorbereitung der Operationsstelle. Die Maus wird anschließend in Bauchlage auf dem stereotaktischen Instrument platziert. Ein sagittaler Schnitt durch die Haut wird unterhalb des Hinterhaupts vorgenommen, und das subkutane Gewebe sowie die Nackenmuskulatur entlang der Mittellinie werden stumpf separiert.Dann wird der hintere Teil des Körpers so abgelegt, dass der Körper einen Winkel von 135 Grad mit dem fixierten Kopf bildet, das Dura mater des CI-Sternum magna wird mit der Glaskapillare durchstochen und die CSF wird gesammelt. Nach der CSF-Entnahme werden die Muskeln wieder in ihre ursprüngliche Lage gebracht und die Haut wird vernäht; etwa ein Milliliter 0,9 %iger NACL-Salzlösung wird subkutan injiziert, um Dehydration zu verhindern, und die Maus wird warmgehalten, bis sie sich erholt hat. Hallo, mein Name ist Liu aus dem Labor von Dr. Karen Duff am Top-Institut der Columbia University.Heute zeige ich Ihnen, wie man zerebrospinale Flüssigkeit aus dem Zisterna magna der Maus gewinnt. Mit dieser Technik können wir serielle CSF-Proben bis zu dreimal von derselben Maus im Abstand von zwei bis drei Monaten sammeln. In unserem L

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Quelle: Joshi, K., et al. Stereotaktischer chirurgischer Ansatz zur Mikroinjektion des kaudalen Hirnstamms und des oberen zervikalen Rückenmarks über die Cisterna magna bei Mäusen. J. Vis. Exp. (2022)Dieses Video zeigt den stereotaktischen Ansatz der Cisterna magna für die gezielte Verabreichung an den Hirnstamm und das obere Rückenmark. Durch den Zugang zur mit Liquor gefüllten Cisterna magna ermöglicht dieser Ansatz präzise Injektionen in Bereiche, die mit stereotaktischen Standardmethoden...

Stereotaktischer Cisterna magna-Ansatz für die therapeutische Verabreichung in einem Mausmodell

Quelle: Zamboni, M., et al., Induktion der Modifikation von leptomeningealen Zellen durch intrazisternale Injektion. J. Vis. Exp. (2020)Dieses Video zeigt das Verfahren zur Verabreichung eines Induktor-Medikaments in die Cisterna magna einer anästhesierten Maus. Die Injektion induziert selektiv die Expression von Fluoreszenzmarkern in Oberflächenzellen des Gehirns, die über die Zerebrospinalflüssigkeit zugänglich sind, was durch Fluoreszenzbildgebung bestätigt wurde.

Gezielte Verabreichung von Medikamenten in einem Mausmodell über Cisterna Magna Injektion

Quelle: Xavier, A. L. R., et al. Kanülenimplantation in die Cisterna Magna von Nagetieren. J. Vis. Exp. (2018)Dieses Video zeigt das Verfahren zur Implantation einer Kanüle in die Cisterna magna einer anästhesierten Maus. Bei der Technik wird eine auf der Nadel befestigte Kanüle durch die Dura in die umgekehrte dreieckige Cisterna magna geführt und für die gezielte Abgabe in das Liquor cerebrospinalis gesichert.

Kanülenimplantation in die Cisterna Magna im Mausmodell

In diesem Video beschreiben wir das Verfahren, um vom Menschen stammende Tumorzellen in die Cisterna magna des Gehirns einer Maus zu bringen. Das orthotope Mausmodell kann verwendet werden, um die metastasierende Ausbreitung von Krebs auf die kranialen Hirnhäute zu untersuchen.

Chirurgische Cisterna magna Injektion: eine Methode zur direkten Verabreichung von Tumorzellen in das zentrale Nervensystem des Mausmodells

Quelle: Sweeney, A. M., et al. In vivo Bildgebung des Liquortransports durch den intakten Schädel der Maus mittels Fluoreszenzmakroskopie. (2019)Dieses Video zeigt den Prozess der Visualisierung des Liquorflusses (CSF) in einem Mäusegehirn mithilfe von Fluoreszenzbildgebung. Ein fluoreszierender Tracer wird in die Cisterna magna (CM) injiziert, so dass ihre Bewegung mit dem Liquor durch den Subarachnoidal- und perivaskulären Raum verfolgt werden kann. Die Zeitrafferbildgebung erfasst die Reise...

In-vivo-Bildgebung des Liquortransports in einem Mäusegehirn mittels Fluoreszenzmakroskopie

Dieses Protokoll beschreibt eine verbesserte Technik für die reichhaltige Sammlung von zerebrospinale Flüssigkeit (CSF) ohne Kontamination aus Blut. Mit größeren Musterkollektion und Reinheit können weitere Analysen mit CSF, um unser Verständnis von Krankheiten zu fördern, die das Gehirn und das Rückenmark betreffen durchgeführt werden.

Ein verbessertes Verfahren zur Sammlung von Liquor cerebrospinalis aus narkotisierten Mäuse

Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Durchführung der Cisterna Magna Kanülierung (CMc), minimalinvasiv, Tracer, Substrate und Signalmoleküle in den Liquor cerebrospinalis (CSF) zu liefern. In Kombination mit verschiedenen Bildgebungsverfahren ermöglicht CMc Glymphatic System sowie CSF Dynamik Bewertung und Gehirn-weite Lieferung verschiedener Verbindungen.

Kanüle Implantation in die Cisterna Magna von Nagetieren

Die transkranielle optische Bildgebung ermöglicht eine Großfeld-Bildgebung des Zerebrospinalflüssigkeitstransports im Kortex lebender Mäuse durch einen intakten Schädel.

In Vivo Imaging von Cerebrospinalfluid Transport durch den intakten Mausschädel mittels Fluoreszenz-Makroskopie

Erhöhte Spinalflüssigkeitsproteinspiegel können entweder das Ergebnis der Diffusion von Plasmaprotein über eine veränderte Blut-Hirn-Schranke oder intrathekale Synthese sein. In diesem Artikel wird ein optimiertes Testprotokoll vorgestellt, das hilft, beide Fälle zu unterscheiden und quantitative Messungen von intrathekalen synthetisierten Proteinen liefert.

Quantitative Messung von intrathecally Synthetisierten Proteinen bei Mäusen

Die stereotaktische Chirurgie zur Ausrichtung auf Gehirnstellen bei Mäusen beinhaltet häufig den Zugang durch die Schädelknochen und wird von Schädel-Landmarken geleitet. Hier skizzieren wir einen alternativen stereotaktischen Ansatz, um den kaudalen Hirnstamm und das obere zervikale Rückenmark über die Cisterna magna anzusprechen, der auf der direkten Visualisierung von Hirnstamm-Landmarken beruht.

Stereotaktischer chirurgischer Ansatz zur Mikroinjektion des kaudalen Hirnstamms und des oberen zervikalen Rückenmarks über die Cisterna magna bei Mäusen

Hier wird ein Protokoll zur Bewertung der meningealen lymphatischen Gefäße (MLVs) der Maus vorgestellt, die eine wichtige Rolle bei mehreren neurologischen Erkrankungen spielen. Ziel dieses Protokolls ist es, eine integrierte Methode bereitzustellen, die sowohl die funktionale Bewertung der Tracerdrainage als auch eine detaillierte morphologische Charakterisierung des dorsalen MLVs-Netzwerks ermöglicht.

Integriertes Protokoll zur Beurteilung der meningealen Lymphatik: Cisterna-Magna-Injektion, Lymphknotenbildgebung, meningeale Dissektion und Ganz-Mount-Färbung

Erfahren Sie eine verfeinerte Technik zur seriellen Liquorentnahme aus der Cisterna magna bei transgenen Mäusen. Diese Methode ermöglicht präzise Messungen von Aβ- und Tau-Biomarkern für die Alzheimer-Forschung.

Eine Technik für Serial Sammlung von Liquor aus der Cisterna Magna in Maus

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