Respiración Celular

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  1. Cuantificando la Respiración usando Microrespirómetros ul class="lab-items">
  2. NOTA: En este experimento, medirá la tasa de respiración celular para germinar semillas midiendo la tasa de intercambio por oxígeno. A medida que se consume oxígeno para proporcionar energía, las semillas en germinación liberan dióxido de carbono. Este dióxido de carbono es absorbido por el carbonato de potasio y, por lo tanto, se reducirá la presión gaseosa general del respirómetro. HIPÓTESIS: La hipótesis experimental es que las semillas en germinación mostrarán una mayor tasa de respiración que las cuentas de vidrio de control. Además, que a temperaturas más altas, la tasa de respiración celular en las semillas aumentará. Las hipótesis nulas son que tanto las cuentas de vidrio como las semillas en germinación mostrarán una tasa similar de respiración celular y que la temperatura no tiene ningún efecto sobre la respiración.
  3. Para configurar el control, primero retire el émbolo de un microrespirómetro preparado y etiquételo con un "CR" o "CH" respectivamente, dependiendo de si se trata de la temperatura de la sala de control o del tratamiento calentado.
  4. Agregue las microperlas de vidrio a cada uno de los microrespirómetros hasta la marca de 0.5 mL, y empuje el émbolo en la jeringa hasta la marca de 1 mL.
  5. Coloque 3 - 4 arandelas en el extremo acampanado de cada microrespirómetro para pesarlas mientras están en el baño de agua. NOTA: El microrrespirómetro se asentará con el tubo capilar hacia arriba.
  6. Coloque los dispositivos de control a un lado.
  7. Para configurar los respirómetros experimentales sentados, retire el émbolo de un microrespirómetro preparado y etiquételo con "ER" o "EH" respectivamente, dependiendo de si se trata de la temperatura ambiente experimental o del tratamiento calentado.
  8. Mida 0.5 mL de semillas en germinación en la jeringa de tuberculina del microrrespirómetro.
  9. Luego, empuje la jeringa hasta la marca de 1 mL.
  10. Coloque 3 - 4 arandelas en el extremo acampanado de cada microrespirómetro para pesarlas mientras están en el baño de agua.
  11. Para utilizar los microrespirómetros, presione cuidadosamente los microrespirómetros "CR" y "ER" en el baño de agua a temperatura ambiente. Toda la jeringa debe estar sumergida, pero los tubos capilares deben estar completamente expuestos. Retire el agua de la bañera hasta alcanzar esta posición. Asegúrese de que la parte superior del tubo capilar esté abierta.
  12. Realice el mismo procedimiento (paso 9) para los microrespirómetros "CH" y "EH" para configurar el grupo experimental de temperatura más alta.
  13. Espere 5 minutos antes de continuar para permitir que la temperatura en los microrespirómetros se iguale con el baño de agua.
  14. Agregue una sola gota de líquido manómetro a la parte superior de cada uno de los cuatro tubos capilares que sellos las cámaras del microrespirómetro. NOTA: Si las cámaras funcionan correctamente, el líquido del manómetro será aspirado a la cámara capilar.
  15. Utilice el conjunto de émbolo en el baño para aspirar el líquido del manómetro hacia el capilar. Deténgase cuando el líquido esté aproximadamente a la mitad del tubo capilar. IMPORTANTE: Los microrrespirómetros no deben ser perturbados una vez que se añaden al baño. No golpee la mesa ni inserte ni retire nada hacia o desde el baño de agua una vez que las cámaras hayan sido selladas y ecualizadas.
  16. Marque el borde inferior del fluido del manómetro que está más cerca de la cámara. Esto representa el punto de tiempo cero.
  17. Configura un temporizador para que suene en 5 minutos.
  18. Después de 5 minutos, crea una nueva marca donde esté el líquido del manómetro en cada microrrespirómetro. Repita cada 5 minutos hasta que hayan pasado 25 minutos o hasta que el líquido del manómetro haya recorrido toda la longitud del tubo capilar.
  19. Luego, retira los respirómetros de los baños de agua.
  20. Mide la distancia entre cada una de las marcas y regístralas en la Tabla 1 junto al punto de tiempo correcto. Haga clic aquí para descargar la Tabla 1
  21. Durante la limpieza, los manómetros deben ser deconstruidos para ser reutilizados o desechados en la basura.
  22. Resultados ul class="lab-items">
  23. Para analizar los datos que recopilaste, primero traza los puntos de datos con el eje x como tiempo y el eje y como la distancia que se movió el manómetro, representando el consumo de oxígeno.
  24. Calcula la pendiente de cada línea usando esta ecuación.
  25. Registre estos valores para cada microrespirómetro en la Tabla 2. NOTA: Este valor representa la cantidad de respiración celular que tuvo lugar en el transcurso del experimento. Haga clic aquí para descargar la Tabla 2
  26. Representa las tasas de respiración como un gráfico de barras.
  27. Examina ambos gráficos. Considera cómo tus resultados encajan con las hipótesis. Observe las diferencias observadas en la tasa de respiración entre las perlas de control y las semillas en germinación. Determine si el aumento de la temperatura tuvo algún efecto en la frecuencia respiratoria.

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