14.11
La técnica de patch-clamp es una herramienta electrofisiológica para estudiar el comportamiento de los canales iónicos de células excitables como las neuronas y las fibras musculares.
La configuración de abrazadera de parche incluye una micropipeta de vidrio colocada contra una pequeña área de la membrana celular que contiene uno o más canales iónicos. Consiste en una solución de electrolito y un electrodo de plata clorada para medir voltajes y corrientes.
Cuando se aplica una pequeña succión, el "parche de membrana" se sella herméticamente contra la punta de la pipeta.
Esta área en forma de omega de la membrana, llamada sello de gigaohmios, está aislada eléctricamente, lo que garantiza que los iones que fluyen a través del canal pasen solo a la pipeta.
El electrodo de registro dentro de la micropipeta está conectado a un amplificador de alta sensibilidad que amplifica las fluctuaciones de corriente o voltaje resultantes del movimiento de iones a través de los canales iónicos, lo que permite la medición de las señales eléctricas generadas.
En la 'pinza amperimétrica', el voltaje se establece en un valor particular y se miden los cambios resultantes en el flujo de corriente. Alternativamente, la corriente se puede fijar a un valor establecido y se puede medir la variación de voltaje a través de la membrana.
Muchas funciones celulares fundamentales, como la contracción muscular y la transmisión nerviosa, dependen de las señales eléctricas producidas por el movimiento de iones cargados positiva y negativamente a través de la membrana celular. Un método competente para registrar la corriente que fluye a través de toda la celda o del canal iónico único es la técnica de patch-clamp.
En este método, una micropipeta de vidrio que contiene una solución electrolítica se sella herméticamente contra una pequeña porción de la membrana celular. Como resultado, una parte de la membrana celular queda aislada eléctricamente, lo que garantiza que los iones que se mueven a través de los canales fluyan únicamente hacia la micropipeta. Además, este sellado hermético de la membrana celular evita que los iones escapen a la solución del baño en la que está suspendida la célula.
Diferentes métodos de sujeción con parche:
Dependiendo del interés de la investigación, se pueden utilizar varias variaciones del método de parche-pinza para medir las propiedades biofísicas de la célula. Por ejemplo, los investigadores pueden fijar o controlar el voltaje de la membrana y medir la corriente que la atraviesa. Como alternativa, pueden limitar la corriente y medir cualquier variación en el voltaje de la membrana.
En el modo de unión a células, el parche de membrana que contiene uno o varios canales iónicos permanece intacto. Como resultado, sólo se puede medir la corriente que fluye a través del parche de membrana. Por el contrario, el método de células enteras implica la rotura del parche de membrana mediante la aplicación breve de una fuerte succión. En consecuencia, el interior de la pipeta se continúa con el citoplasma. Este modo permite medir la corriente eléctrica y el voltaje de toda la celda.
Otro método de parche requiere una retracción suave de la pipeta adjunta. Como resultado, el parche de membrana se extirpa sin afectar el sellado hermético. En esta configuración de adentro hacia afuera, la porción intracelular de la membrana está expuesta a la solución del baño, lo que permite el estudio de los factores intracelulares que afectan las funciones del canal.
La técnica de patch-clamp es una herramienta electrofisiológica para estudiar el comportamiento de los canales iónicos de células excitables como las neuronas y las fibras musculares.
La configuración de abrazadera de parche incluye una micropipeta de vidrio colocada contra una pequeña área de la membrana celular que contiene uno o más canales iónicos. Consiste en una solución de electrolito y un electrodo de plata clorada para medir voltajes y corrientes.
Cuando se aplica una pequeña succión, el "parche de membrana" se sella herméticamente contra la punta de la pipeta.
Esta área en forma de omega de la membrana, llamada sello de gigaohmios, está aislada eléctricamente, lo que garantiza que los iones que fluyen a través del canal pasen solo a la pipeta.
El electrodo de registro dentro de la micropipeta está conectado a un amplificador de alta sensibilidad que amplifica las fluctuaciones de corriente o voltaje resultantes del movimiento de iones a través de los canales iónicos, lo que permite la medición de las señales eléctricas generadas.
En la 'pinza amperimétrica', el voltaje se establece en un valor particular y se miden los cambios resultantes en el flujo de corriente. Alternativamente, la corriente se puede fijar a un valor establecido y se puede medir la variación de voltaje a través de la membrana.
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