32.6
Fraccionamiento subcelular
El fraccionamiento subcelular se utiliza para obtener fracciones puras de diferentes orgánulos celulares a partir de un lisado celular.
Dos métodos comúnmente utilizados para el fraccionamiento subcelular son la centrifugación diferencial y la centrifugación en gradiente de densidad.
La centrifugación diferencial utiliza la centrifugación secuencial a velocidades progresivamente crecientes para la separación de orgánulos basada en el tamaño.
En primer lugar, la muestra se centrifuga a una velocidad baja de alrededor de 400 a 600 x g para sedimentar estructuras grandes como núcleos y restos celulares.
Luego, el sobrenadante se hace girar a alta velocidad que oscila entre 10.000 y 20.000 x g para pellizar orgánulos como mitocondrias, lisosomas y peroxisomas.
Otros ciclos de centrifugación a velocidades superiores a 80.000 x g pueden separar microsomas, fracciones de membrana e incluso ribosomas.
Sin embargo, la centrifugación diferencial no puede separar los orgánulos que son muy cercanos en tamaño o densidad, como las mitocondrias, de los peroxisomas.
En tales casos, la centrifugación en gradiente de densidad, un método más sensible, es una herramienta valiosa.
Este método utiliza g
El homogeneizado obtenido después de la lisis celular contiene varios orgánulos unidos a membranas que pueden separarse en fracciones puras mediante f…
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