Este protocolo muestra cómo realizar técnicas de inmunohistoquímica sobre disecados larvas de Drosophila.
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Artículo de método
Drosophila larval NMJ inmunohistoquímica
En este artículo
Resumen
Protocolo
Antes de empezar
- Prepare las siguientes soluciones: PBT (0,1% Triton X100 en PBS 1X), PBTB (0,2% de BSA en PBT), y PBTN (NGS 2% en PBTB).
- Diseccionar las larvas de Drosophila. Por favor vea las larvas de Drosophila disección NMJ.
Inmunohistoquímica
- Mueva las larvas de un tubo de 1.5 ml contiene PBT. Lavado de las larvas de dos veces durante 15 minutos en el PBT. Nota: para lavar, se coloca el tubo de 1.5 ml en un mezclador nutator. Quite el líquido con una pippetor y reemplazarlo con líquido fresco.
- Retire el PBT. Lavar dos veces en PBTB durante 30 minutos.
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Discusión
Inmunohistoquímica (IHC) es de vital importancia para el estudio de la biología MNJ, ya que permite la visualización de la UNM. Esto se logra mediante el uso de anticuerpos que reconocen la membrana neuronal (por ejemplo, HRP), la presynapse (por ejemplo, CSP, SYT), y / o la postsynapse (por ejemplo, DLG). Moléculas de señalización, las proteínas estructurales, o de nuevas proteínas de interés también puede ser manchada. Entonces, los genes pueden mutar o missexpressed y IHC puede detectar la perturbación de la estructu.......
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Stereo microscopio “Stemi” 2000 | Carl Zeiss, Inc. | 495101-9804-000 | |
| Fuente de luz KL 1500 LCD | Carl Zeiss, Inc. | 000000-1063-181 | |
| Pinzas Dumont SS | Fine Science Tools | 11200-33 | |
| Pinzas Dumont n.º 5 | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| Mezclador nutatorio Adams™ | BD Biosciences | 421105 | |
| Cuchillo de precisión n.º 1 | X-Acto | 3201 | |
| Cuchillas n.º 16 | X-Acto | 216 | |
| Reactivo antifade ProLong Gold | Invitrogen | 36930 |
Referencias
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on ident....
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Reimpresiones y permisos
