Lograr una alta calidad y la cantidad adecuada de islotes humanos es uno de los requisitos importantes para el trasplante de islotes exitosos. En este video se describe paso a paso los procedimientos para el aislamiento de los islotes pancreáticos humanos (parte II: el saneamiento y la cultura de los islotes), utilizando un método modificado automatizado.
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Artículo de método
De páncreas humano de aislamiento Islet: Parte II: Purificación y Cultura de los islotes
En este artículo
Resumen
Resumen
Gestión de la diabetes tipo 1 es una carga, tanto para el individuo y la sociedad, con un costo de más de 100 millones de dólares anuales. A pesar del uso generalizado de la monitorización de la glucosa y las nuevas formulaciones de insulina, muchas personas aún se desarrollan devastadoras complicaciones secundarias. El trasplante de islotes pancreáticos puede restaurar un control casi normal a la glucosa en pacientes diabéticos
Protocolo
1. La purificación de los islotes
- Para iniciar el procedimiento de purificación de islotes, la carga de la bolsa de COBE, pinza de todos los tubos, excepto el tubo verde, y establecer la velocidad a 1.500 y la súper a 0.
- En la capilla establecer los vasos de la bomba y el gradiente y conectar la tubería de recogida en el tubo verde.
- Ahora la carga de la Ficoll 1,100 puede comenzar: push "giro" a continuación, añadir 110 ml de Ficoll 1.100 en el vaso delante, y arrancar la bomba para cargar la bolsa de COBE. A medida que el Ficoll se ha cargado, pulse súper a cabo, parar la bomba, despinzar la cabeza de la bomba y ajustar la velocidad de....
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Discusión
A pesar de importantes avances en las técnicas de aislamiento de islotes humanos, el rendimiento de los islotes siguen siendo muy variable e impredecible. Purificación del tejido pancreático digieren es crucial para recuperar una masa suficiente isla después de la digestión enzimática con éxito para el trasplante. El método de purificación de la UIC se recomienda debido a una recuperación superior de los islotes de alta pureza se demostró mediante el uso de este método. Por otra parte, hasta 50 ml de tejido digerido se .......
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Agradecimientos
Con el apoyo de la fundación de la Universidad de Illinois en Chicago, así como células de los islotes del Centro de Recursos NIH (RFA-05-003 RR), la Fundación Christopher, la Fundación Efroymson, y la Fundación Tellabs.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios | |
|---|---|---|---|---|
| Centrífuga | equipo | Beckman Coulter Inc. | 424803 | |
| Procesador de Células Cobe 2991 | equipo | Gambro. BCT | 2556 | purificación de islotes |
| Microscopio invertido MZ6 TLBD4.1 | equipo | Leica Microsystems | 4103 | |
| Placa de cultivo celular con cuadrícula de 2 mm | equipo desechable | Nalge Nunc international | 174926 | conteo de islotes |
| Digital Sight DS L1 | equipo | Nikon Instruments | 217267 | |
| Bolsa COBE | equipo desechable | O.R. Solution | 66707003 | |
| Frasco de cultivo T175 | equipo desechable | Sarstedt Ltd | 83.1812.500 | |
| Solución de la Universidad de Wisconsin (UW) | reactivo | DURAMED | 1000-46-06 | |
| Solución salina tamponada de Hank’s (HBSS) | reactivo | Mediatech, Inc. | 99-597-CM | |
| Ficoll 1.100 | reactivo | Bichrom AG | L6155 | |
| Medio M199 (solución de lavado) | reactivo | Mediatech, Inc. | 99-784-CM | |
| Solución final de lavado/medio de cultivo | reactivo | Mediatech, Inc. | 99-785-CV | |
| Ditizona | reactivo | Sigma-Aldrich | D5130 |
Referencias
- Shapiro, A. M. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).
- Nano, R. ....
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Reimpresiones y permisos
