Las abejas pueden ser acondicionadas en una paradigma de aprendizaje olfativo apetito (PER acondicionado). Utilizando los olores como estímulo, hemos establecido un método en el que el comportamiento se registra al mismo tiempo imágenes de calcio se utiliza para medir la actividad de olor evoca en las neuronas del cuerpo de setas In vivo.
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Artículo de método
En vivo Ca 2 + - Imágenes de las neuronas del cuerpo de hongos durante el aprendizaje olfativo en la abeja de la miel
En este artículo
Resumen
Resumen
En vivo y semi-vivo en la preparación para obtener imágenes de calcio se ha desarrollado en nuestro laboratorio por Joerges, Kuttner y Galicia más de diez años, para medir la actividad olor evoca en el lóbulo antenal 1. A partir de entonces, ha sido constantemente perfeccionado y aplicado a neuropiles diferente en el cerebro de las abejas. Aquí se describe la preparación se utilizan actualmente en el laboratorio para medir la actividad en las neuronas del cuerpo de setas, junto con un dextrano colorante sensible al calcio (Fura-2). Nos retrógrada mancha de hongo neuronas del cuerpo mediante la inyección de contraste en sus axones o región soma. Nos centramos en la reducción de la invasión, para lograr una preparación en la que todavía es posible entrenar a las abejas con PER acondicionado. Somos capaces de controlar y cuantificar la respuesta de comportamiento mediante el registro electro-myograms del músculo que controla el PER (M17) 2.
Después del experimento fisiológico las estructuras proyectadas se investigan con mayor detalle mediante microscopía confocal de barrido para hacer frente a la identidad de las neuronas.
Protocolo
Abeja Preparación y posterior relleno
- Captura recolectores de miel de abeja en la colmena y se enfría en hielo durante la inmovilización.
- Montaje en Plexiglas las cámaras de los tres. Fijar los ojos y el tórax a las paredes de la cámara de grabación con cera de bajo punto de fusión duro.
- Tire de capilares de vidrio como de uso general para la electrofisiología y la ruptura en la punta para obtener un diámetro de la punta de la ca. 10μm. Cobertura en la punta del capilar con pasta de tinte. Pasta de colorante consiste en una mezcla 10:01 de la Fura-2 dextrano y lisina puede arreglar tetrametilrodamina dextrano.
- Para ....
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Discusión
En esta presentación se han seguido todos los pasos necesarios para investigar en las señales de calcio in vivo en la abeja melífera. Hemos aplicado esta técnica a las neuronas del cuerpo de hongos, pero las imágenes se puede realizar en todas las neuronas que puede ser una técnica de tinción establecida. Nos hemos centrado en las neuronas de la vía olfativa de la abeja de la miel. Los experimentos son realizados en un cuarto oscuro. La puesta en marcha se ilumina con una luz de onda larga que.......
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Agradecimientos
Este trabajo está financiado por la DFG.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Cera dura de bajo punto de fusión Deiberit 502 | Dr. Böhme Schöps Dental GmbH | ||
| FURA-2 dextrano sal potásica, 10 000 MW | Invitrogen | F-3029 | Proteger de la luz. |
| dextrano tetrametilrodamina 10 000 MW | Invitrogen | D-3312 | Proteger de la luz. |
| n-eicosano | Sigma-Aldrich | 21, 927-4 | |
| Adhesivo Kwik Sil | World Precision Instruments, Inc. | KWIK SIL | |
| Configuración de imagen | TILL Photonics | ||
| Cámara CCD | Imago | ||
| CED | Texas Instruments |
Referencias
- Joerges, J., Küttner, A., Galizia, C. G., Menzel, R. Representations of odors and odor mixtures visualized in the honeybee brain. Nature. 387 (6630), 285-288 (1997).
- Rehder, V. Quantification of the honeybee's proboscis reflex by electromyiographic recordings....
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Reimpresiones y permisos
