Se describe un método rápido y eficaz para la purificación de las mitocondrias de la levadura Saccharomyces cerevisiae. Este método permite el aislamiento de alto rendimiento de puro mitocondrias, que son esencialmente libres de contaminación por otros orgánulos y mantener su integridad estructural y funcional después de su purificación.
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Artículo de método
Purificación de las mitocondrias de las células de levadura
En este artículo
Resumen
Resumen
Las mitocondrias son el sitio principal de producción de ATP durante el metabolismo aeróbico en eucariotas no fotosintéticos células
Protocolo
Materiales y métodos
Cepas de levadura y las condiciones de crecimiento
La cepa de tipo salvaje BY4742 (MATα his3Δ1 leu2Δ0 lys2Δ0 ura3Δ0) fue cultivada en medio rico en YEPD (1% extracto de levadura, 2% de peptona, 2% de glucosa). Las células fueron cultivadas a 30 ° C con rotación agitación a 200 rpm en frascos de Erlenmeyer en un "frasco de volumen / volumen medio de" proporción de 5:1.
El aislamiento de la fracción mitocondrial crudo
- Crecer 1 L de la cultura de la cepa de tipo salvaje BY4742 durante 48 h.
- Vierta la cultura en 500 ml de tubos de centrifug....
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Discusión
Este método permite el aislamiento de alto rendimiento de puro mitocondrias de células de levadura. Las mitocondrias purificadas por este método son esencialmente libres de contaminación por otros orgánulos y mantener su integridad estructural y funcional después de su purificación. El método descrito mitocondrias rendimientos que son adecuados para células libres de la reconstitución de los procesos esenciales mitocondrial. Estas mitocondrias de alta pureza también se puede utilizar para el análisis de la estructura mi.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por becas de los CIHR y NSERC de Canadá. VIT es un investigador de Nueva CIHR y Concordia Cátedra de Investigación de la Universidad de genómica, biología celular y el envejecimiento.
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Referencias
- Voet, D., Voet, J. G. Biochemistry. , 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc. Hoboken, NJ. (2004).
- Suen, D. -F., Norris, K. L., Youle, R. J. Mitochondrial dynamics and apoptosis. Genes Dev. 22, 1577-1590 (2008).
- Cheng, W. C., Berman, S. B., Ivanovska, I., Jonas, E. A., Lee, S. J., Chen, Y., Kaczmarek, L. K., Pineda, F. &, Hardwick, J. M.
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Reimpresiones y permisos
