Mediciones repetidas de la fisiología respiratoria y el muestreo de roedores de las células de las vías respiratorias inflamatorias son deseables, pero en general no es factible. A continuación se describe un método reproducible para la intubación por vía oral ratones que permite mediciones repetidas de la hiperreactividad de las vías respiratorias y el muestreo de las células de las vías respiratorias inflamatorias.
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Artículo de método
A reversible, método no invasivo para las mediciones de resistencia de las vías y Toma de Muestras Líquido del Lavado broncoalveolar en ratones
En este artículo
Resumen
Resumen
Las vías respiratorias hiperreactividad (AHR) las mediciones y el lavado broncoalveolar (LBA), un muestreo de fluidos son esenciales para los modelos de asma experimental, pero los procedimientos repetidos para obtener estas mediciones en el mismo animal generalmente no son factibles. Este sentido, demuestran los protocolos para la obtención de ratones mediciones repetidas de la AHR y muestras de líquido del lavado broncoalveolar. Los ratones fueron retados por vía intranasal en siete ocasiones en 14 días con un potente alergeno o falso tratamiento. Antes de que el desafío inicial, y dentro de las 24 horas siguientes a cada desafío intranasal, los mismos animales fueron anestesiados por vía oral intubados y ventilados mecánicamente. AHR, evaluada mediante la comparación de las curvas de dosis-respuesta de la resistencia del sistema respiratorio (RRS) inducida por el aumento de las dosis intravenosa de acetilcolina (ACh) de cloruro de entre el simulacro y alergeno-desafió animales, se han determinado. Posteriormente, ya través de la intubación mismo, el pulmón izquierdo se lavaged modo que la enumeración diferencial de las vías aéreas se pudo realizar. Estos estudios revelan que las mediciones repetidas de la AHR y acumulación de líquido del LBA son posibles a partir de los mismos animales y que la hiperreactividad bronquial y eosinofilia vías respiratorias máximas se alcanzan en 7-10 días de iniciar la exposición al alérgeno. Esta nueva técnica reduce significativamente el número de ratones requerido para la experimentación longitudinal y se aplica a diversas especies de roedores, los modelos de la enfermedad de las vías respiratorias y los instrumentos de la fisiología.
Protocolo
Alérgenos:
- Ratones C57BL / 6, 4-8 semanas de edad, son anestesiados en una cámara de plexiglás hermético purgado con isoflurano 3,2% en la mezcla de oxígeno de vapor durante 10 minutos para conseguir una anestesia general profunda.
- Desafíos intranasal alergeno (45μL OVA (22,5 mg) y 7μL A. oryzae (7 g), en PBS) se administran todos los martes, jueves y domingos, para un total de siete aplicaciones consecutivas.
Anestesia:
- Antes de cada exposición al alérgeno, y como consecuencia del recurso séptimo, los ratones se administran una inyección intraperitoneal de 48 mg / kg de etomidato (2 mg / ml....
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Discusión
El estudio del asma y otras enfermedades pulmonar obstructiva, constituye un campo activo y en expansión de la investigación biomédica. Un componente importante del asma relacionada con la investigación experimental es la capacidad para medir los cambios en el tamaño de las vías respiratorias en diversas condiciones. Estrechamiento de las vías respiratorias excesivas en respuesta al desafío provocador, una función canónica de asma y enfermedades relacionadas con el pulmón y una propiedad de la hiperreactividad bronquial.......
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Agradecimientos
Agradecemos al Dr. W. Mintzer a la sugerencia de realizar la intubación orotraqueal de fibra óptica. Apoyado por becas U19AI070973, R01AI057696, K02HL75243 y R01HL082487 de los Institutos Nacionales de Salud.
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Materiales
Las vías respiratorias fisiología de software de medición (Rescomp) era la costumbre de preparar (Millennium Premier Group, 415-519-4371).
Los datos fueron analizados utilizando una estación de trabajo PC con Windows XP equipado con una CPU Pentium III (Intel, Inc. Santa Clara, CA) y un análogo de 17-pin de señal digital (National Instruments, # PC-LPM16).
Un animal pequeño vías respiratorias estación de trabajo fisiología era la costumbre de montar (Milenio Premier Group) con transductores de presión disponible en el mercado (parte # TRD5700 y TRD4510), módulos de preamplificación (parte # MAX2270), chasis (pieza # MAX1320, todos de Buxco Wilmington, Inc., Carolina del Norte ) y un pletismógrafo personalizado de pequeños animales.
0,5 mm de diámetro exterior de fibra óptica de hilo, conectado a la fuente de luz (Iluminador Cole Palmer, 41722 series)
Ventilador (Harvard Apparatus Ratón Ventilador, # 687)
10 mm, aguja 27ga (BD Biosciences, cat.. 309 602)
Lámpara de calor
Jeringa de 1 ml (BD Biosciences, cat.. 305 109)
4 abrazaderas (Pony 3200 abrazadera de resorte)
0,5 mm, el alambre externo para guiar la intubación
Hemocitómetro
Superfrost / más portaobjetos de microscopio (gato de Fisher. No. 12-550-15)
Shandon filtro de tarjetas (Thermo cat.. 5991022)
Diapositivas diferencial de las células mancha (gato de Fisher. No. 122911)
Microscopio óptico (Leica)
Cytospin 3 (Shandon)
Calibre 20, de 1,25 pulgadas catéteres intravenosos ProtectIV (Smith Medical)
0,5 mm de fibra óptica de polímero (Edmund Optics # NT02-532).
Referencias
- Hamelmann, E. Noninvasive measurement of airway responsiveness in allergic mice using barometric plethysmography. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 156, 766-775 (1997).
- Adler, A., Cieslewicz, G., Irvin, C. G.
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Reimpresiones y permisos
