Este protocolo muestra los métodos para la extracción de los espermatozoides desde los testículos de los machos y luego inseminar a las hembras. Este procedimiento es útil cuando el tiempo exacto que se necesita en los estudios de desarrollo, así como el trabajo transgénico.
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Artículo de método
Los espermatozoides de cosecha y la inseminación artificial de los ratones
En este artículo
Resumen
Resumen
Los roedores del género Peromyscus (ratón venado) son los mamíferos nativos más prevalente en América del Norte. Peromyscus especies se utilizan en una amplia gama de investigación, incluyendo la toxicología, la epidemiología, la ecología, comportamiento, y los estudios genéticos. Aquí un modelo útil para las manifestaciones de la inseminación artificial.
Métodos similares a los que se muestran aquí se han utilizado previamente en varios estudios el ratón venado, todavía no existe un protocolo detallado se ha publicado. Aquí se demuestra el método básico de la inseminación artificial. Este método consiste en la extracción de los testículos de los roedores, y luego aislar los espermatozoides del epidídimo y conducto deferente. El esperma maduro, ahora en una mezcla de leche, se colocan en el tracto reproductivo de la hembra en el momento de la ovulación. La fertilización se cuenta como el día 0 para el tiempo de desarrollo del embrión. Los embriones se pueden recuperar en el tiempo deseado de puntos y manipulado.
La inseminación artificial se puede utilizar en una variedad de especies de roedores en el momento exacto de embriones es crucial y difícil de obtener. Esta técnica es de vital importancia para las especies o cepas (incluyendo la mayoría de Peromyscus) que no pueden aparearse inmediatamente y / o donde el apareamiento es difícil de evaluar. Además, la inseminación artificial proporciona tiempo exacto para el desarrollo del embrión ya sea en la cartografía de progreso en el desarrollo y / o trabajo transgénico. Reducción del número de animales se pueden utilizar desde la fecundación está garantizada. Este método ha sido vital para fomentar el sistema de Peromyscus, y se espera que se benefician los demás.
Protocolo
Inseminación artificial
La inseminación artificial se utiliza en lugar de cruces naturales para aumentar las probabilidades de que todas las mujeres han de quedar embarazada. Dos hombres se utilizó para cada uno hembras superovuladas o una mujer sabe que está en celo. El epidídimo caudae de ratones machos maduros fueron colocados en una suspensión de leche 9% y el tajo con agujas de calibre 18. El esperma se les permite nadar libremente durante unos minutos y luego los epidídimos fueron tomadas de la mezcla. La suspensión se evaluó con un microscopio en busca de la confluencia y espermatozoides móviles. Un contundente calibre 22 de 1 ½ pulg....
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Agradecimientos
Me gustaría dar las gracias a Mike Dewey desde el Centro de archivo Peromyscus genética por su valiosa información, la paciencia y el conocimiento sobre la reproducción de roedores.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios | |
|---|---|---|---|---|
| Placa de Petri | Herramienta | Fisher Scientific | 08-772-30 | |
| Aguja 18 G | Herramienta | BD Biosciences | 305195 | |
| Leche en polvo | Reactivo | Cualquier proveedor | ||
| Jeringa de 1 mL | Herramienta | National Scientific Company | S7510-1 | |
| Pinzas | Herramienta | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5060 | |
| Tijeras | Herramienta | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5882 | |
| Solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco’s | Reactivo | GIBCO, by Life Technologies | 14200-075 | |
| Aguja roma de 22 G | Herramienta | Give to me |
Reimpresiones y permisos
