Recuperación de los ovocitos de ratón

Resumen

Este protocolo se muestra la técnica para la extracción de los ovocitos o embriones en estadio temprano fertilizados del oviducto de los ratones. La capacidad de identificar la infindibulum e insertar una aguja de punta roma en que es esencial para la correcta realización del procedimiento.

Resumen

Hasta la fecha, sólo unos pocos estudios han informado de manipulaciones éxito de la embriogénesis Peromyscus o la biología reproductiva. Junto con el archivo Peromyscus Centro Genético (http://stkctr.biol.sc.edu), estamos caracterizando las diferencias relevantes necesarios para desarrollar este sistema. Un objetivo principal ha sido optimizar los ovocitos / recuperación temprana del embrión.

Protocolo

Los ovocitos / embriones de recuperación

1. Al menos dos horas antes de la recuperación de ovocitos / embriones, KSOM se coloca en el 37 º C incubadora de CO ₂ y FHM se deben descongelar a partir de -20 º. Un plato de vidrio que contiene tres pozos de poca profundidad cóncava se utiliza a las caídas de la casa de KSOM en la incubadora. Para prevenir la deshidratación, la KSOM y el plato se colocan en un recipiente con tapa que tiene el agua en la parte inferior. Este aparato evita la evaporación sin el uso de aceite mineral.
   
   
2. Los oviductos de una hembra ovula se colocan en los medios de FHM. Para garantizar una orientación y un....

Discusión

En este artículo, se demuestra la recuperación de los ovocitos de la ovulación inducida (superovuladas) Peromyscus. El uso de superovulación (en comparación con el ciclo estral natural) es común debido a un número mucho mayor resultado. Sin embargo, se debe tener cuidado al interpretar los resultados de la utilización de ovocitos como / embriones, ya que tanto las hormonas utilizadas para inducir la ovulación y el cultivo puede tener efectos.

Cuando estro ha sido confirmado, las mujeres son euthenized y los oviductos se recuperó con.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Aguja de lavado	Herramienta	Zephyrtronics	ZT5-130-L	30 G roma
Pinzas (2)	Herramienta	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5060
Peromyscus	Animal	Peromyscus Genetic Stock Center
Tijeras	Herramienta	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5880
Medio tamponado con HEPES FHM	Reactivo	Specialty Media	MR-025-d
Medio de cultivo embrionario KSOM (5x 10 mL)	Reactivo	Specialty Media	MR-020P-5F
Pipeta de boca	Herramienta			Extraída de capilares de vidrio y conectada a tubo de goma
Plato para oocitos	Herramienta			Recipiente de vidrio con depresiones cóncavas