Perfiles de plástico para mantener la morfología real del tejido en secciones finas de tejido que puede ser immunostained con anticuerpos fluorescentes secundaria, lo que hace este método más útil que las secciones incluidas en parafina o congelado para muchos tipos de tejido. El método de tinción, la incorporación de plástico, y la sección se demuestra en este vídeo.
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Artículo de método
Plástico inclusión y corte de Xenopus laevis embriones
En este artículo
Resumen
Protocolo
Fijación
- La transferencia de embriones enteros o disecados en explantes MEMFA o 3,7% FA + PBS en un frasco de cristal de centelleo pequeño (gato Fisher # 03-339-25B). Incubar vial en el nutator a temperatura ambiente, sólo durante 2 horas, y no más que eso. No deje que el embrión en el FA por más de 2 horas. Ya de incubación en el FA hará que el tejido embrionario más difícil y el resultado de una pobre penetración de anticuerpos en el proceso de detección.
- Aspirar la mayor parte de FA y añadir el fijador de Dent hasta la parte superior del vial (~ 4.5ml). Invierta suavemente el vial durante un par de veces para lavar ....
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Materiales
Primaria de anticuerpos contra el antígeno o epítopo etiquetas: Hacer una dilución adecuada en PBT. Conjugado con biotina anticuerpo secundario: varios fabricantes venden conjugado con biotina anticuerpos.
Reimpresiones y permisos
