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IL-8 del ensayo:
- La mezcla de reacción fueron las siguientes cuatro componentes en 100 l de volumen final de tampón de ensayo en sus respectivas concentraciones. 10 l de bolas magnéticas con anticuerpos de captura en 100 bolas / l final de las concentraciones, 2 l de biotina IL-8 de anticuerpos en una concentración final nano-gram/μl, 1 l de proteínas fluorescentes de 20 estreptavidina concentración final nano-gram/μl, y 1 l de IL-8 blanco a 0,48 pico-gram/μl. Los componentes se añaden uno por uno para el tampón de ensayo y luego se agita durante 30 minutos.
- Una reacción de control se prepara de la misma manera sin la IL-8 blanco.
- Las reacciones son más tarde puesto sin ningún tipo de separación o etapa de lavado en las cubetas e inspeccionados con el sistema de MMB.
MMB sistema:
- Coloque la cubeta en su posición entre los dos polos electromagnéticos.
- Operar la corriente de modulación y esperar 30 segundos para permitir la agregación y la condensación de las cuentas
- Medir la señal del amplificador lock-in con un osciloscopio.
Los resultados representativos:
La inspección visual de las cuentas agregadas presenta una clara diferencia entre la reacción con el objetivo y la reacción, sin el objetivo. En todas las reacciones con el objetivo, el exceso acumulado un agregado único y denso que se movía dentro y fuera del haz de láser de una manera unirse. Sin embargo, en toda la reacción sin que el objetivo, las cuentas fueron menos agregados y su movimiento se unen menos (ver Figura 1).
Figura 1: la inspección visual de inmunoensayo sándwich "(a) sin el objetivo de IL-8 (b) Con el objetivo de IL-8.
El reloj de modulación polo (amarillo) y la señal de salida PMT (magenta), mientras que la detección de pico 0,48 gramos de IL-8 blanco se presenta en la Figura 1 (a). La modulación de frecuencia para cada polo está a 2 Hz. Sin embargo, como era de esperar teóricamente, cuando las perlas pasar el rayo láser, el PMT detecta la luz fluorescente y hay un pico en la tensión de salida PMT. Por lo tanto, la frecuencia de demodulación es de 4 Hz. Cuando la señal de la tensión premenstrual y el reloj se duplicó de modulación (4 Hz) se introducen en la cerradura en el amplificador, el detector de fases detecta la sincronización y los resultados con alto voltaje (ver Figura 2).
Figura 2: (a) el reloj de modulación (amarillo) y la señal de PMT (magenta) cuando la detección de pico 0,48 gramos de IL-8 blanco. (B) El bloqueo del resultado de la tensión del amplificador en dos análisis diferentes.
El bloqueo del amplificador no detectó ninguna señal de que la muestra de control se puso a prueba. Este hecho, junto con la diferencia visual en la agregación sugiere que el sistema MMB puede identificar claramente la presencia de IL-8 blanco.