Bimolecular complementación de fluorescencia (BiFC) Ensayo de interacción proteína-proteína en las células de cebolla con la pistola de genes Helios

Summary

Este artículo muestra cómo utilizar correctamente el BioRad Helios pistola de genes para introducir ADN plásmido en las células epidérmicas de cebolla y la forma de prueba para las interacciones proteína-proteína en las células de la cebolla basa en el principio de fluorescencia de Complementación bimolecular (BiFC)

Abstract

Investigación de la función de genes en diversos organismos se basa en el conocimiento de cómo los productos de los genes interactúan unos con otros en su ambiente celular normal. La complementación bimolecular de fluorescencia (BiFC) Ensayo

Protocol

I. plásmido preparación

El ADN plásmido utilizado para el bombardeo debe ser de gran pureza y una concentración de 500ng/μl o mayor. Para BiFC que participan dos construcciones de plásmidos, 25 mg de cada plásmido se necesita. En otras palabras, una relación de 1:1 molar de los dos plásmidos se mezclan para dar lugar a 50 ug de plásmido ADN total de la preparación de los cartuchos. Tenga en cuenta que la adición de más de 50 mg de ADN puede causar la aglomeración de las partículas de oro y deben ser evitados. Kits comerciales de extracción de ADN plásmido se recomiendan para el aislamiento de ADN de plásmido.

Ve....

Discussion

1. Para los usuarios de primera vez, se recomienda la práctica de todo el procedimiento, desde la preparación del cartucho a la observación, con un único plásmido reportero constitutiva como 35S:: GFP o 35S:: GUS. Se utilizó un 35S:: GFP plásmido obtenido de los Dres. Steve Monte y Zhang Xiaoning ⁶ (Figura 1 A, D). Los cartuchos de inyección de genes de control en la venta RioRad (Cat. 165-2244) no son adecuados para las plantas.
2. Para BiFC, un control positivo es necesario, que debe constar de dos socios conocidos que.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cebolla amarilla	Cualquier proveedor
Helios Gene Gun	Bio-Rad
Microscopio fluorescente con filtros adecuados para GFP o YFP	Zeiss, Nikon, Olympus