El protocolo siguiente se describe el proceso de disección del páncreas para obtener imágenes de corte virtual, y la posterior cuantificación de todas las buenas prácticas agrarias de etiquetado de las células beta en el páncreas.
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Artículo de método
En la cuantificación in situ de las células beta pancreáticas misa en ratones
En este artículo
Resumen
Resumen
Seguimiento de los cambios de las poblaciones de células específicas en materia de salud y la enfermedad es un objetivo importante de la investigación biomédica. El proceso de monitoreo de páncreas de las células beta del islote proliferación y el crecimiento es particularmente difícil. Hemos desarrollado un método para capturar la distribución de las células beta en el páncreas intacto de ratones transgénicos con fluorescencia marcado las células beta con una macro escrita para ImageJ (rsb.info.nih.gov / ij /). Después de la disección del páncreas y la limpieza de tejidos, todo el páncreas se captura como una rebanada virtual, después de que la GFP-etiquetados células beta son examinados. El análisis incluye la cuantificación del total de las células beta del islote número de área, y distribución de tamaño con respecto a los parámetros y lugares específicos para cada islote y para pequeños grupos de células beta. Toda la distribución de los islotes se pueden trazar en tres dimensiones, y la información de la distribución del tamaño y la forma de cada islote permite una comparación cuantitativa y cualitativa de los cambios en el total de superficie de las células beta de un vistazo.
Protocolo
Parte 1: Preparación de Muestras
- Coloque un ratón bajo un microscopio de disección, extirpar el páncreas completo junto con el duodeno y el bazo están todavía atadas, y colocar los órganos en una placa de vidrio previamente pesado. Quitar el duodeno mediante la reducción de su tejido conectivo en el lado donde se une con el páncreas. Cortar y extirpar el bazo y el exceso de grasa en el páncreas hasta que el páncreas está completamente aislado en la diapositiva. (Grasa de páncreas se distingue por su color blanco, como se diferencian por el color ligeramente más oscuro y curtidor de tejido pancreático.)
- Coloque un cubreobjetos (cubierta de cristal....
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Discusión
El análisis de las imágenes rebanada virtual de los islotes y las agrupaciones de las células beta en el páncreas intacto proporciona una visión a gran escala de toda la distribución de los islotes. Evolución y los cambios en la distribución de los islotes total en el tiempo por lo tanto pueden ser estudiados y comparados. Un ejemplo se demuestra en el análisis de la formación de los islotes pancreáticos (1). Un análisis completo de páncreas ratones recién nacidos en distintos momentos (P1-P21) ha demostrado que los isl.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
El estudio está respaldado por EE.UU. Servicio de Salud Pública de subvención DK-081527, 072473-DK y DK-20595 de la Universidad de Chicago Diabetes Research and Training Center (Animal principales modelos), y un regalo de la Fundación de la Familia Kovler.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Pinzas | Miltex Inc. | ||
| Tijeras | F.S.T. | 14001-13 | 01n2 |
| Tijeras | F.S.T. | 14072-10 | 02s5 |
| Portaobjetos de vidrio grande | Electron Microscopy Sciences | 71862-01 | 75x51x1.2mm |
| Cubreobjetos grande | Ted Pella, Inc. | 260462 | 50x75mm |
| Portaobjetos | Fisher Scientific | 12-550-15 | 25x75x1.0mm |
| Cubreobjetos | Fisher Scientific | 12-458-5M | 75x25mm |
| Cubreobjetos | Erie Scientific | 25mm círculo | |
| Microscopio fluorescente | Olympus Corporation | ||
| Microscopio de disección | Olympus Corporation | ||
| Stereo Investigator | MBF Bioscience | ||
| Ratones MIP-GFP | Jackson Laboratory |
Referencias
- Miller, K., Kim, A., Kilimnik, G., Moka, U., Jo, J., Periwal, V., Hara, M. Islet formation during the neonatal development in mice. PloS One. 4, E7739-E7739 (2009).
- Kilimnik, G., Kim, A., Jo, J., Miller, K., Hara, M. Quantification of pancreatic islet distribution in situ in mice. ....
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Reimpresiones y permisos
