Cuantitativa en tiempo real PCR (QRT-PCR) es una herramienta eficaz para el diagnóstico de los niveles de mRNA en tejidos de insectos y diferentes etapas de desarrollo. En este informe se muestra el uso de QRT-PCR para determinar los niveles de ARNm en diferentes tejidos y estadios de desarrollo larvario de las especies de insectos invasores, el barrenador esmeralda del fresno.
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Artículo de método
Análisis de la expresión génica en el barrenador esmeralda del fresno ( Agrilus planipennis) Utilizando Real-PCR cuantitativa en tiempo
En este artículo
Resumen
Resumen
Barrenador esmeralda del fresno (EAB,
Protocolo
El protocolo completo con las diferentes etapas se ilustra en el diagrama de flujo en la Figura 1. Medidas individuales que constituyen la disección, extracción de ARN, la síntesis de cDNA primer lugar y QRT-PCR se detallan a continuación.
I. La disección de larvas
- Antes del inicio de este procedimiento, el lugar barrenador esmeralda del fresno, o BEF, las larvas de un pañuelo de papel húmedo hasta que se llevan a cabo disecciones. Mantenga fresco fosfato preparado 1X solución salina tamponada, o PBS, en el hielo para mantener frío el buffer a través de la disección.
- Para empezar, fijar las larvas de EAB en la placa d....
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Discusión
Los ciclos de umbral (Ct) se obtiene el valor de cada muestra en la placa de QRT-PCR. Para la toma de la curva estándar, el valor de Ct obtenidos para cada dilución se traza contra el registro de su concentración. Los valores de Ct de las muestras experimentales se trazaron en esta curva de dilución estándar de la serie. Cantidades de destino se calcula a partir de separar las curvas de calibración generadas para cada tejido es decir, la experimentación y expresión del desarrollo. Los valores relativos de expresión (rev.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Reconocemos la ayuda proporcionada por Lourdes Delta Arrueta Antequera (Departamento de Entomología, Universidad Estatal de Ohio / OARDC, Wooster, OH) en la configuración de los experimentos. Agradecemos a la Dra. Teresa Polonia (USDA, Servicios Forestales, NRS) para enviar muestras de larvas de EAB. Ayuda proporcionada por el Dr. Luis A. Cañas y Nuris M Acosta con la configuración de microscopio se aprecia. La financiación de este proyecto fue proporcionado por fondos estatales y federales asignados a la Ohio Investigación y Desarrollo Agrícola del Centro, The Ohio State University.
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Referencias
- Lehane, M. J. Peritrophic matrix structure and function. Annu Rev Entomol. 42, 525-550 (1997).
- Mittapalli, O., Sardesai, N., Shukle, R. H. cDNA cloning and transcriptional expression of a peritrophin-like gene in the Hessian fly, Mayetiola dest....
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Reimpresiones y permisos
