Generación de mamósferas primarias: una técnica para determinar la potencia celular

Resumen

Fuente: Lombardo et. al., Ensayo de formación de mamósfera a partir de tejidos y líneas celulares de cáncer de mama humano. J. Vis. Exp. (2015).

Este video describe el aislamiento de células madre cancerosas de líneas celulares de cáncer de mama. Cultivamos estas células madre cancerosas para generar mamósferas primarias para evaluar la autorrenovación y calcular la eficiencia de formación de esferas, lo que permite la comparación entre diferentes densidades de siembra.

Protocolo

1. Generación de Mamósferas Primarias a partir de Líneas Celulares de Cáncer de Mama Humano

NOTA: Realice los siguientes pasos bajo una campana de cultivo estéril.

1. Prepare Mammosphere Media que contenga DMEM/F12 suplementado con 2 mM de L-glutamina, 100 U/ml de penicilina, 100 U/ml de estreptomicina. Prepare el medio completo inmediatamente antes de usar añadiendo 20 ng/ml de factor de crecimiento epidérmico humano recombinante (EGF; Sigma), 10 ng/ml de factor de crecimiento básico de fibroblastos humanos recombinantes (bFGF; R&D Systems) y 1x suplemento B27.
2. Aspire los medios de un matraz que contenga....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
DMEM/F12	Lonza	CC-3151
2 mM de L-glutamina	Sigma Aldrich	G8540
100 U/ml de penicilina y estreptomicina	Sigma Aldrich	P4083
20 ng/ml Factor de crecimiento epidérmico humano (EGF) recombinante	Sigma Aldrich	E9644
20 ng/ml Factor de crecimiento básico de fibroblastos humanos recombinantes (bFGF)	Sistemas de investigación y desarrollo	233-FB-025
1x suplemento de B27	Invitrogen	17504-044
Solución salina tamponada con fosfato (PBS)	Termo Científico	12399902
0,5% tripsina/0,2% EDTA	Sigma Aldrich	59418C
Suero fetal de ternera	Primer enlace Reino Unido	02-00-850
Azul de tripano	Sigma Aldrich	93595
Placas de 6 pocillos de fijación baja	Corning	CLS3814