Inyección intraductal: administración de la mezcla inyectable en los conductos de la glándula mamaria del ratón

Resumen

Fuente: Xiang, D., et al. Modelando el cáncer de mama mediante una inyección intraductal de adenovirus que expresa Cre en la glándula mamaria del ratón. J. Vis. Exp (2019).

Este vídeo describe una técnica de inyección intraductal en la que administramos mezcla inyectable en los conductos de las glándulas mamarias de ratón.

Protocolo

1. Inyección intraductal

1. Utilizar técnicas asépticas durante todo el procedimiento quirúrgico.
2. Realice una incisión en el sitio de la piel a una longitud de ~ 1 cm entre los dos cuartos MG inguinales (Figura 1). Separe cuidadosamente el colgajo de piel (con el MG) del peritoneo parietal para visualizar el árbol ductal mamario.
3. Sujete con cuidado el pezón con pinzas de relojero y retire el pezón exterior sin cortar la piel cercana, utilizando una tijera de microdisección.
4. Cargue ~3–5 μL de mezcla inyectable de Ad-Cre en una jeringa Hamilton de 25 μL con una aguja de cubo metálico de 33 G adherida. Calcule el volumen de la mezcla inyectable en la jeringa basándose en el colorante azul incluido en la mezcla.
   nota: Use un volumen menor (p. ej., 3 μL) cuando inyecte en MG de hembras de 3 a 4 semanas de edad y un volumen mayor (p. ej., 10 μL) cuando inyecte en MG de hembras lactantes.
5. Sujete suavemente el borde del colgajo de piel con una pinza curva fina e inyecte lentamente la mezcla inyectable de Ad-Cre en el pezón, mientras controla la propagación del tinte azul en el árbol ductal mamario. Mantenga la tasa de inyección lo más baja posible para evitar daños en el lumen ductal.
   nota: El líquido inyectado (como lo ilustra el colorante azul de bromofenol incluido) que se extiende por todo el árbol ductal sin filtrarse en el compartimento estromal indica una inyección intraductal exitosa.
6. Retire suavemente la aguja de la tetina para evitar cualquier fuga del líquido inyectado.
7. Examine el lado distal (es decir, lejos del pezón) del MG o el área circundante del pezón inyectado. Tenga en cuenta que la hinchazón del tinte azul (es decir, el tinte que se difunde en el estroma cercano) indica una inyección de almohadilla de grasa mamaria en lugar de una inyección intraductal exitosa.
8. Cierre las heridas quirúrgicas (a partir de 1.2) en la piel con clips para heridas.

2. Cuidados postoperatorios

1. Retire el ratón de la anestesia y colóquelo en una almohadilla térmica dentro de una jaula limpia para su recuperación.
2. Administrar meloxicam por vía subcutánea a 5 mg/kg de nuevo, 24 h después de la cirugía.
3. Monitoree las condiciones generales del animal y busque signos de infección en el sitio de la incisión durante 5 días.
4. Los clips para heridas se retiran ~ 7-10 días después de la cirugía.

Resultados

Figura 1: Diagrama esquemático de la inyección intraductal del virus Ad-Cre en un MG.(A) Sitio de la incisión en la línea media entre los dos cuartos MG. (B) Inyección intraductal de Ad-Cre con un tinte azul (para una mejor visualización) en uno de los cuartos MG. (C) Cierre de la incisión en la piel mediante clips para heridas

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Aguja de calibre 33	Hamilton	7803-05	Estilo de punto 3 romo
Clip réflex de 7 mm	Braintree Científico	RF7 CS
Adenovirus Ad-K5-CRE	Núcleo de vector viral de la Universidad de Iowa	Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547)
Adenovirus Ad-K8-CRE	Núcleo de vector viral de la Universidad de Iowa	Ad5mK8-nlsCre
Azul de bromofenol	Sigma-Aldrich	B0126-25G
Jeringa Hamilton	Hamilton	7636-01	0,025 mL
Tijeras de microdisección	Pentair	9M	Pinza de relojero
Pinzas de microdisección	Dumont	M5