Administración intrabronquial: técnica para administrar un agente experimental de forma selectiva en un pulmón de ratón

Resumen

Fuente: Liao, S. et. al. Administración intrabronquial directa para mejorar la deposición selectiva de agentes en el pulmón de ratón. J. Vis. Exp. (2019).

Este video describe un enfoque intrabronquial para administrar un agente experimental de forma selectiva en el pulmón distal derecho e izquierdo. En el protocolo presentado, administraremos bleomicina por vía intrabronquial en un ratón para obtener un mejor modelo de fibrosis pulmonar.

Protocolo

Todos los procedimientos relacionados con animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Abordajes no quirúrgicos de intubación y parto de IB

1. Abordaje IB de la canulación lobar selectiva del pulmón derecho distal
   1. Después de realizar la canulación intratraqueal (IT) (use la mano dominante para intubar el catéter extendido en la tráquea a través de la cavidad oral), gire la tabla de plástico +30° (Figura 1A).
   2. Sostenga el cubo del catéter y guíelo naturalmente en paralelo a la línea media del ratón, extendiéndolo a profundidades basadas en el peso, como se describe en la Tabla 1.
      nota: Hay que tener en cuenta la resistencia a estas profundidades. En este punto, el ratón se volverá ligeramente taquipneico, como se explica en los resultados representativos. Para un operador experimentado, aproximadamente el 90% de los intentos lograrán canular el pulmón derecho (con taquipnea observada).
   3. Administre 20 μL de tinte azul Evans al 0,3 % (EBD, consulte la tabla de materiales) con una punta de carga de gel.
   4. Dispensar 1-2 alícuotas (0,1 ml cada una) de aire utilizando el gotero de vidrio.
      nota: Esto asegura la eliminación de la solución residual de EBD (o agentes experimentales) desde el interior del catéter.
   5. Retire el catéter y, a continuación, mantenga la posición del ratón durante 30 s.
   6. Coloque al animal sobre una manta térmica hasta que recupere la conciencia. Por lo general, la recuperación se completa en 2 minutos.
2. Abordaje IB para la canulación segmentaria selectiva del pulmón izquierdo distal
   1. Después de realizar la canulación IT (use la mano dominante para intubar el catéter extendido en la tráquea a través de la cavidad oral), gire la tabla de plástico -74° (Figura 1B).
   2. Sostenga el cubo del catéter y aplique una presión suave para avanzar el catéter hacia el bronquio principal izquierdo, mientras ejerce una presión moderada tanto hacia abajo (90°) como hacia el extremo del libro. A las profundidades indicadas en la Tabla 1, el operador debe notar resistencia a medida que los segmentos inferiores del pulmón izquierdo están comprometidos. Si se produce taquipnea, retire el catéter a la posición de 20 a 25 mm y vuelva a intentarlo.
   3. Después de canular los segmentos pulmonares inferiores izquierdos, se requiere un cambio de posición para permitir la asistencia gravitacional para la administración del agente. Gire la tabla de plástico -30° (Figura 1B).
   4. Suministra 40 μL de 0,3% EBD con una punta de carga de gel.
      nota: Es factible administrar un mayor volumen de agente porque el pulmón izquierdo tiene un solo lóbulo.
   5. Dispensar 1-2 alícuotas (0,1-0,3 mL cada una) de aire utilizando los goteros de vidrio.
      nota: Esto asegura la eliminación de cualquier EBD residual (o agentes experimentales) del interior del catéter.
   6. Retire el catéter y, a continuación, mantenga la posición del ratón durante 30 s.
   7. Coloque al animal sobre una manta térmica hasta que recupere la conciencia. Por lo general, la recuperación se completa en 2 minutos.

Resultados

Figura 1: Abordaje para la canulación y administración selectiva del lóbulo pulmonar derecho/izquierdo.(A) Para dirigirse al pulmón derecho, la tabla de plástico se gira +30°, lo que mejora la facilidad de acoplar selectivamente el bronquio principal derecho. El catéter está avanzado (según las distancias propuestas en la Tabla 1

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Catéter intravenoso blindado de 22 G	Bd	381423
Tinte azul Evans	Sigma-Aldrich	E2129
LED-30W Fibra Óptica Luces de Cuello de Cisne Dual Iluminador de Microscopio	AmScope (en inglés)	LED-30W
Aguja Precisionglide, 18G x 1"	Bd	305195	Punta biselada, 12 mm de longitud