Microarray de anticuerpos: una técnica para estudiar la expresión proteica de células de cáncer de pulmón tratadas con miRNA

Abstract

Fuente: Hossian, A. et. al. Análisis de tratamientos combinatorios de miRNA para regular el ciclo celular y la angiogénesis. J. Vis. Exp. (2019).

Este video describe la técnica para estudiar la expresión de proteínas en células de cáncer de pulmón transfectadas con miRNA mediante el uso de microarrays de anticuerpos para medir la expresión génica específica. En el protocolo presentado, realizamos microarrays de anticuerpos para la identificación de la actividad de un tratamiento combinatorio con miRNA en la detención del ciclo celular y la angiogénesis.

Protocol

1. Transfección de miR-143 y miR-506

>PRECAUCIÓN: Utilice guantes de látex, gafas protectoras y una bata de laboratorio mientras realiza los experimentos descritos. Cuando sea necesario, utilice la cabina de bioseguridad con el ventilador del armario encendido, sin bloquear las vías respiratorias ni perturbar el flujo de aire laminar. Coloque siempre la ventana de vidrio protectora a la altura adecuada, según lo descrito por el fabricante.

1. Siembre células NSCLC A549 en un matraz T25 cm2/placa de pocillos 6/96 pocillos en medio DMEM/F12K suplementado con 10% de FBS y 1% de penicilina-estreptomicina (med....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
A549 Células de cáncer de pulmón de células no pequeñas	ATCC	ATCC CCL-185
Penicilina-estreptomicina 10/10	Antlanta Biologicals	B21210
Suero fetal bovino (FBS)	Fisher Científico	10438026
Kit de ensayo de matriz de anticuerpos, 2 reacciones	Biografía de Luna Llena	KAS02
Matriz de anticuerpos para el ciclo celular, 2 portaobjetos	Biografía de Luna Llena	ACC058
ScanArray Express	PerkinElmer		Paso 2.33: Software de análisis de microarrays
Solución salina tamponada con fosfato HyClone (PBS)	Fisher Científico	SH30256FS
Ensayo de proteínas BCA Thermo Scientific Pierce	Termo Científico	PI23226