Aislamiento de exosomas: una técnica para separar exosomas del plasma de pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas

Resumen

Fuente: Giallombardo, M., et al. Análisis de miARN exosomal en plasma de pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas (CPCNP) mediante qPCR: una herramienta factible de biopsia líquida. J. Vis. Exp.(2016).

Los exosomas aislados en plasma se pueden utilizar como una forma no invasiva y repetible para la detección y el seguimiento de los biomarcadores para la detección temprana y la progresión de la enfermedad. Este vídeo describe el protocolo para la separación de exosomas de las muestras de plasma de pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas, que podría utilizarse para extracciones de ADN y proteínas.

Protocolo

1. Aislamiento de exosomas

>Nota: El aislamiento de exosomas a partir de muestras de plasma, se realizó con un kit comercial, de acuerdo con el protocolo del fabricante y añadiendo tratamiento con ARNasa: (todos estos pasos deben realizarse con equipos de protección personal y ambiental y siguiendo el procedimiento legal específico para la manipulación de muestras biológicas).

1. Tome 1 ml de plasma de cada muestra, almacenada a -80 °C, y colóquela en hielo.
2. Centrifugar la muestra a 2.000 × g durante 20 min en RT; este paso es obligatorio para eliminar las células y los residuos.
3. Transfiera el so....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Kit de aislamiento total de exosomas (a partir de plasma)	Invitrogen	4484450	Usar el tratamiento con proteinasa K
Ribonucleasa A	Sigma-Aldrich	R4875-100MG
RNAspin Illustra mini kit 50	GE HealthCare	25-0500-71

(en inglés)