PECES DE ADN 3D: una técnica para localizar un gen específico en un cromosoma

En este artículo

Resumen

Fuente: Gallerani, G. et.al. Caracterización de células tumorales utilizando un cable médico para capturar células tumorales circulantes: un enfoque 3D basado en inmunofluorescencia y ADN FISH. J. Vis. Exp. (2017).

El aislamiento y caracterización de las células tumorales circulantes (CTC) de la sangre de pacientes con cáncer es un tipo de biopsia líquida no invasiva y se asocia con recaída y progresión de la enfermedad. Este video describe la técnica de hibridación fluorescente in situ de ADN (DNA FISH) en CTC capturadas en un cable médico, para estudiar un gen específico de interés.

Protocolo

1. 3D DNA-FISH Día 2

>PRECAUCIÓN: Se debe prestar especial atención a la alta temperatura de los instrumentos y a la cámara húmeda.

Configure el horno de hibridación y el horno de calor seco (~ 3 h antes de iniciar el protocolo DNA-FISH). Ajuste el horno de hibridación a 75 °C, ajuste el horno de calor seco a 37 °C y enfríe la solución de SSC 0,4× (pH = 7,0 ± 0,1) a 4 °C.
nota: El estado del pH de los tampones FISH es crítico y debe ser de 7,0 ± 0,1.
Lave el alambre 3 veces en una solución SSC de 0,4× helada.
nota: Mantenga el alambre en l....

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Resultados

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Figura 1: Alambre funcionalizado, disposición esquemática de las sondas de ruptura de ALK, esquema de patrones esperados de reorganización de ALK y soporte especial.(a) Las cajas rojas resaltan las tres partes principales del alambre: punta funcionalizada, tope de cable y punta no funcionalizada. La punta funcionalizada es la parte más delicada del alambre y no debe .......