Centrifugación en gradiente de densidad: un método para aislar células de LLC de sangre periférica

Abstract

Fuente: Hay, J. et al. Fraccionamiento subcelular de células de leucemia linfocítica crónica primaria para monitorear el tráfico de proteínas nucleares/citoplasmáticas. J. Vis. Exp. (2019).

Este video describe la técnica para aislar las células de leucemia linfocítica crónica (LLC) de la sangre periférica. Con este protocolo, aislaremos células de LLC de muestras de sangre de pacientes humanos para la posterior generación eficiente de fracciones nucleares y citoplasmáticas.

Protocol

1. Aislamiento de células de LLC a partir de muestras de sangre de pacientes

1. Las muestras de sangre periférica de pacientes con LLC previamente consentidas se reciben de la clínica en tubos de recolección de sangre con EDTA, acompañadas del recuento de glóbulos blancos (WCC). Purificar las muestras de CLL de sangre periférica según el CMI. Para WCC < 40 x 10⁶ células/mL, continúe con el paso 1.1.1; para WCC ≥ 40 x 10⁶ células/mL, continúe con el paso 1.1.2.
   1. Vierta el contenido de todos los tubos de sangre de EDTA en un tubo centrífugo cónico de 50 ml y agregue 50 μl de cóctel de enriquecimiento de células B humanas por 1 m....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tubo de 15 mL	Griener Bio uno	188271
Tubos de microcentrífuga de 1,5 mL	Griener Bio uno	616201
Dmso	sigma	D2650
EDTA	sigma	Eds
Suero Fetal Bovino	Termopescador	10500064
Medios de gradiente de densidad Histopaque1077	sigma	H8889
Solución de Trypan Blue	Termopescador	15250061
Tabletas PBS	Fisher Científico	BR0014G
RosetteSep Cóctel de enriquecimiento de células B humanas	Tecnologías de células madre	Año 15064
Sigma 3-16P	SciQuip		centrífuga