Preparación de fracciones subcelulares a partir de células leucémicas: un método para generar fracciones celulares y nucleares a partir de células leucémicas

Resumen

Fuente: Hay, J., et al. Fraccionamiento subcelular de células de leucemia linfocítica crónica primaria para monitorear el tráfico de proteínas nucleares/citoplasmáticas. J. Vis. Exp. (2019).

Este video describe la preparación de fracciones subcelulares a partir de células leucémicas, que es un método para generar fracciones celulares y nucleares a partir de células leucémicas. Las fracciones nuclear y citoplasmática se pueden utilizar para análisis posteriores.

Protocolo

1. Preparación de fracciones subcelulares a partir de células CLL

NOTA: Al planificar la configuración experimental, incluya un pocillo de células no estimuladas/no tratadas a partir de las cuales se pueda generar el extracto celular completo.

1. Realizar la estimulación y/o el tratamiento farmacológico deseado de la línea celular de LLC MEC1 o de las células primarias aisladas de LLC utilizando 10 – 20 x 10⁶ células/condición. A continuación, las células se utilizarán para el fraccionamiento subcelular o para generar un extracto de célula entera, como se explica a continuación:
2. Prepara....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Tubos de microcentrífuga de 1,5 mL	Griener Bio uno	616201
EDTA	sigma	Eds
Labnet VX100	Fisher Científico		vórtice
Kit de Extracto Nucelar	Motivo activo	40010
Tabletas PBS	Fisher Científico	BR0014G
Sigma 3-16P	SciQuip		centrífuga
Sigma 1-15PK	SciQuip		centrífuga