Cosecha de médula ósea de la extremidad trasera del ratón

Resumen

Fuente: Zhu, Y. P., Padgett, et al. Preparación de médula ósea completa para el análisis por citometría de masas de células de linaje de neutrófilos. J. Vis. Exp. (2019).

Este video describe un protocolo detallado para aislar médula ósea entera fresca de las extremidades traseras del ratón para investigar defectos completos de la MO en pacientes con trastornos sanguíneos como la leucemia.

Protocolo

1. Cosecha de médula ósea de ratón (BM)

1. Compre ratones C57BL/6J de un proveedor comercial. Aliméntelo con la dieta estándar de comida para roedores y colóquelo en jaulas de microaisladores en una instalación libre de patógenos.
2. Utilice ratones machos, de 6 a 10 semanas de edad, con fines experimentales. Eutanasia por inhalación de CO₂ seguida de la luxación cervical.
3. Coloque el ratón sobre una almohadilla quirúrgica estéril con el abdomen hacia arriba. Esterilizar la piel del abdomen y la zona de las extremidades traseras pulverizando etanol al 70%. Use un par de tijeras quirúrgicas de disección para abrir la cavidad abdominal.
4. Retire la piel para exponer las extremidades traseras. Use un par de pinzas de vendaje de punta roma para sostener la tibia del ratón justo debajo del tobillo. Use otro par de pinzas de vendaje curvadas para estabilizar la tibia por debajo de las pinzas de vendaje de punta roma. Rompa la tibia y exponga el hueso arrancando el músculo con las pinzas de vendaje de punta roma.
   nota: La tibia está unida sin apretar a la articulación de la rodilla y se puede extraer fácilmente con las pinzas de vendaje de punta roma.
5. Coloque la tibia en frío 1x PBS.
6. A continuación, mueva las pinzas de vendaje curvo estabilizador hacia abajo hasta el fémur. Deslice las pinzas de vendaje de punta roma por debajo de la articulación de la rodilla y sostenga la rótula. Disloque la rótula tirando suavemente de ella hacia arriba. Exponga el fémur arrancando el músculo unido a la rótula. Sostenga el fémur expuesto con las pinzas de vendaje curvadas y corte el fémur desde la parte inferior del hueso con unas tijeras quirúrgicas de disección.
7. Coloque el fémur en frío 1x PBS.
8. Haga un agujero en el tubo de microcentrífuga de 0,5 ml con una aguja de 18 G.
9. Coloque la tibia y el fémur en el mismo tubo de microcentrífuga de 0,5 ml con el extremo abierto de los huesos hacia abajo hacia el orificio.
10. Coloque el tubo de 0,5 mL que contiene la tibia y el fémur en un tubo de microcentrífuga de 1,7 mL.
11. Haga girar los tubos de doble capa que contienen la tibia y el fémur a 5.510 x g durante 30 s en la microcentrífuga.
12. Asegúrese de que el BM se extraiga de los huesos y se pegue en el fondo del tubo. Mezcle el tubo de 0,5 ml que contiene los huesos sagrados. El BM del ratón está listo para los siguientes pasos.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Ratón: C57BL/6J	El Laboratorio Jackson	N.º de inventario: 000664
Solución salina tamponada de fosfato HyClone	GE Ciencias de la vida	Gato#SH30256.01