Todos los procedimientos que involucran participantes humanos se han realizado de acuerdo con las directrices institucionales, nacionales e internacionales para el bienestar humano y han sido revisados por la junta de revisión institucional local.
1. Aspiración de médula ósea y preparación de muestras
- Preparación del paciente y del material
- Llene una o dos jeringas de 10 ml con lidocaína al 1% con una aguja de calibre 16. Reemplace la aguja por una aguja de calibre 21.
- Coloque dos gotas de EDTA al 5% en un cristal de reloj.
- Coloque portaobjetos de vidrio (n = 15 con numeración y fecha de pacientes consistentes) para las preparaciones del frotis.
- Coloque al paciente en posición de decúbito lateral. Localice la espina ilíaca posterior superior y marque con pluma.
nota: En general, la espina ilíaca posterior superior se localiza a una anchura de una mano distal a la cresta ilíaca y una anchura de mano lateral a la línea media. En las mujeres, la columna vertebral real puede ser un poco más lateral, en algunos hombres un poco más medial.
- Desinfecte la piel con clorhexidina al 0,5-1% en etanol desde el área de biopsia prevista hacia afuera en círculos.
- Abra el paquete de guantes estériles, póngase los guantes estériles y coloque el paquete sobre la mesa para crear un campo estéril. Abra el envase con la aguja de aspiración y colóquelo sobre el campo estéril.
- Infiltrado de la piel y del tejido subcutáneo y finalmente del periostio. En el periostio, administrar la lidocaína de tal manera que se haya anestesiado un área de 1 cm de diámetro.
nota: La administración adecuada de lidocaína en el periostio es uno de los factores más importantes para la comodidad del paciente. Pruebe si el periostio ha sido anestesiado adecuadamente golpeando el lugar previsto para la biopsia con la aguja introducida y pregunte si el paciente siente algún dolor. De nota: Los niños están completamente anestesiados durante todo el procedimiento.
- Sostenga la aguja de aspiración (15 Ga x 2.8") con el extremo proximal en la palma y el dedo índice contra el lado del eje metálico de la aguja cerca de la punta; esta posición permite un mejor control.
- Introduzca la aguja con un movimiento giratorio (alternando rápidamente el movimiento pronador/supinante) a través de la piel hacia la espina ilíaca y ponga la aguja en contacto con la espina ilíaca posterior.
- Asegúrese de que la aguja se introduzca en el área anestesiada del periostio; el paciente debe sentir solo presión y no dolor. Si el paciente siente dolor, vuelva a colocar la aguja o administre más lidocaína.
- Con una presión suave pero firme, avance la aguja mientras la gira con un movimiento alterno en el sentido de las agujas del reloj y en el sentido contrario a las agujas del reloj. La entrada en la cavidad medular generalmente se detecta por una disminución de la resistencia.
- Retira el estilete de la aguja. Coloque una jeringa vacía de 10 ml en la aguja.
- Aplique presión negativa retirando el émbolo de la jeringa con un tirón suave. Advierta al paciente que puede sentir una sensación de calambre y dolor cuando se aspira la médula. Si no se liberan suficientes espículas de médula ósea, se debe realizar otra aspiración con una extracción rápida. La mayoría de las espículas estarán en los primeros 1-2 mL obtenidos de la extracción inicial. Aspire solo 1-2 mL para evitar diluir la muestra.
nota: La dilución dará lugar a la hemodilución y puede confundir los resultados de la ERM.
- Retire la jeringa y vuelva a colocar el estilete en la aguja de aspiración. Expulse parte de la médula en un cristal de reloj y el resto en un tubo de 8 mL recubierto de heparina.
nota: Invierta cada tubo inmediatamente después de colocar el aspirado de médula en el tubo de muestra para asegurar una anticoagulación adecuada. La coagulación de la médula ósea suele ser la causa de material inadecuado. Se puede aspirar médula ósea adicional desde el mismo punto, pero preferiblemente, la aguja avanza 5-10 mm antes de tomar un nuevo aspirado. Preferiblemente, no se deben tomar más de 2 dibujos por nivel de inserción. Asegúrese de marcar los tubos con números crecientes que representen el primer, segundo y/o sorteos consecutivos. Es regla común utilizar el primer sorteo para el análisis diagnóstico más relevante.
- Alternativamente, retraiga la aguja del lugar de inserción y vuelva a introducirla en la cavidad de la médula ósea a unos milímetros del lugar de inserción original y repita el procedimiento><.
nota: No aspire más de 1-2 ml por tirón, para evitar una contaminación significativa de la sangre.
- Repita tantas veces como sea necesario el material. Cuando se aspire suficiente material para el protocolo de estudio clínico específico, retire la aguja de médula ósea.
nota: En el caso de aspiraciones de médula ósea lentas o difíciles, puede ser útil el uso de jeringas que se lavaron previamente con anticoagulante. En el caso de una punción seca, realizar una biopsia de trépano que esté fuera del alcance de este manuscrito.
>2. Preparación de frotis para el examen morfológico
- Para una evaluación morfológica óptima, seleccione las espículas (por ejemplo, con una espátula de plástico) del aspirado en el cristal del reloj y colóquelas en un portaobjetos de vidrio.
- Coloque suavemente otro portaobjetos de vidrio sobre el portaobjetos con la médula y deslícelo suavemente; evite cualquier presión.
nota: Solo en el caso de espículas de médula ósea muy grandes, se puede ejercer una ligera presión, para disminuir el grosor de la propagación celular. El procedimiento se beneficia de la ayuda de un asistente que puede manipular los tubos de muestra. Es crucial un etiquetado preciso de las trompas con el número de paciente y el número de extracción secuencial de médula ósea.
- Seque bien el portaobjetos y luego realice la tinción de May Giemsa Grünwald (consulte la tabla de materiales). Examine bajo el microscopio óptico la morfología (ver Figura 1).
NOTA: En la Figura 1A se muestran los frotis de médula ósea sana que constan de diferentes tipos de células funcionales, mientras que en la Figura 1B se muestra un paciente con LMA con blastocitos predominantemente leucémicos. Para definir mejor la carga leucémica residual, es necesario realizar inmunofenotipado.
