Axoplasma de aislamiento de nervio ciático de rata

Summary

Demostramos un protocolo para el aislamiento de axoplasma del nervio ciático de rata adulta basada en la disección de los fascículos nerviosos y la incubación en un medio hipotónico para liberar la mielina y la lisis no axonal estructuras, seguido de la extracción del resto del axón material enriquecido.

Abstract

El aislamiento de citoplasma pura axonal (axoplasma) de los nervios periféricos es crucial para los estudios bioquímicos de muchos procesos biológicos. En este artículo, demostrar y describir un protocolo para el aislamiento de axoplasma del nervio ciático de rata adulta sobre la base de los siguientes pasos: (1) la disección de los fascículos nerviosos y la separación del tejido conectivo, (2) la incubación de segmentos cortos de fascículos nerviosos en medio hipotónico para liberar la mielina y la lisis no axonal estructuras, y (3) la extracción del resto del axón material enriquecido. Caracterización proteómica y bioquímica de esta preparación ha confirmado un alto grado de enriquecimiento para los componentes axonal.

Protocol

Este protocolo permite el aislamiento axoplasma con la minimización de la contaminación de los tejidos gliales y vasculares. El método de producción de aproximadamente 70-100 mg de proteína total por axoplasma un 80-10 semanas de edad, la rata Wistar.

1. Disecar los nervios ciáticos

1. La eutanasia a dos ratas por inhalación de CO ₂ seguido por dislocación cervical. Confirmar la muerte mediante la palpación de la falta de ritmo cardíaco antes de la disección principio.
2. Limpie el área de disección con etanol al 70%.
3. Cortar la piel, los músculos separar y aislar el nervio ciático con tijeras y pinzas c....

Discussion

Los análisis bioquímicos y proteómica han confirmado que este procedimiento reduce la contaminación de células gliales en suero y ³ en comparación con los métodos descritos anteriormente para el aislamiento de axoplasma por presión mecánica ^1. Hemos utilizado este protocolo de aislamiento para explorar axoplasma dineína basado en la señalización retrógrada después de la lesión del nervio ciático ^2, y esperamos que tenga utilidad en la exploración de muchos otros procesos en los nervios p.......

Materials