En este artículo se describen los procedimientos experimentales utilizados para preparar los tendones cola de rata para los estudios biomecánicos y mechanobiological. Varias características de los principales pasos en la preparación se ha demostrado, a partir de la extracción, corte transversal medida del área, el enjuague y la carga en la cámara del biorreactor.
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Artículo de método
Preparación de los tendones Cola de Rata de Estudios biomecánicos y Mechanobiological
En este artículo
Resumen
Resumen
Tendones cola de rata (RTT) son un modelo común biológicos utilizados en la experimentación en estudios in vitro en los campos de la fisiología del tendón y tendinitis. Trabajar con los tejidos es un reto porque son muy frágiles, y hasta ahora no había protocolo rigurosamente detallado de su aislamiento.
Frente a estos desafíos, hemos desarrollado métodos e instrumentos para facilitar la manipulación de RTT y el tejido de control de la viabilidad, la esterilidad y la integridad. En este artículo se describen los procedimientos experimentales utilizados para preparar RTT para los estudios biomecánicos y mechanobiological. Nuestro trabajo se divide en cuatro etapas: extracción, corte transversal medida del área, el enjuague y la carga en la cámara del biorreactor.
En cada paso, todos los procedimientos, materiales y manipulaciones se presentan en detalle para que puedan ser fácilmente reproducidas. Por otra parte, los instrumentos específicos desarrollados se presentan: una placa de manipulación utilizados para separar RTT, un micrómetro óptico para colocar el tejido en la medida del área transversal y un sistema de anclaje para fijar la RTT en un biorreactor.
Por último, se describen los resultados obtenidos después de múltiples pruebas para validar nuestros métodos. Evaluaciones de la viabilidad, la esterilidad y la integridad demostrar que nuestros procedimientos sean lo suficientemente rigurosos para la manipulación de los tejidos delicados, como los tendones de cola de rata.
Protocolo
Antes de cualquier manipulación, debe identificar el grupo de tendones que se utilizan en función de la experiencia que están llevando a cabo y el aparato a su disposición. Para nuestros propósitos, los tendones ventral fueron elegidos porque son más pequeños y por lo tanto más fáciles de manipular en la medición de la sección transversal y ajustándolas a la cámara del biorreactor.
Tenga en cuenta que todos los instrumentos son esterilizados en autoclave o con etanol al 70%. Por otra parte, una botella de aerosol que contiene 70% de etanol se coloca al lado de cada estación de trabajo para esterilizar los guantes experimentadores antes de....
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Discusión
Mediante la aplicación de los procedimientos experimentales, podemos realizar una gran variedad de estudios in vitro de este tipo de tejidos. Como por ejemplo, un estudio sobre la degeneración de los tejidos se llevó a cabo mediante la aplicación de los menores de la estimulación de RTT por un período de diez días. Cada día, se evaluaron las propiedades mecánicas del tejido en los ensayos no destructivos de relajación de tensiones. Al final, hemos sido capaces de observar la variación de estrés RTT y por lo tan.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Este artículo fue apoyada por NSERC # 299280 Grant, IRSST como una beca para los padres y G. FRSQ como un premio de investigación de estudiantes de pregrado de M. Cyr. Damos las gracias a Yoan Lemieux-Laneville para realizar las manipulaciones grabadas en video.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios | |
|---|---|---|---|---|
| D-PBS | Reactivo | Wisent Inc. | 311-410-CL | Solución salina |
| Glucosa | Reactivo | Wisent Inc. | 609-037-EL | Solución salina 1g/L |
| Antibióticos-antimicóticos | Reactivo | Invitrogen | 15240-062 | Solución salina 1% |
| DMEM | Reactivo | Invitrogen | 12800-017 | Solución de cultivo |
| Bicarbonato de sodio | Reactivo | Wisent Inc. | 600-105-CG | Solución de cultivo 3.7g/L |
| SFB | Reactivo | Wisent Inc. | 090150 | Solución de cultivo 10% |
| Antibióticos-antimicóticos | Reactivo | Invitrogen | 15240-062 | Solución de cultivo 1% |
| Micrómetro óptico | Herramienta | Hecho a medida | ||
| Placa de manipulación | Herramienta | Hecho a medida | ||
| Cámara del biorreactor | Herramienta | Hecho a medida |
Referencias
- Bennett, M. B., Ker, R., Dimery, N., Alexander, R. Mechanical properties of various mammalian tendons. J. Zool. Lond. A209, 537-548 (1986).
- Dupuis, D. Déshydratation de matrices collagéniques reconstruites in vitro: effets sur les propriétés mé....
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