Artículo de método

Preparación de inmunógeno ratón hipófisis para la inducción de la hipofisitis autoinmune experimental

DOI:

10.3791/2181

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17 de diciembre de 2010

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1Department of Pathology, The Johns Hopkins University

En este artículo

Resumen

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Hipofisitis autoinmune se puede reproducir en ratones mediante la inyección de un extracto de proteínas de ratón pituitaria.

Resumen

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Hipofisitis autoinmune es una inflamación crónica de la glándula pituitaria causado o acompañado por una autoinmunidad. Tradicionalmente se ha considerado una enfermedad rara, pero la información se ha incrementado notablemente en los últimos años. Hipofisitis, de hecho, no es raro desarrolla como un "efecto secundario" en pacientes con cáncer tratados con anticuerpos que bloquean los receptores inhibitorios expresa en los linfocitos T, tales como CTLA-4 2 y los receptores de PD-1. Hipofisitis autoinmune puede ser inducida experimentalmente mediante la inyección de ratones con las proteínas de la hipófisis se mezcla con un adyuvante 3. En este artículo de vídeo que muestra cómo extraer las proteínas de ratón glándulas pituitaria y la forma de prepararlos de forma adecuada para la inducción de hipofisitis autoinmune en ratones SJL.

Protocolo

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Protocolo experimental

El primer paso de este protocolo experimental es recoger un gran número de glándulas pituitarias de ratón. El segundo paso consiste en homogeneizar las glándulas para preparar un extracto de proteínas. El tercer paso es para emulsionar estas proteínas con una mezcla de hidrocarburos.

Paso 1: Recolección y almacenamiento de ratón glándulas pituitarias

La glándula pituitaria del ratón se encuentra en la base del cráneo en una depresión del hueso esfenoides llamada silla turca, rodeada lateralmente por los nervios trigémino y anteriormente por el quiasma óptico. La ....

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Discusión

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A pesar de que el primer paciente con hipofisitis autoinmune se informó en 1962 4, los autoantígenos patógenos hipófisis aún no se han identificado 5. Los modelos animales pueden ser muy útiles para identificar a estos autoantígenos, ayudar al descubrimiento de biomarcadores que son traducibles al cuidado del paciente. Este artículo ha demostrado un procedimiento sencillo para la preparación de proteínas de la hipófisis en una forma que es adecuada para la inducción de hipofisitis autoinmune en ani.......

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Divulgaciones

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No hay conflictos de interés declarado.

Agradecimientos

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Este trabajo fue apoyado por el NIH subvención DK080351 para PC.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
15 ml Tubos Falcon tampón
homogeneización
tamponado fosfato tamponado
Polytron homogeneizador
Ensayo BCAPierce, Thermo Scientific23225
rsquo; s Adyuvante (CFA)Sigma-AldrichF-5881
Mycobacterium tuberculosisBD Biosciences231141
2,5 mL Jeringa hermética al gas Hamilton Aguja
microemulsionadora de calibre 22
de cóctel de inhibidores de proteasa salina Complete Freund&

Referencias

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  1. Caturegli, P., Newschaffer, C., Olivi, A., Pomper, M. G., Burger, P. C., Rose, N. R. Autoimmune Hypophysitis Endocr Rev. 26, 599-614 (2005).
  2. Blansfield, J. A., Beck, K. E., Tran, K., Yang, J. C., Hughes, M. S., Kammula, U. S., Royal, R. E., Topalian, S. L., Haworth, L. R., Levy, C., Rosenberg, S. A., Sherry, R. M. Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 blockage can induce autoimmune hypophy....

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