Ensayo de coincubación para estudiar interacciones competitivas entre cepas bacterianas

Resumen

Fuente: Speare, L., et al. Ensayo de coincubación para cuantificar las interacciones competitivas entre aislados de Vibrio fischeri . J. Vis. Exp. (2019)

Este video muestra un ensayo de coincubación utilizado para estudiar cómo compiten las cepas bacterianas en un entorno compartido. Se aplica ampliamente en microbiología para identificar mecanismos, como la muerte dependiente o independiente del contacto, que impulsan estas interacciones.

Protocolo

1. Cepas en coincubación (Figura 1B, C)
   1. Mezcle la cepa de referencia y la cepa de la competencia en una proporción de 1:1 (v/v) agregando 100 μL de cada cepa (normalizada a OD 1.0) a un tubo de centrífuga marcado de 1.5 ml. Como control, mezcle la cepa de referencia con una versión etiquetada diferencialmente de sí misma (cepa de referencia pVSV102 + cepa de referencia pVSV208). Este control es necesario para un análisis estadístico posterior para determinar si la presencia de una cepa competidora afecta el crecimiento de la cepa de referencia. Agite el cultivo de cepas mixtas durante 1-2 s.
      NOTA: Este paso p....

Resultados

Figura 1: Diagrama de flujo que ilustra el ensayo de coincubación. (A) Las cepas bacterianas que albergan pVSV102 (cepa de referencia indicada Ref. Strain o R.S.) o pVSV208 (cepa de la competencia indicada Comp. Strain o C.S.) se cu.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Tubos de microcentrífuga de 1,5 ml	Pescador	05-408-129
Pipeta multicanal de 10 μL
Pipeta multicanal de 100 μL
Pipeta multicanal de 300 μL
Pipeta monocanal de 10 μL
Pipeta monocanal de 20 μL
Pipeta monocanal de 200 μL
Pipeta monocanal de 1000 μL
Placas de 24 pocillos	Pescador	07-200-84	estéril con tapa
Placas de Petri	Pescador	FB0875713	estéril con tapa
Sistema de arranque TipOne de 0,1-10 μl	USA Científico	1111-3500	10 bastidores
Sistema de arranque TipOne de 200 μl	USA Científico	1111-500	10 bastidores
Sistema de arranque TipOne de 1000 μl	USA Científico	1111-2520	10 bastidores
Medios LBS
Tampón Tris de 1 M (pH ~7,5)			50 ml de tampón de 1 M (62 ml de HCl, 938 ml de agua desionizada, 121 g de base de Trizma)
Agar-agar	Técnico Fisher	DF0812-17-9	15 g (Añadir solo para platos)
Agua desionizada			950 ml
Cloruro de sodio	Pescador	S640-3	20 gramos
Triptona	Pescador	BP97265	10 gramos
Extracto de levadura	Pescador	BP9727-2	5 gramos