Un ensayo in vitro para estudiar las interacciones microbianas en cocultura

Resumen

Fuente: Temkin, M. I. et al. Ensayos de cocultura de alto rendimiento para la investigación de interacciones microbianas. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo muestra un ensayo in vitro para estudiar las interacciones microbianas entre Corynebacterium propinquum y Staphylococcus en un cocultivo.

Protocolo

1. Inoculación de organismos objetivo

NOTA: Tras la incubación nocturna, asegúrate de que los cultivos estén turbios. Algunos cultivos bacterianos pueden flocular en la parte inferior del tubo de cultivo. Vierte los tubos de cultivo para dispersar los grupos y evaluar la turbidez del cultivo.

1. Prepara la placa objetivo llenando cada pozo de una placa vacía de 12 pozos con 1,8 mL de caldo de infusión cerebro-corazón (BHI) y 200 μL del cultivo blanco durante la noche.
   NOTA: Un organismo objetivo se refiere al organismo cuyo estado de inhibición se determina mediante el ensayo de interacción de co-cultivo. Para este experimento, los organismos objetivo son especies de Staphylococcus aisladas de muestras de lavados nasales humanos.
2. Desenvuelva y coloca un sello de inoculación estéril en la placa objetivo. Haz girar suavemente los cultivos en los pozos, asegurándote de que no contaminen los pozos vecinos.
3. Levanta el sello de inoculación y asegúrate de que haya una gota de cultivo diana diluida en cada punta del sello.
4. Prepara una placa de control de monocultivo colocando el sello de inoculación sobre una placa de bioensayo no inoculada y balancea suavemente el sello para que una gota de cultivo inocule cada pozo. Una vez retirado el sello de inoculación, una gota de cultivo debería verse en los pozos de la placa de bioensayo.
   1. Si algún pozo no está inoculado con el sello de inoculación debido a niveles desiguales de medio, pon 3 μL de cultivo diluido durante la noche en el lado derecho de los pozos usando una pipeta.
5. Inocular las placas de bioensayo como se ha hecho anteriormente (véase el paso 1.4.1), pero alinear el sello de modo que las puntas se alineen con el lado derecho de la placa de 12 pozos. Asegúrate de que el sello no toque la colonia bacteriana existente al inocular los pozos.
6. Retira cuidadosamente el sello y colócalo de nuevo en la placa objetivo.
7. Repite la inoculación para cada placa de bioensayo hasta que todas las placas estén inoculadas.
8. Incuba las placas de bioensayo boca abajo a la temperatura adecuada durante 7 días.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Placa de cultivo celular de 12 pozos, estéril con tapa	Bio-uno de Greiner	665 180
Agar, bacteriológico	VWR	J637
Caldo de infusión cerebro-corazón	Dot Scientific	DSB11000-5000