Evaluación de la colonización radicular de plántulas de tomate por una bacteria patógena utilizando recuentos celulares viables

Resumen

Fuente: Matthysse, A. G. Adherencia de bacterias a superficies vegetales medida en laboratorio. J. Vis. Exp., (2018)

Este vídeo demuestra un protocolo para medir la colonización radicular de plántulas de tomate por bacterias patógenas silvestres y deficientes en celulosa. Los recuentos viables de bacterias que se adhieren estrechamente muestran una mayor adhesión y formación de microcolonias por parte de la cepa silvestre, lo que pone de manifiesto el papel de la celulosa en la colonización radicular estable.

Protocolo

1. Medición de la adhesión utilizando recuentos celulares viables

1. Determinar el número de bacterias viables unidas a plantas cultivadas en arena
   1. Retira la planta del contenedor y arena. Para retirar plantas de los contenedores, primero retira el material sellante de la parte superior y inferior del recipiente. Coloca el recipiente sobre un trozo de papel estéril y retira suavemente toda la arena o tierra y planta como un gran cilindro cónico, golpeando suavemente el recipiente contra una superficie para aflojar el material.

1. Si es necesario, utiliza una espátula o varilla para aflojar el material alrededor de los bordes que entra por el fondo del recipiente.

2. Cuando el cilindro de arena o tierra que contiene la planta esté libre sobre el papel, diráyelo por la mitad para revelar la raíz de la planta. Si lo deseas, toma muestras de arena cerca del borde del recipiente así como cerca de la raíz. Esto puede ser útil para determinar la propagación (y la acumulación y crecimiento) de la bacteria.
3. Mide la longitud de la raíz. Recoge la raíz y elimina la arena y las bacterias que se adhieren flojamente a la raíz (el material de la rizosfera) sumergiendo la raíz en un volumen medido de agua o amortiguador y agitándola suavemente. Determina el recuento celular viable de las bacterias en la suspensión resultante mediante la placas sobre un medio adecuado como el agaro Luria. Esto representa el número de bacterias asociadas de forma vaga con la raíz.
4. Elimina las bacterias fuertemente unidas mediante sonicación y determina su número.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Semillas	Cualquiera	N/A	Anota el número de lote de semillas y el cultivar
Arena	Fisher Scientific de arena marina	S25
Arena	Sigma-Aldrich	S9887
Coneiners	Stuewe & Sons, Inc.	Cone-tainers de Ray-Leach	Hay muchos tamaños diferentes disponibles para adaptarse al tipo de planta que deseas cultivar
Sonicador de baño	Cualquier empresa de suministros científicos	N/A
Parafilm	Cualquier empresa de suministros científicos	N/A