Médula Espinal Electrofisiología II: Fabricación de electrodos de aspiración extracelular

Resumen

Una demostración de la fabricación y el uso de un electrodo de succión extracelular para medir los registros electrofisiológicos de los cables de la columna vertebral de roedores recién nacidos In vitro

Resumen

Desarrollo de circuitos neuronales y la locomoción pueden ser estudiados usando roedores recién nacidos la médula espinal centro generador de patrones (CPG) de comportamiento. Demostramos un método para la fabricación de electrodos de succión que se utilizan para examinar la actividad de GPC, o la locomoción ficticia, en los cables de roedores disecados espinal. Los cables de la columna vertebral de roedores se colocan en líquido cefalorraquídeo artificial y las raíces ventrales son atraídos hacia el electrodo de succión. El electrodo se construye mediante la modificación de un electrodo de succión disponible en el mercado. Un hilo de plata pesada se utiliza en lugar del cable estándar proporcionada por el electrodo en el comercio. La punta de vidrio del electrodo comercial se sustituye con una punta de plástico para mayor durabilidad. Preparamos la mano electrodos dibujados y electrodos hechos de tamaños específicos de tubos, lo que permite la consistencia y la reproducibilidad. Los datos se recopilaron mediante un amplificador y un software de adquisición de neurogram. Las grabaciones se realizaron en una mesa de aire dentro de una jaula de Faraday para evitar la interferencia mecánica y eléctrica, respectivamente.

Protocolo

Registros electrofisiológicos de la médula espinal aislada puede revelar cambios genéticos y del desarrollo de circuitos neuronales ^1. Hemos demostrado previamente un método para analizar los cables neonatal espinal de ratón ^2. Aquí presentamos un método para preparar electrodos de succión útil en la grabación de la locomoción ficticia en la médula espinal aislada ^3.

La punta de un electrodo de un tubo de plástico se pueden extraer de una punta muy fina a mano usando una lámpara de alcohol de baja temperatura ^3.5. El tubo de plástico (PE90, Clay Adams Intramedic ^TM) se lleva a cabo so....

Discusión

Desarrollo del sistema nervioso pueden ser estudiados usando los cables aislados de roedores espinal. En presencia de los neurotransmisores, la locomoción ficticia puede ser generada a partir de la médula espinal en forma de patrones de actividad eléctrica ^1,3. Estas explosiones rítmicas se producen en el 0,2 a 0,5 Hz y siguen el modelo de alternancia izquierda-derecha y flexor extensor. En diferentes etapas de desarrollo, la solidez y los patrones de esta actividad varía de ^1. Las mutaciones genét.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Tubo de PTFE de pared delgada (tubo pequeño)	Zeus	36AWG	0.005”ID x 0.003” de pared (piezas pequeñas). También disponible de 0.003” a 0.006”
Tubo grande (0.86 mm (0.34”))	BD Biosciences	427420	0.86 mm (0.34”) de diámetro exterior, 1.27 mm (0.050”)
Cuerpo del electrodo	A-M Systems	573000
Adhesivo	JB Weld
Adhesivo: silicona tipo sellador
Estaño y soldador
Lejía
Xileno
Alambre de plata: 0.010”	A-M Systems
Alfileres para insectos: Austerlitz 0.1 mm	Fine Science Tools	26002-10
Soporte magnético	Narishige International	GJ-8
Micromanipulador	Narishige International	MN 151
Minibanco (etapa de cabezal)	Grass Technologies	F-15EB/B1
Unidad adaptadora Polyview	Grass Technologies	PVA 8
Sistema amplificador fisiológico bipolar portátil	Grass Technologies	15LT
TARJETA ANALÓGICA A DIGITAL	National Instruments	6035E
Mesa antivibraciones; Vibraplane	Kinetic Systems