Evaluación de la glándula mamaria de desarrollo y función en modelos de ratón

Resumen

Este método describe la forma de analizar y evaluar el desarrollo de la glándula mamaria y la función de los ratones. Extirpado las glándulas mamarias son evaluados por el grado de desarrollo con montaje completo, mientras que la eyección de leche se evaluó mediante un ensayo basado en la oxitocina contracción de las células mioepiteliales.

Resumen

La glándula mamaria humana se compone de lóbulos 15-20 que secretan la leche en un sistema de apertura de ramificación del conducto en el pezón. Los lóbulos se compone de un número de unidades del terminal del conducto lobular hecho de los alvéolos secretores y conductos de convergencia ^1. En ratones, una arquitectura similar se observa en el embarazo en la que los conductos y los alvéolos se intercalan en el estroma del tejido conjuntivo. El epitelio de la glándula mamaria del ratón es un árbol como el sistema de conductos compuesto por dos capas de células, una capa interna de células luminales rodeado por una capa externa de células mioepiteliales denotada por los confines de una membrana basal ^2. Al nacer, sólo un árbol ductal rudimentario está presente, compuesto por un conducto de las ramas primarias y 15-20. Rama de elongación y empezar de amplificación en el comienzo de la pubertad, alrededor de 4 semanas de edad, bajo la influencia de las hormonas ^3,4,5. A las 10 semanas, la mayoría de la estroma es invadido por un complejo sistema de conductos que se someten a ciclos de ramificación y de regresión en cada ciclo estral hasta el embarazo ^2. En el inicio del embarazo, una segunda fase de desarrollo se inicia, con la proliferación y diferenciación del epitelio de uva para formar estructuras en forma de secreción de leche, llamados alvéolos ^6,7. Siguientes al parto y durante la lactancia, la leche es producida por las células secretoras luminal y se almacena en el lumen de los alvéolos. La liberación de oxitocina, estimulada por un reflejo neural inducida por la lactancia de las crías, induce contracciones sincronizadas de las células mioepiteliales alrededor de los alvéolos y por los conductos, permitiendo que la leche que se transporta a través de los conductos hacia el pezón, donde esté disponible a los ⁸ cachorros. Desarrollo de la glándula mamaria, diferenciación y función están fuertemente orquestado y que requieren, no sólo las interacciones entre el estroma y el epitelio, sino también entre las células mioepiteliales y luminal del epitelio ^9,10,11. Por lo tanto, las mutaciones en muchos genes implicados en estas interacciones pueden afectar tanto el alargamiento ductal durante la formación de la pubertad o los alvéolos durante el embarazo temprano, la diferenciación durante la última etapa del embarazo y la activación secretora que conduce a la lactancia ^12,13. En este artículo se describe cómo diseccionar las glándulas mamarias de ratón y evaluar su desarrollo el uso de bases conjunto. También demostramos cómo evaluar las contracciones mioepiteliales y eyección de la leche con un ex-vivo oxitocina basado en análisis funcional. El efecto de una mutación genética en el desarrollo de la glándula mamaria y la función de lo que se puede determinar in situ mediante la realización de estas dos técnicas en el control de ratones mutantes y de tipo salvaje.

Protocolo

1. Disección de la glándula mamaria

1. Practicar la eutanasia con el ratón usando inhalación de CO _2. Evitar la dislocación cervical, si es posible, ya que puede dañar los vasos sanguíneos importantes en el cuello y el resultado de la acumulación de sangre alrededor de las glándulas mamarias, lo que hace la disección más difícil. Sin embargo, si otros criterios que se evaluarán en el mismo ratón, tales como los niveles de oxitocina, métodos alternativos de la eutanasia puede ser necesaria, aunque esto debe ser evaluado por su IACUC.
2. En una espuma de poliestireno envueltos en papel de aluminio, colocar el ratón sobre la espalda y la propag....

Discusión

Desarrollo de la glándula mamaria y la función están muy orquestada. Los ratones mutantes pueden albergar las mutaciones genéticas que pueden afectar el desarrollo de la glándula mamaria y la función de resaltar la necesidad de evaluar la arquitectura glándula ^13,12. Montaje de todo se puede realizar como se describe en este artículo en todas las etapas de desarrollo de la glándula mamaria. Normalmente, el desarrollo del epitelio se aprecia en el comienzo de la pubertad (~ 4 semanas de edad), en el centro de .......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Reactivo	Empresa	Número de catálogo
Carmín	Sigma-Aldrich	C1022
De aluminio sulfato de potasio	Sigma-Aldrich	A6435
Timol	Sigma-Aldrich	T0501
Salicilato de metilo	Sigma-Aldrich	M6752
La oxitocina	Sigma-Aldrich	O3251