En este artículo se describen los procedimientos para la realización de un examen post-mortem básicos de un ratón o una rata, y el conjunto de órganos de base, así como más tipos de muestras reto de la evaluación histológica, microbiológicos y PCR.
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Artículo de método
La necropsia de diagnóstico y selecta colección de tejidos y muestras en ratas y ratones
En este artículo
Resumen
Resumen
Hay varios tipos de muestras que pueden ser recogidos a partir de un animal sacrificado con el fin de ayudar a diagnosticar o descubrir los agentes infecciosos en una colonia de animales. Recolección adecuada de los tejidos para su procesamiento histológico más puede afectar la calidad de los resultados de las pruebas. Este artículo describe la realización de un examen básico bruto incluyendo la identificación de corazón, hígado, pulmones, riñones y bazo, así como la forma de recoger esos órganos. Además cuatro de las técnicas de recolección más difícil del tejido / muestra se demuestran. Colección de pulmón y de la perfusión puede ser particularmente difícil ya que el tejido tiene que ser debidamente infladas con un fijador para que el interior de los tejidos para fijar correctamente y para permitir la evaluación histológica completa. En este artículo se demuestra el paso a paso la técnica para extirpar el pulmón y se inflan con el fijador con el fin de lograr una fijación óptima del tejido dentro de las 24 horas. Colección del cerebro puede ser igualmente un reto ya que el tejido es suave y se dañan fácilmente. En este artículo se demuestra el paso a paso la técnica para exponer y extraer el cerebro del cráneo con el mínimo daño a los tejidos. El ganglio linfático mesentérico es un tipo buena muestra de que muchos de detectar agentes infecciosos comunes como los virus entéricos persisten por más tiempo en los ganglios linfáticos de lo que se eliminan en las heces. En este artículo se demuestra el procedimiento paso a paso para localizar y aséptica retirar los nódulos linfáticos mesentéricos. Finalmente, la identificación de agentes infecciosos de las vías respiratorias se puede realizar por cultivo bacteriano o la prueba de PCR de la nariz y / o bronquial líquido aspirado tomadas en la necropsia. Este procedimiento describe la obtención y preparación de la muestra de aspirado de las vías respiratorias para cultivo bacteriano y PCR.
Protocolo
1. Preparación para la necropsia
- Partes importantes de cualquier examen post-mortem bruto (bruto necropsia) es la historia de los animales y la descripción de los hallazgos.
- Un patólogo veterinario de leer las diapositivas histopatología no haber visto al animal y confía en que la información de fondo.
- Describir exactamente lo que se ve antes de sacrificar al animal. Por ejemplo, "ratón hembra, una de las cinco de la jaula; C57BL/6N, la cabeza inclinada hacia la derecha" o "rata macho marrón; cepa desconocida, animal se rasca, se produce una pérdida parcial del cabello en el dorso, cerca de la cola y la cabeza ".
- Use un lengua....
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Discusión
La recolección de datos al final de un estudio puede requerir un examen post-mortem de los animales. Describen bien lo que se ve y recordar a examinar todos los tejidos. Estos procedimientos están diseñados principalmente para optimizar la necropsia y toma de muestras para la vigilancia de las enfermedades infecciosas, pero la mayoría se adaptan fácilmente a las investigaciones se centraron de los incidentes de sospecha de enfermedad o de brotes en los que sería tal vez sólo un subconjunto de los procedimientos empleado.......
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Divulgaciones
Los autores son todos los empleados del laboratorio Charles River de roedores de laboratorio de diagnóstico, donde estos servicios se ofrecen comercialmente.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Reactivo nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
| Tabla de cortar | Thermo Electron Corp Cat. # 36114 | Cat # 36114 | |
| Tijeras pequeñas | Roboz | RS-5910, G204 | Hojas de 23 mm, 3,5 "de largo, recto |
| Tijeras medianas | Roboz | RS-6808, G207 | 5 " |
| Tijeras grandes | Roboz | RS-6826, G65 " | 6.25 " |
| Fórceps curvo | Roboz | RS-8254 (M1/21004) | 4.5 ", serrado, ligera curva |
| Fórceps Microdissecting | Roboz | RS-5238 | Hudson (Ewald) |
| Tejidos fórceps pinzas | Roboz | RS - 8160 | Diente de ratón |
| Llama esterilizador | Oxford material de laboratorio Productos | Bacti-incinerador # 5889-001007 | |
| Bisturí | Diagnóstico del Cáncer, Inc. | Dedo Escalpelos # 60, Cat. # FS0060 | |
| Pipetas | VWR | Pasteur Pipetear 5 3 / 4 ", Cat # 14672-400 | |
| Bolsas de autoclave | Manufacturing Company adecuada | Bolsa de bolsas de papel esterilizador Cat. # 021002 (3100923) E09110 | Para pipetas Pasteur |
| Pipeta de bulbo | VWR | Cat. # 56310-240 | |
| Tubos Eppendorf | Sarstedt | 2 ml SafeSeal microtubo, Ref # 72,695 | |
| Tubos Eppendorf | Argos | Gato microtubo 5mL # T20765-C | |
| Jeringa | BD (Beckton Dickinson) | 1 ml, 3 ml 309.602-300.910-309.603 5 ml 10 ml Cat. # 309604 # 309661 Gato 20 ml | |
| Agujas | BD | 26G-18G-309625 305195 | |
| Formol tamponado neutro | VWR | 20L 10% NBF, Cat # 16004-128 | |
| Salina | ThermoScientific | Banco de Sangre Buffered Saline, Cat # 23-309-178 | |
| Tripticasa de soja caldo | Becton Dickenson | TSB: gato deshidratado, # 211825 | |
| Tampón fosfato salino | Sigma Aldrich | HA Buffer, Cat # P3813-10PAK | |
| Tazas de formol | VWR | Cat. 4 oz # 36318-852 8 oz Cat. # 36318-860 16 oz Cat. # 36318-858 | |
| Grandes vasos de formol | Oakridge Productos | 32 oz contenedor Gato # 0432-1100 | |
| Adicional taza de formol grandes | VWR | HDPE gato multipropósito de contenedores 160 oz # 89038-282 | |
| Material de sutura | Henry Schein | Sutura de seda trenzada quirúrgica, Ref # 100-5000, M766750 | Para la inflación de pulmón de ratón |
| Hilo | Grapas | Cat # QUA-46173 | Para la inflación de pulmón de rata |
Referencias
- AVMA. AVMA Guidelines on Euthanasia. , (2007).
- Feldman, D. B., Seely, J. C. Necropsy Guide: Rodents and the rabbit. , CRC Press. (1988).
- King, J. M., Dodd, D. C., Roth, L. The Necropsy Book. , 4th edn, C.L. Davis Foundation. (2006).
- Kittel, B. <....
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Reimpresiones y permisos
