Extracción de riñón intacto de ratón: una técnica para obtener riñón sin cápsula renal a partir de modelos murinos

Resumen

Fuente: Grainger, N. et al. Aislar e Imagen de Regiones de Marcapasos Vivas e Intactas de la Pelvis Renal de Ratón mediante Seccionamiento de Vibratome. J. Vis. Exp. (2021)

En este video, describimos el procedimiento para la extracción de riñón del espacio retroperitoneal del ratón. El riñón extraído se puede microdiseccionar para obtener un riñón intacto sin una cápsula renal y la capa de grasa circundante.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Disección de riñón

1. Anestesiar a los ratones mediante la inhalación de isoflurano al 3-4% en una capucha ventilada. Confirmar la inducción de la anestesia profunda por pérdida del reflejo de pinzamiento del dedo del pie y/o de la cola y luego sacrificar a los ratones por luxación cervical.
2. Aplique etanol al 70% en el pecho para humedecer el pelaje. Con unas tijeras de disección externas, abra la cavida....

Resultados

Figura 1: Anatomía básica del riñón y localización de la región del marcapasos PKJ.(A) Diagrama del riñón intacto que muestra la orientación del PR y el uréter. La arteria renal y la vena renal se muestran en rojo y azul, respectivamente. (B) El riñón intacto se puede cortar a lo largo de un plano sagital para exponer el aspecto interno del riñón, incluida la médula,.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Placa de Petri de 60 mm x 15 mm	Sigma Aldrich	P5481	Plato de disección afilada de riñón
Papel absorbente	Fisher Científico	06-666A	Para secar el riñón antes de aplicar cola
B6; 129S-GT(ROSA)26Sor/J	El Laboratorio Jackson	13148	Ratones GCaMP3
B6; 129S-GT(ROSA)26Sor/J	El Laboratorio Jackson	24105	Ratones GCaMP6f
B6. FVB-Tg(Myh11-cre/ERT2)1Soff/J	El Laboratorio Jackson	Año 19079	Ratones smMHC-CRE
C57BL/6-Tg(Pdgfra-cre)1Clc/J	El Laboratorio Jackson	13148	Ratones PDGFRa-CRE
etanol	Phamco-Aaper	SDA 2B-6	Para la disección
Tijeras Bonn extrafinas	Herramientas de Bellas Ciencias	14083-08	Se utiliza para tijeras de disección internas
Tijeras finas	Herramientas de Bellas Ciencias	14060-09	Se utiliza para tijeras de disección externas
Pinzas de punta fina	Herramientas de Bellas Ciencias	11254-20	Se utiliza para la disección fina del riñón
Isoflurano	Baxter	NDC 1001936060	Para la anestesia
Elastómero de silicio	Fisher Científico	NC9285739	Sylgard 184
Pinzas de Adson para estudiantes	Herramientas de Bellas Ciencias	91106-12	Para sujetar y mover suavemente el riñón
Pinzas Dumont para estudiantes	Herramientas de Bellas Ciencias	91150-20	Se utiliza para pinzas de disección internas
Tijeras de resorte Vannas	Herramientas de Bellas Ciencias	15000-03	Para la disección y limpieza agudas de riñón aislado